Спосіб моделювання вторинного гіпогонадизму

Спосіб моделювання вторинного гіпогонадизму, що включає введення в організм тварини антибіотика антрациклінового ряду, який відрізняється тим, що статевозрілим самцям мишей лінії ICR віком 5-6 міс. вводять ін’єкційно внутрішньочеревинно адріабластин у дозі 2-5 мг/кг двократно по половині сумарної дози з інтервалом 7 днів. (19) (21) u200603542 (22) 03.04.2006 (24) 15.09.2006 (46) 15.09.2006, Бюл. № 9, 2006 р. (72) Запорожан Валерій Миколайович, Холодкова Олена Леонідівна, Пихтєєв Дмитро Михайлович, Перепелюк Микола Миколайович (73) ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 17287 дозі 2-5мг/кг, двократно по половині сумарної дози з інтервалом 7 днів. Спосіб виконується наступним чином. Миша фіксується за шкіру потилиці першим та другим пальцями руки експериментатора, а також за хвіст - п’ятим пальцем руки експериментатора. Розчин адріабластину, об’ємом 0,2мл, що містить 0,0250,0625мг діючої речовини (з розрахунку на масу миші 25г) вводять інсуліновим шприцем з інсуліновою голкою, відступивши на 1-2мм від складки шкіри між серединою стегна (задньої лапки) та черевцем під кутом 30-45 градусів до поверхні черевця, орієнтуючи голку в напрямку шиї тварини, вводячи до появи відчуття провалу (зазвичай на 3-4мм). Після ін’єкції миша утримується в клітці по 4-5 тварин на загальному харчовому раціоні з вільним доступом до їжі та води. Повторна ін’єкція адріабластину виконується через 7 днів після першої, доза лишається тією ж, що і перший раз; сумарна доза складає 0,050,125мг, тобто 2-5мг/кг. Морфологічні зміни в яєчках мишей реєструються з 10-го дня від 1-ої ін’єкції адріабластину - з цього часу миша може бути використана як модель вторинного гіпогонадизму. Виведення тварин з експерименту проводять шляхом дислокації шийних хребців чи іншим способом евтаназії. Виділені тестікули фіксують в 10% розчині нейтрального формаліну. Парафінові зрізи завтовшки 3-5мкм, забарвлюють гематоксиліном та еозином і досліджують з використанням світлового мікроскопа. Проведені дослідження показали, що відносна маса яєчок мишей від моменту введення адрібластину прогресивно зменшувалася і на 30-й день експерименту зменшилася в два рази. Комп’ютерна верстка О. Чепелев 4 Морфологічна картина яєчок мишей представляла собою гетерогенну структуру, в якій, поруч з одиничними інтактними канальцями, зустрічається велика кількість канальців з практично повною відсутністю сперматогоній (5% від нормальної кількості), інколи навіть при збереженості інших клітин сперматогенного епітелію. При морфометричному дослідженні виявлено зменшення щільності клітин Лейдига у 3 рази в порівнянні з контролем. Дослідження рівня гормонів сироватки крові показали, що на 10-й день після введення адріабластина у мишей різко знизився рівень тестостерону, у подальшому - рівень тестостерону дещо підвищився, але не досягав рівня контрольної групи. В порівнянні з прототипом, запропонований спосіб дозволяє спричинити прямий токсичний вплив як на клітини Лейдига, порушуючи гормональний фон організму мишей, так і на сперматогенний епітелій, приводячи до атрофії яєчок на протязі відносно короткого часу, за рахунок застосування антибіотика антрациклінового ряду - адріабластину, в оптимізованій дозі, що не призводить до розвитку тяжкого токсичного ураження організму тварини. Література: 1. Патогенетические аспекты мужской субфертильности как причины репродуктивных потерь. Журнал «Проблемы репродукции». - 1999. - №6. - С.22-28. 2. Plassmann S, Urwyler H. Improved risk assessment by screening sperm parameters. Toxicol. Lett. 2001; 119 (2): P.157-171. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601