Спосіб визначення концентрації нітрит-іонів у розчинах

1.Спосіб визначення концентрації нітрит-іонів у розчинах, що включає використання двостадійної реакції Гріса із сульфаніловою кислотою та N 3 76576 4 водному розчині до досліджуваних розчинів з різвідповідність заявленого технічного рішення ним рН, обидва етапи реакції будуть проходити критерію винаходу "новизна". при різних, але не стабільних рН, що впливатиме В патентній і науково-технічній літературі на: не знайдено технічних рішень, в яких були б опи1) швидкість окремих етапів реакції; сані відомості про ознаки, що відрізняють заявле2) інтенсивність забарвлення кольорового продукний спосіб від прототипу і забезпечують досягненту; ня технічного результату в реакції тобто відбуватиметься зміщення піку поглинання, використовують двокомпонентну буферну суміш з що знижуватиме чутливість реакції Гріса, а в кінрізною концентрацією компонентів на кожній стадії цевому підсумку - точність вимірювання. реакції, яку здійснюють за постійної температури Крім того, відомий спосіб не запобігає дії пря(25°С) та розсіяного освітлення, при цьому в реакмого світла на зразки під час додавання реагентів. ційну суміш сульфанілову кислоту вносять у буОскільки час, що затрачається на додавання ферній суміші, забезпечуючи рН=1,2 для першої реагентів у стандартний 96-луночний планшет, стадії реакції, а N-(1-нафтил) етилендиамін дигідстановить 15-30 хвилин, то дії прямого світла рохлорид - в розчині одного з компонентів буферцілком достатньо, щоб результати, одержані з ної суміші, забезпечуючи рН=2,7 для другої стадії перших та останніх лунок, суттєво відрізнялися. реакції. При цьому зразки, що довше піддавалися дії Отже, заявлене технічне рішення не витікає світла будуть мати знижені показники нітритів, а ті, явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити до яких реагенти додавалися в останню чергу, висновок про його відповідність критерію винаходу будуть мати завищені дані в порівнянні із "винахідницький рівень''. середніми результатами. Винахід може бути застосований у науковоЗапропонований нами спосіб усуває недоліки дослідних установах, санітарних лабораторіях прототипу і забезпечує високу чутливість та стабіветеринарної та гуманітарної медицини, а також в льність методу за рахунок використання буферної екологічних та агрохімічних лабораторіях з різними системи для створення диференційних дискретних формами власності для вивчення метаболізму рН і стабілізації зовнішніх фізичних факторів (освінітрат- і нітрит-іонів у розчинах та біологічних рітлення та температура). динах і для встановлення ступеня забруднення В основу винаходу покладено завдання розцими іонами середовищ довкілля, кормів та продуробити ефективний спосіб визначення нітрит-іонів ктів харчування, а тому він відповідає критерію у розчинах, який забезпечив би зменшення похибвинаходу "промислова придатність". ки вимірювання концентрації нітрит-іонів у зразках Таким чином, заявлене технічне рішення є нота був би зручним у застосуванні, забезпечуючи вим, промислово придатним, має достатній технібільш точні результати. чний рівень, тобто відповідає всім вимогам патенТехнічний результат досягається шляхом витоспроможності винаходу згідно ст.7 розділу II користання двокомпонентної буферної суміші з Закону України "Про охорону прав на винаходи і різною концентрацією компонентів на кожній стадії корисні моделі" № 1771-IІІ, 2000 p. реакції, яку здійснюють за постійної температури Заявлений спосіб здійснюють наступним чи(25°С) та розсіяного освітлення. При цьому у реакном: ційну суміш вносять сульфанілову кислоту у глі1. Приготування гліцин-HCl буферу з рН 1,2 з вицин-HCl буферній системі з рН=1,2 на першій стакористанням 0,2 М гліцину та 6,3 М HCl; дії реакції, а на другій - N-(1-нафтил) етилендіамін 2. Приготування 1,0% розчину сульфанілової кисдигідрохлорид у розчині гліцину, доводячи рН реалоти в гліцин-HCl буфері (рН 1,2) кційної суміші до 2,7. Внесення сульфанілової кис3. Приготування 0,1% NED в 0,19 М розчині гліцилоти у буферній системі, а N-(1-нафтил) етилендіну. амін дигідрохлориду у розчині одного із 4. Внесення досліджуваного розчину в реакційні компонентів даної системи дозволяє проводити посудини, що розміщені в захищеному від прямого обидві стадії реакції Гріса при відмінних, але стасвітла місці з постійною температурою (25°С). більних і оптимальних для кожної зі стадій рН. 5. Проведення діазотизації - першої стадій реакції При проведенні патентно-інформаційного поГріса (оптимум рН 1,0-1,5) шляхом додавання 1% шуку авторами і заявником знайдено технічне рісульфанілової кислоти в гліцин-HCl буфері з рН шення, яке містять найбільшу кількість суттєвих 1,2 з 10 хвилинною експозицією. ознак, спільних із заявленим способом /Інструкція 6. Проведення „coupling" - другої стадії реакції Грідо набору для виявлення нітритів фірми "Promega" са (оптимум рН 2,0-2,7) шляхом додавання 0,1% [Griess Reagent System/Technical bulletin № 229. NED в 0,19 М розчині гліцину з 10 хвилинною ексPromega Corp., Madison, WI, USA]/: використання позицією (забарвлення стійке впродовж 90 хвидвостадійної реакції Гріса із сульфаніловою кислолин). тою та N-(1-нафтил) етилендиамін дигідрохлори7. Вимірювання поглинання при 540 нм ± 20 нм. дом, фотометрування при 540±20 нм та розрахун8. Розрахунок концентрації нітриту за калібрувальку концентрації за калібрувальним графіком. ним графіком. Однак, наявність зазначених спільних з протоЛінійна залежність екстинції від концентрації типом ознак, недостатня для одержання нітрит-іонів спостерігається в межах від 5,0-100,0 технічного результату, який забезпечує заявлений мкмоль/л фотометрованого розчину. спосіб. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак Приклад конкретного виконання повністю співпадали із заявленим способом, не Ефективність заявленого способу, його перевиявлено. Це дозволяє зробити висновок про ваги перед прототипом, підтверджені прикладами 5 76576 6 конкретного виконання способу. В умовах лабораАналіз наведених кривих свідчить про те, що торії Львівської національної академії ветеринарпропонований спосіб є чутливішим за прототип, а ної медицини імені С.З. Гжицького проведено досекстинція при цьому зростає прямо пропорційно лідження стандартних розчинів нітритів (1, 2, 5, 10, до концентрації нітритів з більшою лінійністю, ніж у 25, 50 та 100 мкМ) заявленим способом. відомому способі. Результати вимірювання екстинції забарвлеОтже, заявлений спосіб дозволяє отримувати ного розчину з використанням водних розчинів дані з точністю до 0,2 мкМ при мінімальній конценнітриту (1, 2, 5, 10, 25, 50 та 100 мкМ) одержані з трації нітритів 0,5 мкМ, що дозволяє застосовувати використанням прототипу та одержані за заявледаний метод і для визначення метаболізму нітриним способом представлені на фіг. 1. тів у біологічних об'єктах. Комп’ютерна верстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601