Спосіб виділення комплексу дестабілаза-простаноїд з медичної п’явки

Способ выделения комплекса дестабилаза -простаноид из медицинской пиявки, включающий очистку обработанного сырья, отличающийся ткм, что обработанное сырье подвергают многократной экстракции органическим растворителем, после чего жирорастворимую фракцию собирают и упаривают. _______________________ Зоя Приводим примеры осуществления спо (13) 37238 (11) UA Пример 1. 5 мл секрета слюны пиявок дважды экстрагируют трехкратным объемом этилацетата при рН 7,4. Собирают жирорастворимую фракцию, упаривают в ро торном испарителе, растворяют в 0,05 М трис-НСl буфере рН-8,4. Конечный продукт обладает фибринолитической активностью, содержит проста ноид, не имеет активность гируди на и ингибитора калликреина. При электрофорезе проявляется в ви де одной полосы с ММ 12,3 кДа (таблица). Пример 2. Все процедуры, как в примере 1, но в качестве сырья использовали экстракт бактерии-симбионта в количестве 8 мл, а экстракцию проводили 3 раза, трехкратным объемом хло роформа. Полученный препарат соответствуе т целевому продукту. Пример 3. Все процедуры как в примере 1, но в качестве сырья использовали водный экстракт лиофильно высушенных пиявок и проводили четырехкратную экстракцию смесью хлороформэтилацетат (1:1). Также соответствие целевому продукту. Пример 4. Все, как в примере 1, но была произведена однократная экстракция трехкратным объемом этилацетата. Активности целевого продукта снижены на 50% из-за неполного экстрагирования органическим растворителем комплекса дестабилаза-простаноид из секрета пиявок (см. таблицу). Преимущества способа заключаются в повышении объема выхода целевого продук та и его чистоты. C2 соба. (19) Изобретение относится к медицине и может применяться в биохимии, ге матологии, медицине и медицинской промышленности. Известен способ получения дестабилаэы из пиявки, взятый нами в качестве прототи па (1), включающий аффинную хроматографию на Lлизине, иммобилизированном на водонерастворимом носителе, элюацию целевого продукта, нейтрализацию элюата и лиофилизацию. Однако получен ный данным способом продукт не является гомогенным препаратом, т.к. содержит в своем составе гирудин и ингибитор калликреина, к тому же не вся деста билаза связывается с Lлизином. В основу изобретения поставлена задача создания способа выделения комплекса дестабилаза-простаноид из медицинской пиявки, в котором обеспечивается увеличение выхода конечного продукта и повышение его чистоты. Поставленная задача решается тем, что в способе выделения комплекса дестабилазапростаноид из медицинской пиявки, содержащем очистку обработанного сырья, согласно изобретению обработанное сырье подвергают многократной экстракции органическим растворителем, после чего жирорастворимую фракцию собирают и упаривают. Способ осуществляют следующим образом. Обработанное сырье (секрет желез медицинской пиявки, лиофили зат, бактерию-симбионт) очищают, экстрагируют ор ганическими растворителями не менее 2-х раз, далее жирорастворимую фракцию собирают и упаривают до сухого остатка. . 37238 Характеристика дистабилазы, полученной по предлагаемому способу и способу – прототипу Параметр определения Прототип 1 Ак тивность дестабилазы (м/мг) Со держание простагландинов (наногр/мг) Активность гирудина (ATNIH Un/mg) Активность ингибитора калликреина (АПК Ед/мг) Вы ход целевого продукта (%) Наличие полос на элeктрофорограммах образце дестабилазы Пример 2 3 4 24 73 60 65 14 600 50 1650 0 1540 0 1600 0 300 0 46 45 50 12,3 25 6 0 100 0 100 0 100 0 50 12,3 12,3 12,3 12,3 Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03 2