Спосіб очищення та концентрування вірусу ентериту гусей
Номер патенту: 60381
Опубліковано: 25.06.2011
Автори: Музика Наталія Миколаївна, Безрукава Інна Юріївна, Шомін Олександр Анатолійович, Семенченко Олександр Юрійович, Циновий Олексій Васильович, Білецька Ганна Василівна
Формула / Реферат
Спосіб очищення та концентрування вірусу ентериту гусей, що включає очищення та концентрування парвовірусу гусей з використанням ценрифугування вірусного матеріалу з ПЕГ-6000 (поліетиленгліколем), обробку його ультразвуком та детергентом та ультрацентрифугуванням через градієнти густини сахарози-хлористого цезію, який відрізняється тим, що використовується лінійний градієнт сахарози-хлористого цезію (10-50 % сахароза з 35 % хлористого цезію) і сумісне застосування в одному способі очищення вірусу м'якого неіонного детергенту нонідет Р-40 та дії ультразвуку.
Текст
Спосіб очищення та концентрування вірусу ентериту гусей, що включає очищення та концент 3 Спосіб виконується таким чином. Для отримання очищеного антигену (парвовірусу гусей) використовують культуральну розплідку штаму BBS-99 з титром 7,5-8,5 lg ТЦД 3 50/см . Культуральна рідина утримується з 8 % ПЕГ-6000 (поліетиленгліколь) від загального об'єму 16 год. за температури 4 °С. Культуральна розплідка центрифугується з 8 % ПЕГ протягом 20 хв. при 16000 xg (кутове прискорення) за температури 5 °С. Отримані осади ресуспензуються у TSEбуфері (рН 7,6). На наступному етапі вірусна суспензія піддається диспергації ультразвуком частотою 22 кГц протягом 80 сек. Надалі ресуспензовані проби з вірусом центрифугуються на ультрацентрифузі через 30 % сахарозу при 76000 xg за температури 4 °С. Осади знову суспендують у TSE-буфері. До вірусної суспензії додають м'який неіонний нонідет Р-40 (NP-40) у кількості 1 % від загального об'єму проби і витримують з пробою протягом 30 хв. за температури 4 °С. Далі вірусну суспензію нашаровують на градієнт густини 10-50 % сахарози з 35 % хлори3 стого цезію (питома густина 1,038-1,439 г/см ) і центрифугують на ультрацентрифузі протягом 4 год. при 90000 xg за температури 4 °С. Після центрифугування градієнти скануються на проточному спектрофотометрі при довжині хвиль 280 нм. За результатами сканування (на самописці за піком Гаусової кривої) відбирається основна фракція. Цю фракцію повторно переосаджують через 30 % сахарозу, отримані осади ресуспензують в TSEбуфері (рН 7,6) в об'ємі 1:200 від вихідного. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 60381 4 Одержаний цим способом антиген є специфічним та ефективним при виготовленні діагностикумів ІФА для виявлення антитіл до вірусного ентериту гусей. Високий рівень очищення і концентрування підтверджується проведенням електронної мікроскопії та електрофорезу у поліакриламідному гелі отриманих зразків вірусу. Джерела інформації: 1. Ерофеев С.Г., Борисов В.В., Байбиков Т.З. Концентрирование парвовируса свиней ультрафильтрацией //Сборник материалов научнопрактической конференции «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы». - Киров, 23-25 мая 2001 г. - С. 23-24. 2. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Маслов Д.В. Оценка поствакцинального иммунитета при вирусном энтерите гусей методом иммуноферментного анализа //Материалы международной научнопрактической конференции, посвященной 110летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России 21-22 сентября 2006 г. С. 200-206. 3. Фадель Г.А., Надточий Л.М., Контримавичус А.В. Метод ИФА для диагностики вирусного энтерита гусей //Ветеринария. - 1989. № 7. - С. 36-39. 4. Патент UA 69104, A61K39/00. Спосіб одержання антигену для діагностики вірусного ентериту гусей в реакції імуноферментного аналізу Опубл. 16.08.2004, Бюл. № 8. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for purification and concentration of the enteritis virus of geese
Автори англійськоюTsynovyi Oleksii Vasyliovych, Semchenko Oleksandr Yurievich, Muzyka Nataliia Mykolaivna, Bezrukava Inna Yuriivna, Biletska Hanna Vasylivna, Shomin Oleksadr Anatoliyevich
Назва патенту російськоюСпособ очистки и концентрирования вируса энтерита гусей
Автори російськоюЦиновий Алексей Васильевич, Семенченко Александр Юриевич, Музыка Наталия Николаевна, Безрукавая Инна Юрьевна, Билецкая Анна Васильевна, Шомин Олександр
МПК / Мітки
МПК: A61K 39/135, C07K 14/17, C12N 15/50, A61K 31/28, A61K 39/225
Мітки: гусей, очищення, ентериту, концентрування, спосіб, вірусу
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/2-60381-sposib-ochishhennya-ta-koncentruvannya-virusu-enteritu-gusejj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб очищення та концентрування вірусу ентериту гусей</a>
Попередній патент: Спосіб лікування спастичності у нижніх кінцівках
Наступний патент: Бактерицидний неорганічний порошок
Випадковий патент: Комбінований двигун внутрішнього згоряння