Спосіб визначення впливу сортів та гібридів огірка на інтенсивність спороутворення фітопатогенних грибів

Спосіб визначення впливу сортів та гібридів огірка на інтенсивність спороутворення фітопатогенних грибів, що включає пророщування насіння у вологій камері, інокуляцію проростків огірка, який відрізняється тим, що оцінку сорту проводять за впливом на інтенсивність формування інфекційних структур гриба, підраховуючи кількість конідій, що утворилися на уражених проростках. (11) (21) u201008278 (22) 02.07.2010 (24) 10.02.2011 (46) 10.02.2011, Бюл.№ 3, 2011 р. (72) ПАРФЕНЮК АЛЛА ІВАНІВНА, ЧМІЛЬ ОКСАНА МИКОЛАЇВНА (73) ІНСТИТУТ АГРОЕКОЛОГІЇ УААН 1 2 3 4 Ступінь стійкості, сприйнятливості На нижніх листках хлороз, мілкі бурі плями до 5 % Стійкий Рослина уражена від основи до середини: найнижчі листки бурі на 50-80 %, а Слабо сприйнятливий верхні - з інтенсивністю до 25 % Рослина уражена до суцвіття: Спостерігається загибель найнижчих листків. Сприйнятливий Листки верхнього ярусу - до 50 % Уражена вся рослина, листки до 100 %, спостерігається загибель листків у Високо сприйнятливий нижньому і середньому ярусах Характер прояву хвороби на листках Задачею корисної моделі, що заявляється, є розробка способу по визначенню впливу сортів та гібридів огірка на інтенсивність спороутворення фітопатогенних грибів. (19) Бал UA Шкала оцінки стійкості огірка до фузаріозного в'янення 3 57035 Технічним результатом способу, що заявляється, є виявлення сортів та гібридів огірка, здатних стримувати накопичення інфекційних структур фітопатогенних грибів. Суть способу полягає в наступному. Завчасно простерилізоване насіння різних сортів та гібридів огірка пророщують у вологих камерах до утворення стрижневого корінця. Проростки інокулюють конідіальною суспензією фітопатогенного гриба протягом 3 діб при оптимальній для розвитку гриба температурі 18-24 °С [4]. Після цього проростки переносять у стерильні вологі камери і інкубують протягом 12 діб до появи спороутворення на поверхні уражених рослин [4]. Оцінку інтенсивності спороутворення здійснюють під мікроскопом у лічильній камері Горяєва-Тома [5]. Приклад: Насіння різних сортів огірка промивають під проточною водою 1 год., стерилізують у 70 % етиловому спирті 5 хв., у 10 % соляній кислоті 3 хв., 1:3 доместосі 5 хв., відмивають у стерильній воді 6 разів по 30 хв., просушують між листками фільтрувального паперу та переносять по 5 насінин на дно проавтоклавованих банок на змочений стерильною водою фільтрувальний папір і поміщають в клімокамеру, до утворення стрижневого корінця [6]. Проростки інокулюють протягом 3 діб (при оптимальній для розвитку гриба температурі 18 24°С) конідіальною суспензією, яку отримували в лабораторних умовах шляхом фільтрування 15-ти 4 денної колонії Fusarium oxysporum [4]. Після цього проростки переносять у стерильні вологі камери і інкубують протягом 12 діб до появи спороутворення на поверхні уражених рослин [4]. Оцінку інтенсивності спороутворення здійснюють під мікроскопом у лічильній камері Горяєва-Тома [5]. З цією метою в ємності добавляють по 10 мл стерильної води та струшують на віброструшувачі протягом 1 хвилини. Потім невелику каплю суспензії відбирають піпеткою, наносять її на поверхню лічильної камери і накривають покривним склом. Камеру розміщують на предметний столик мікроскопа, знаходять зображення сітки. Підрахунок починають через 3-5 хв. від моменту приготування препарату, щоб клітини осіли і їх було видно в одній площині. Підраховують кількість клітин в 10 великих чи 20 малих квадратах сітки, переміщуючи сітку по діагоналі. Кількість клітин в 1 мл суспензії розраховують за формулою: M=(a*1000)/(h*S), де М - число клітин в 1 мл суспензії; А - середнє число клітин в квадраті; h - глибина камери в мм; S - площа квадрата сітки в мм2; (великого квадрата =1/25 мм2, малого = 1/400 мм2). Було виявлено диференціацію досліджуваних сортів за їх впливом на інтенсивність спороутворення F. oxysporum (табл. 2). Таблиця 2 Взаємодія сортів та гібридів огірка зі збудником F. oxysporum Сортозразок Сквирський 1/27 П F1 Далекосхідний 27/17 Левадний F1 Лінія ПІ СМФ-795 F1 Прототип **Бал ураження рослин 1 2 1 3 2 Cпосіб Кількість конідій шт./мл 2,57*106 1,65*106 4,28*106 2,44*106 5,34*106 *Концентрація конідіальної суспензії F. oxysporum - 3,00*106 **Бал ураження рослин (див. табл. 1). Відповідно до отриманих даних відомий лабораторний метод оцінки огірка на стійкість до фузаріозу не дає високоефективної оцінки сортів та гібридів огірка, оскільки бал ураження рослин огірка не відповідає результатам їх оцінки за чисельністю інфекційних структур F. Оxysporum. Досить часто в окремих заражених рослинах, або в окремих інфекційних плямах знаходиться різна кількість інфекційних одиниць. Рослина можебути з великою площею ураження, але завдяки своїм фізіологічним та біохімічним властивостям може стримувати накопичення інфекційного матеріалу патогена у верхніх шарах епідермісу, пригнічуючи його розвиток, зменшуючи доступ для його живлення, ніж якщо пляма мала, але глибока. Таким чином, стійкість доцільніше характеризувати за чисельністю інфекційних структур, ніж візуально за величиною плям. Використання способу, що пропонується, забезпечить виявлення сортів огірка, які здатні стримувати накопичення інфекційних структур збудника кореневої гнилі огірка в агрофітоценозах України. Вирощування таких сортів знизить кількість і спектр хімічних засобів захисту рослин в агрофітоценозах, що підвищить врожайність, екологічну чистоту і якість продукції. Джерела інформації: 1. Шихматова О. В. Оценка образцов для селекции огурца на устойчивость к переноспорозу //Картофель и овощи. 2006 - № 6. - С. 28. 2. Сергоманов С. В. Агробиологическая оценка новых сортов и гибридов огурца и перца сладкого 5 57035 для открытого грунта в Красноярском крае //Агро XXI. - 2008. - N 4-6. 3. Ткачева А. А. Методы in vitro в селекции огурца на устойчивость к фузариозу //Картофель и овощи. 2006. № 8. С. 28-29. 4. Билай В. И. Методы экспериментальной микологии. - К.: Наукова думка, 1982. - 548с. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 6 5. Лерина И. В. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии /Лерина И. В., Педенко А. И. - М.: Экономика, 1980. - 152с. 6. Насіння с.-г. культур. Методи визначення якості: ДСТУ 4138 - 2002. - [Чинний від 2002-1228]. - К.: Держспоживстандарт України, 2003. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601