Вакцина “гемофілосан” асоційована інактивована концентрована проти актинобацильозної плевропневмонії свиней

Вакцина "Гемофілосан" асоційована інактивована концентрована проти актинобацильозної плевропневмонії свиней. Корисна модель відноситься до галузі ветеринарної медицини, біотехнології, імунології, мікробіології і виробництва біологічних препаратів. Вакцина "Гемофілосан" аналогів не має. Відомі близькі до аналогів. У Румунії зареєстрована вакцина [1] проти гемофільозної плевропневмонії свиней, яка містить суміш інактивованих і адсорбованих культур Haemophilus pleuropneumoniae (40%), Pasteurella multocida (30%), B.bronchiseptica (30%) із загальним вмістом бактерій 5*109м.к./см3. Для її виготовлення культури мікроорганізмів отримували шляхом роздільного їх вирощування при 37°С: Haemophilus pleuropneumoniae - протягом 6-8 годин; Pasteurella multocida - 24 години і B.bronchiseptica - 48 годин. Визначали чистоту культур, концентрацію бактерій, адсорбували їх на ГОА (10%) і консервували формаліном (1,5%). Вакцину застосовували дворазово з інтервалом 21 день в дозах 2,0 і 3,0см . Перший раз поросят імунізували в 15 денному віці. Маточне поголів'я щепили 2 рази на рік в дозі 3,0см3. Відомо, що для профілактики гемофільозної плевропневмонії свиней запатентована інактивована вакцина, де в якості ад'юванта використана біомаса В.pertussis. Препарат мав підвищені захисні властивості проти вказаної хвороби [2]. В США досліджено 9 бактеринів проти гемофільозу в поєднанні з ГОА, лецитиновим (ЛМ) або парафіновим (ПМ) маслами. Тварин вакцинували дворазове з інтервалом 30 днів, а вміст антитіл у сироватці визначали через 15 та 90 днів. Мінімальне подразнення м'язової тканини викликали бактерини з вмістом ГОА і ЛМ (5%). Підвищення концентрації ЛМ до 20% і використання ПМ приводило до сильного подразнення тканин і часто супроводжувалось утворенням гранульом або абсцесів на місці введення. Використання ГОА найменше стимулювало утворення антитіл [3]. В СРСР в промислових умовах були проведені випробування експериментального зразка емульгованої формолвакцини проти гемофільозної плевропневмонії свиней. Щеплено було понад 400тис свиней. За даними випробувань був зроблений висновок, що препарат не забезпечує повного захисту від інфекції, але дещо зменшує захворюваність в групі вакцинованих свиней [4]. Відома вакцина (5) Porcilis АРР (Порціліс АПП) - проти плевропневмонії відлучених поросят, інактивована. Застосовується для активної імунізації відлучених поросят з метою профілактики плевропневмонії, збудником якої є Actinobacillus pleuropneumoniae. Недоліками даної вакцини є слідуючі: - вакцинують тільки клінічно здорових тварин; - після вакцинації у свиней можливі ускладнення - набряк на місці ін'єкції; загальна реакція організму у вигляді лихоманки, приглушеності і анорексії. Якщо в момент вакцинації у тварини був повний шлунок, можуть спостерігатися блювоти; - вакцина не містить Actinobacillus lignieresii, який може також викликати плевропневмонію як сам, так і в асоціації з Actinobacillus pleuropneumoniae і в таких випадках дана вакцина буде малоефективною або і неефективною. Відома формолвакцина (6) проти гемофільозів і сальмонельозу свиней, ГОА, асоційована. Дана вакцина являє суміш інактивованих культур вакцинних і епізоотичних штамів збудників гемофільозів і сальмонельозу. Застосовується для щеплення порісних свиноматок і поросят проти гемофільозів і сальмонельозу в неблагополучних господарствах. Але ця вакцина не містить антигенів Actinobacillus lignieresii і не буде ефективною при актинобацильозній плевропневмонії свиней, викликаною за участю цього збудника. Відомі вакцини, які використовуються в Німеччині проти гемофільозів та асоційованих з ними інфекцій: BAR VAC® Somnugen (Haemophilus somnus bacterin) [7], рекомендується для профілактики захворювань великої рогатої худоби, збудниками яких являється Haemophilus somnus. Для виготовлення даної вакцини використовуються хімічні інактиванти, ад'ювант - алюмінію гідроксид; - BAR VAC® Somnugen 2P [8]- асоційована інактивована вакцина, яка включає антигени Haemophilus somnus та Pasteurella haemolytica і Pasteurella multocida. Рекомендується для профілактичних щеплень великої рогатої худоби проти гемофільозу, викликаного Haemophilus somnus та пастерельозів, викликаних Pasteurella haemolytica і Pasteurella multocida; - Express® IBP/HS-2P [9]- асоційована інактивована вакцина для профілактичних щеплень великої рогатої худоби проти інфекційного ринотрахеіту, вірусної діареї, парагрипу-3, гемофільозу та пастерельозу. Недоліками цих вакцин (7, 8, 9) є: вони призначені для профілактичних щеплень лише великої рогатої худоби; Haemophilus somnus не циркулює на території України; не мають у своєму складі Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae та Actinobacillus lignieresii; не містить імуномодулюючих засобів, що унеможливлює їх застосування ослабленим і хворим тваринам. Відома також вакцина “Dessen" [10], виготовлена із добової культури збудника гемофільозної плевропневмонії свиней, інактивована формаліном, адсорбована на ГОА і консервована тіомерсалом. В неблагополучних з гемофільозної плевропневмонії господарствах щепили 2-3 недільних репродукторних і відгодівельних поросят підшкірно в області колінної складки в дозі 8,0см3; 4-5 та 6-7 недільного віку - відповідно по 10,0см3 та 5,0см3 в області основи вуха. В результаті вакцинації зменшилась кількість захворівших поросят, знизився їх падіж та зменшились витрати на лікування. Але цією вакциною не можна щепити хворих і ослаблених поросят. Не дивлячись на значну кількість розроблених інактивованих вакцин проти гемофільозної плевропневмонії свиней, питання специфічної профілактики цього захворювання до кінця не вирішене. Препарати виготовлені із молодих культур Haemophilus pleuropneumomae (6-12 годинні) токсичні, але дають деяку серотип-специфічну стійкість до клінічного проявлення захворювання. Вакцини із старих культур нетоксичні, але забезпечують лише незначний рівень захисту. Імунізація свиней знижує смертність і важкість перебігу хвороби, але не запобігає інфікуванню і бактеріоносійству [11]. Виходячи із вище зазначеного вакцини проти гемофільозної плевропневмонії свиней потребують подальшого удосконалення. Це можливо за рахунок корекції їх антигенного складу з врахуванням епізоотичної ситуації; використанням більш імуногенних штамів; розробки нових поживних середовищ, які підвищують імуногенні властивості мікроорганізмів; визначення найбільш ефективних концентрацій антигена або їх асоціацій в препараті; підбору інактиваторів і ад'ювантів; підвищення імунологічного статусу тварин. В основу винаходу поставлені наступні завдання: - створення асоційованої інактивованої концентрованої вакцини для профілактики актинобацильозної плевропневмонії свиней, яка викликається актинобацилами, які циркулюють на території України - Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae та Actinobacillus lignieresii та асоційованих з ними Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida; - підвищення специфічної активності вакцини шляхом зменшення її негативного впливу на щеплений організм і стимуляції синтезу антитіл за рахунок удосконалення технології її виробництва. Технічний результат винаходу полягає в підвищенні імуногенної активності та розширенні антигенного спектру вакцини, а також зниженні її реактогенності. 1. Викладена мета досягається слідуючим шляхом: - здійснення поглибленої інактивації культур виробничих штамів мікроорганізмів із зміною температурного режиму інактивації від 38±1,0°С до 24±2,0°С та додаванням розчину формаліну в кількості 0,2%; - підтримування в анакультурах рН в межах 7,2±0,2 на протязі всього періоду інактивації; - постійним (не менше 2 рази на добу) перемішуванням анакультур на протязі 5-7 діб інактивації та періодичним перемішуванням на протязі наступних 5-7 діб інактивації з відбором проб для контролю повноти інактивації з використанням білих мишей або Tetrachymena piriformis; - в анакультурах виробничих штамів мікроорганізмів, де встановлено відсутність їх росту і токсичності, знижують рН до 5,8±0,2 відповідними розчинами хлористоводневої або аскорбінової кислоти та вносять 3%-вий стерильний розчин алюмінію гідроксиду з розрахунку 10-12% до загального об'єму анакультур. Сорбція антигенів триває 36-48 годин при температурі 24±2,0°С; - в залежності від активності культур та концентрації в них мікробних клітин після сорбції декантують 20-30% загального вмісту анакультури; - в ємності з окремими анакультурами, що мають температуру 37±1,0°С вносять 1%-вий стерильний розчин агар-агару при 45,0±1,0°С з розрахунку 0,03-0,05% сухої речовини та імуномодулюючі і стабілізуючі засоби за спеціальним прописом [патент №65816 Україна, МПК А61К39/08, №2003055008; Заявлено 30.05.2003; Опубл. 15.04.2004, Бюл. №4]; - приготовлені анакультури актинобацил змішують у відповідних пропорціях, вирівнюють рН до 7,2-7,4, вносять 1%-вий спиртовий розчин бриліантового зеленого з розрахунку 0,01-0,02% сухої речовини, перемішують і відбирають проби для технологічного контролю готового продукту. 2. Вакцина "Гемофілосан" асоційована інактивована концентрована проти актинобацильозної плевропневмонії свиней містить розчинні і корпускулярні антигени відселекціонованих, інактивованих епізоотичних штамів мікроорганізмів: Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae (штам Д-05), Actinobacillus lignieresii «П-136» [Патент України №65106А 7А61К 39/00, 15.03.2004. Бюл.№3], Actinobacillus lignieresii «М-137» [Патент України №66484А 7А61К 39/00, 17.05.2004. Бюл.№5], Escherichia coli “Дон 910/149" [Патент України №65812А 7А61К 39/108, 15.04.2004. Бюл.№4], Staphylococcus aureus «Ш-1/157» [Патент України №65810А 7А61К 39/085, 15.04.2004. Бюл.№4], Pasteurella multocida “П-156" [Патент України №65109А 7А61К 39/102, 15.03.2004. Бюл.№3], інактивуючі речовини формальдегід і брильянтовий зелений, сорбент і ад'ювант алюмінію гідроксид, імуномоделюючий і стабілізуючий антитоксичний засіб на основі екстрактів лікарських рослин та компонентів природного походження. В 1см3 вакцини міститься, (в %): Антигени Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae 30,0-40,0 Антигени Actinobacillus lignieresii 20,0-30,0 Антигени Escherichia coli 10,0-15,0 Антигени Staphylococcus aureus 10,0-15,0 Антигени Pasteurella multocida 10,0-15,0 Ад'ювант (алюмінію гідроксид) 10,0-12,0 0,025Формальдегід залишковий 0,03 Брильянтовий зелений 0,01-0,02 Імуномодулюючий і стабілізуючий антитоксичний засіб решта 3. Вакцина “Гемофілосан” призначена для профілактичного щеплення свиней. Щепленню підлягає поголів'я, виходячи з епізоотичної ситуації. Дозволяється щеплення слабких і хворих на актинобацильозну плевропневмонію свиней. Перед використанням флакони з вакциною переглядають, струшують, підігрівають у теплій воді до температури 36,0-38,0°С. Вакцину вводять підшкірно або внутрішньом'язово в ділянці шиї або внутрішньої поверхні стегна. Вакцину застосовують у дозах відповідно до віку тварин та в залежності від епізоотичного стану господарства. Щеплюють тварин двічі з інтервалом 7-14 діб, а ревакцинацію здійснюють через 6 місяців одноразовим щепленням. При складній епізоотичній ситуації ревакцинувати тварин бажано через 3-4 місяці. Вакцину застосовують у наступних дозах: Дози,см3 Вид та вік тварин 1 Свиноматки перед осіменінням і за 30-15 днів до опоросу Поросята віком до 30 днів Поросята віком 1-2міс. Поросята віком 2-4міс. Поросята старші 4міс. вакцинація ревакцинація І 2 II 3 4 5,0 10,0 10,0 2,0 2,0 3,0 3,0 2,0 3,0 3,0 5,0 3,0 5,0 5,0 5,0 Напружений імунітет у щеплених тварин з'являється через 2 тижні після другого щеплення і триває протягом 6 місяців. Вираженість та тривалість імунітету залежить від фізіологічного стану щеплених тварин. В умовах ензоотичного спалаху гемофільозу вакцину застосовують тричі в таких же дозах, але інтервал між щепленнями становить 3-5 діб. Дозволяється щеплювати хворих тварин з лікувальною метою. При спалахах гемофільозної інфекції одночасно з ешерихіозами та сальмонельозами вакцину “Гемофілосан" застосовують одночасно роздільно з вакциною “Сердосан" в дозах вказаних у настанові. В організмі щеплених тварин відбувається імунологічна перебудова про що свідчать показники гуморального і клітинного імунітету. Так, титри аглютинінів на 7-му добу після другого щеплення зростають в 3-4 рази відносно вихідних даних, протективна і нейтралізуюча властивість сироваток крові щеплених тварин з'являється через 14 діб після першого щеплення, достовірно зростає фагоцитарна активність крові та завершеність фагоцитозу. Вакцина "Гемофілосан" характеризується високою специфічною ефективністю і не має обмежень для застосування, забезпечує формування імунітету проти актинобацильозної плевропневмонії свиней, збудниками якої являються Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae та Actinobacillus lignieresii, кожен окремо або в їх асоціації та ускладненої Е. соli, Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida. Вакцина має наступні переваги перед аналогами: - містить антигени вітчизняних штамів мікроорганізмів, які циркулюють на території України; - містить засоби активації синтезу антитіл, які зменшують негативний вплив препарату на щеплений організм, завдяки чому вакцину дозволяється застосовувати навіть ослабленим і хворим тваринам з лікувальною метою; - застосування вакцини при септичному перебігу хвороби у тварин сприяє скороченню втрат в 3-4 рази; - щеплення вакциною “Гемофілосан” сприяє припиненню розвитку епізоотичного процесу і видужанню хворих на респіраторні хвороби, підвищенню відтворювальної функції самок, стійкості до захворювань, життєздатності молодняка, одужанню тяжко хворих тварин та скороченню витрат на їх лікування. Протипоказання щодо застосування вакцини “Гемофілосан" відсутні. Джерела інформації. 1. Potecea Е et al. // Патент СРР. №105222. Опубликован 30.11.83. МКИ. А61 К 39/187. 2. Riising H.I. // Proc. IPVS Congress. Copenhagen. 1982. 3. Straw B.E. et al. //I. Am. Vet. Med. Assoc. 1990, 194(4). 4. И.А. Рубинский. Иммунопрофилактика гемофилёзной плевропневмонии свиней // Ветеринария. - 1995-М.: №1 - С.21-26. 5. Porcilis АРР (Порціліс АПП) - вакцина проти плевропневмонії відлучених поросят, інактивована // Ветеринарні імунобіологічні препарати : Довідник / За ред. П.І. Вербицького і A.M. Головка.-К.: Реферат, 2004.С.119. 6. Формолвакцина проти гемофільозів і сальмонельозу свиней, ГОА, асоційована // Ветеринарні імунобіологічні препарати : Довідник / За ред. П.І. Вербицького і A.M. Головка.-К.: Реферат, 2004.-С.126. 7. BAR VAC® Somnugen (Haemophilus somnus bacterin) / Boehringer Ingelheim Health GmbH. Germany. 2001. 8. BAR VAC® Somnugen 2P (Haemophilus somnus - Pasteurella (haemolytica, multocida) bacterin) / Boehringer Ingelheim Health GmbH. Germany. 2001. 9. Express® IBP/HS-2P (Infectious bovine rhinotracheitis-bovine viral diarhoea-parainfluenza-3 modified life vaccineHaemophilus somnus-Pasteurella (haemolytica, multocida) bacterin) / Boehringer Ingelheim Health GmbH. Germany. 2001. 10. Kielstein P. et al. // I. Mh. Vet. Med.- 1982, 37(4) 11. Pijoan С. et al. // Proc. IPVS Congress. Mexico. 1982.