Спосіб отримання насіння стевії (stevia rebaudiana bertoni)

Спосіб отримання насіння стевії (Stevia rebaudiana Bertom), що включає вирощування розсади стевії шляхом зеленого живцювання, який відрізняється тим, що розсаду стевії обробляють 0,1-0,3% розчином ретарданта ССС з терміном перебування рослин у провокаційних умовах 7-14 днів з наступною висадкою у відкритий грунт Винахід стосується сільського господарства і може бути використаний у рослинництві, зокрема селекції, для отримання насіння стевії Stevia rebudiana Bertom - рослина із родини складноцвітних Походить із Парагваю, де росте в дикому стані і може репродуктивно розмножуватись Вона характерна тим, що и листя та стебла містять 8 речовин , які більш ніж у 300 разів солодше за цукрозу це стевюзид, ребаудюзид А, Б, С, Д, Е, дуекозид А та стевіл-бюзид Вони відносять заменителя сахара Киев ВНИС, 1990, С 74-79) Цей спосіб дуже затратний, тому що потребує використання ручної праці висококваліфікованих спеціалістів - бютехнолопв Термін отримання повноцінної розсади - 70-75 днів Характеризується використанням апікальної та латеральної меристеми і шматочків стебел, листкових пластин Цей матеріал стерилізують і розміщують на агаризоване поживне середовище, яке містить в собі мікрота макро- елементи, гормони, вітаміни, сахарозу, мезошозид Культивують при t26-28°C, ВІДНОСНІЙ ВОЛОГОСТІ 70%, освітленні 3-5клк, 14-годинному фотоперіоді Джерело освітлення - люмінесцентні лампи Через 14 днів укорінені рослини - регенеранти пересаджують в спеціальні умови для дорощування Дорощують рослини до стадії розсади на суміші піску з перлітом так, як і зелені живці Розсада стевії через 55-60 днів повинна мати висоту 7-14см при наявності 8-14 листків ся до класу тетрациклічних ГЛІКОЗИДІВ І ВІДОМІ ПІД загальною назвою стевюзид В даний час стевію вирощують у багатьох країнах світу - Японії, Кореї, Китаї, Малайзії, Ізраїлі, Уругваї, Парагваї, Роси, Великобританії, Індонезії, США, Україні Стевія - тропічна рослина ендемік Репродукція її насіння потребує специфічних умов, тобто певної температури навколишнього середовища та довжини світлового дня Температура повітря під час ЦВІТІННЯ стевії та дозрівання насіння повинна бути не нижче 20-25°С Стевія - рослина короткого дня В умовах України и ЦВІТІННЯ починається у вересні, коли температура повітря, особливо вночі, падає до 7-8°С Стевія - перехреснозапильна рослина, запилюється, в основному, комахами які в температурних умовах другої половини вересня майже не літають Тому запилювання рослин в цю пору значно ускладнене Розвиток зародків при таких температурних умовах уповільнюється до 45-65 діб і тому насіння не визріває до холодів Насіння стевії не дозріває навіть в умовах субтропічного клімату Японії та в Грузії Проблему отримання насіння стевії ще не вирішено, що в свою чергу стримує її поширення Відомий спосіб розмноження стевії через культуру in vitro (Ильенко И И Микроклональное размножение стевии в культуре in vitro Введение в культуру стевии - источника низкокалорийного Найбільш близький до способу, який заявляється, є спосіб отримання рослин стевії шляхом укорінення зелених живців (Антонов В И Оптимальные сроки зеленого черенкования стевии в условиях защищенного грунта Введение в культуру стевии - источника низкокалорийного заменителя сахара Киев ВНИС, 1990, С 44-50) У відомому способі розсаду стевії отримують методом зеленого живцювання, використовуючи апікальну частину завдовжки 4-7см з 4-6 листками, які беруть з маточних кореневищ Кореневища з осені заготовлюють і зберігають при температурі 8-10°С та вологості 65-70% За 14-21 день до живцювання ящики з кореневищами переносять до теплиці, де підтримують температуру повітря 20-25°С при освітленні 8-9клк За мірою відростання кореневих пагонів, їх відрізають та укорінюють у субстраті, який складається із піску та перліту Після укорінення розсаду висаджують у відкритий ґрунт ю ^ СО 00 ю 58345 Спільною суттєвою ознакою відомого і запропонованого винаходу є отримання розсади стевії і висадка м у відкритий ґрунт, але незважаючи на наявність спільних ознак, відомий спосіб не забезпечує отримання насіння стевії тому, що стримується стимулювання розвитку зародків та дозрівання насіння через відсутність спеціальних умов, які забезпечують ЦВІТІННЯ, утворення та дозрівання насіння стевії В основу винаходу поставлена задача розробити спосіб отримання насіння стевії шляхом обробки розсади розчином ретарданту та провокації ЦВІТІННЯ в неспецифічних для м розвитку умовах Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі розсаду стевії вирощують шляхом зеленого живцювання, а згідно з винаходом розсаду стевії обробляють 0,1-0,3% розчином ретарданту ССС з терміном перебування рослин у провокаційних умовах 7-14 днів з наступною висадкою у відкритий ґрунт При використанні цього способу насіння стевії починають отримувати через 30-40 днів після висадки розсади у відкритий ґрунт При цьому схожість насіння становить 90% Регулятор росту ССС - ретардант, який застосовується для обробки розсади стевм, має хімічну назву хлорхолінхлорид або хлористий (2хлоретил)-триметиламоній Він використовується в рослинництві і має специфічну інгибуючу дію на ріст рослин в довжину, блокуючи біосинтез гіберелінів У тканинах рослин розпадається до холіну та бетаїну - природних метаболітів рослин Малотоксичний Виробляється у багатьох країнах світу Зареєстрований на Україні під декількома назвами - Стабілан, Хлорхолінхлорід та ІНШІ Виробляє його ООО "Азот", м Черкаси Випускається у вигляді рідини з характерним "рибним " запахом амінів Використовується на пшениці (запобігає м виляганню), на плодових деревах (для формування компактної крони), на розсаді овочевих, особливо томатів (проти витягування стебел) (Муромцев Г С , Чкаников Д И , Кулаева О Н , Гамбург К З Основы химической регуляции роста и продуктивності растений М Агропромиздат, 1987, 383с) укорінених зелених черенків (живців) ДОСЛІДИ проводили в лабораторних умовах, де підтримували температурний режим у межах 20-27°С при 12-годинному фотоперіоді освітлення люмінесцентними лампами 8-14клк КІЛЬКІСТЬ рослин у варіанті - 8 шт Потім розсаду обробляли 1-3 рази ретардантом ССС (0,1-0,3% розчином) Контрольні рослини обприскували водою і дорощували до фази 10-16 листків Після ЦЬОГО довжину світлового періоду зменшували до 9 годин У перші дні червня розсаду пересаджували у відкритий ґрунт Наприкінці червня - на початку липня збирали стигле насіння та визначали його схожість (табл 1, 2) Дані досліду свідчать, що у розсади стевм, яка була оброблена ретардантом ССС, раніше наставали фази бутонізації, ЦВІТІННЯ та раніше достигало насіння Залежно від КІЛЬКОСТІ обробок поява бутонів, квіток та стиглого насіння спостерігалося на 8-14 днів раніше на рослинах оброблених ретардантом Кращі результати від обробок були отримані при 3-кратному обприскуванні рослин, але збільшення КІЛЬКОСТІ обробок та дози препарату призводило до появи ОПІКІВ на листях Тому обмежилися трьома обробками ретардантом Рослини цвіли і плодоносили до кінця вересня Спостереження за динамікою появи сходів та визначення схожості насіння (схожість визначали на 10-й день) показали, що різниці у схожості насіння між контрольними та дослідними рослинами практично не було, але насіння відрізнялося за КІЛЬКІСТЮ пророслого у перші 3-5 днів На 9-16% пророслого насіння було більше у дослідних варіантах, ніж на контрольних На 9-й день різниця між насінням у дослідних та контрольних рослин нівелювалася Рослини, що були отримані з неіндукованої світлом розсади (контроль 1), не дали насіння протягом літнього періоду Таким чином, обробка рослин стевії ретардантом ССС сприяє скороченню періоду вступу рослин у фази бутонізації, ЦВІТІННЯ, формування та достигання насіння При цьому досягається економія часу одержання насіння, зменшується період перебування рослин в умовах спеціально обладнаного приміщення, що значно зменшує витрати на електроенергію та пальне та загалом зменшує собівартість насіння стевії Спосіб отримання насіння стевм (Stevia rebaudiana Bertoni) виконують таким чином Розсаду стевм вирощували у КВІТНІ МІСЯЦІ З Таблиця 1 Вплив ретарданту ССС на динаміку появи бутонів, квіток та насіння стевії, ЦВІТІННЯ якої провокується довжиною фотоперіоду КІЛЬКІСТЬ рослин з насінням, % № 1 2 3 4 5 КІЛЬКІСТЬ рослин з квітками, % Варіанти досліду КІЛЬКІСТЬ рослин з бутонами, % 8 10 12 14 16 Контроль - неіндукована 0 0 0 0 0 розсада Контроль - обробка 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 розсади водою 0 0 10 15 20 Обробка розсади 0 0 0 0 0 0 0 0 0 12 ССС один раз 0 15 25 45 60 Обробка розсади 0 0 0 0 0 0 0 0 12 ЗО ССС два рази 15 ЗО 50 75 100 Обробка 0 0 0 0 0 Індукованої розсади 0 0 15 25 40 ССС три рази 15 45 80 100 100 18 0 20 0 15 50 0 24 0 20 60 0 26 0 ЗО 75 0 ЗО 0 35 80 0 40 0 50 100 0 50 0 10 100 100 0 0 0 0 0 0 15 50 25 37 50 60 75 100 100 100 75 100 100 100 100 100 100 100 0 0 0 0 0 0 25 100 45 50 60 85 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0 0 0 0 0 0 35 100 50 60 75 90 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 10 27 0 22 0 60 100 0 60 0 70 0 50 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 58345 Таблиця 2 Динаміка проростання насіння стеви залежно від обробки розсади ретардантом ССС № 1 2 3 4 Варіанти досліду Контроль - розсада оброблена водою Розсада оброблена ретардантом ССС -1 раз Розсада оброблена ретардантом ССС -1 раз Розсада оброблена ретардантом ССС -1 раз Насіння, що проросло, % 6-й 7-й 3-й 4-й 5-й 8-й 9-й 10-й 21 41 63 83 86 88 90 90 33 50 71 85 88 89 90 91 32 54 75 86 88 90 90 90 ЗО 57 74 83 88 89 90 Комп'ютерна верстка Л Ціхановська Підписано до друку 05 08 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна