Спосіб підвищення запліднюваності свиноматок, в якому сперму кнурів відбирають за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів

Реферат: Винахід належить до способу підвищення запліднюваності свиноматок, в якому сперму кнурів відбирають за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів. Для підвищення запліднюваності свиноматок використовують нативну, свіжорозбавлену, 3 охолоджену або відталу сперму кнурів, у см якої не більше 150 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички. При кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички від 150 до 1000 сперма вважається придатною для парування та штучного UA 112498 C2 (12) UA 112498 C2 осіменіння свиноматок, якщо сумарна кількість колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички та загальної бактеріальної забрудненості не перевищує 1000. При кількості 3 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички 1000 і більше у см сперма вважається непридатною для парування та штучного осіменіння свиноматок. Посіви проб сперми кнурів термостатують при температурі тіла свиней ±2 °C. UA 112498 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід належить до галузі сільського господарства, біології, ветеринарії, зоотехнії, а саме до біотехнології відтворення свиней, та може використовуватись для підвищення запліднюваності свиноматок визначенням кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів. В Україні в останні роки у практиці відтворення свиней все ширше застосовується штучне осіменіння свиноматок. Проте більшість свиноматок осіменяють свіжорозбавленою або охолодженою спермою кнурів. Застосування заморожено-відталої сперми кнурів обмежено низькою кріорезистентністю їх сперми [Насибов Μ.Η. Эффективность сочетанного применения стимуляторов потенции и повышение качества спермы у хряков-производителей / Μ.Η. Насибов, В.С. Авдеенко, Д.В. Кривенко // Сельскохозяйственная биология. - 2008. - № 6. - С. 8286], що може бути пов'язано з недостатньо дослідженим питанням впливу мікроорганізмів на запліднюючу здатність і біотехнологічну придатність до кріоконсервування. Існує багато способів підвищення запліднюваності самиць зазвичай шляхом проведення ветеринарно-санітарних заходів з широким застосуванням антибіотиків, антисептиків тощо [Інструкція зі штучного осіменіння свиней, затверджена наказом Міністерства аграрної політики України 13 грудня 2002 року сперміях; №395 і зареєстрована в Міністерстві Юстиції України 7 лютого 2003 року за №104/7425 (Сайт міністерства аграрної політики України)]. У результаті чого з'являється резистентна мікрофлора до застосовуємих антибактеріальних речовин. Іншим шляхом підвищення запліднюваності свиноматок може бути розробка нових середовищ, які підвищують збереженість мембран і акросом сперміїв кнурів і за рахунок цього підвищується запліднюваність, наприклад середовище Екосперм [Патент України на корисну модель № 29220 Середовище для розбавлення і зберігання сперми кнурів "Екосперм" / А.Р. Корбецький, М.М. Шаран, С.Б. Корнят та інші - A61D 19/02 (2006.01); завл. 31.07.2007; опубл. 10.01.2008]. Є й інші шляхи підвищення запліднюваності свиноматок від сперми кнурів, наприклад покращення раціонів годівлі, умов утримання, визначеня овуляції для оптимального часу осіменіння тощо. Але, способи підвищення запліднюваності свиноматок за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів відсутні. 3 Існує стандарт для нативної сперми кнурів, за яким у см сперми допускається не більше 1000 колонієутворюючих одиниць загальної бактеріальної забрудненості та колі-титр до 0,1 (до 1:10) [ГОСТ Ρ 54638-2011 Сперма хряков свежеполученная разбавленная. - Москва: Стандартинформ, 2013. - 12 с.]. Недоліками аналога є те, що він не є способом підвищення запліднюваності свиноматок; бактерії групи кишкової палички відображаються у відносних одиницях колі-титру 0,1, 0,3 або 0,9 (або 1:10, 1:100, 1:1000) і так далі, що не дає уявлення про реальну їх кількість у спермі 3 адже колі-титр - це найменший об'єм сперми, відображений у см , у якому знайшли "одну" кишкову паличку; значення колі-титру залежить від кількості пробірок або чашок Петрі, на яких зросли бактерії групи кишкової палички, а не від реальної кількості підрахованих колоній; при одному значенні колі-титру (наприклад 0,1 або 1:10) реальна кількість колоній бактерій групи кишкової палички, що зросли на чашках Петрі варіює у дуже широких межах; значення колітитру не може бути оброблено статистично; при визначенні колі-титру у спермі плідників відсутня формула, згідно з якою можна б було підрахувати реальну кількість бактерій групи кишкової палички, а отже аналоги не здатні встановити кількість колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів. Найбільш близьким технічним рішенням до заявленого винаходу є спосіб підвищення запліднюваності кобил за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі жеребців, який передбачає підвищення запліднюваності кобил використанням охолодженої або відталої сперми жеребця, у якій до 250, або від 250 до 3500 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички [Патент України на корисну модель № 98059 Спосіб підвищення запліднюваності кобил за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички / О.В. Ткачов. - МПК A61D 19/00; 19/02 (2015.01); завл.04.11.2014; опубл. 10.04.2015, Бюл. № 7]. Недоліками прототипу є те, що він не може бути використаний на свиноматках, оскільки розроблений для коней; не може бути використаний для підвищення запліднюваності свиноматок оскільки допустимий рівень кількості колонієутворюючих одиниць загальної бактеріальної забрудненості для сперми кнурів не перевищує 1000 проти 5000 для сперми жеребців; не встановлює допустимий рівень кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у нативній, свіжорозбавленій, охолодженій та відталій спермі кнурів, який буде підвищувати запліднюваність свиноматок; не враховує фізіологічну температуру тіла свиней при проведенні посівів проб сперми. 1 UA 112498 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В основу винаходу поставлено задачу розробити новий спосіб підвищення запліднюваності свиноматок за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів, який буде забезпечувати підвищення запліднюваності свиноматок за рахунок використання нативної, свіжорозбавленої, охолодженої та відталої сперми кнурів з чітким числовим значенням кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички, який буде враховувати фізіологічну температуру тіла свиней при проведенні посівів проб сперми. Поставлена задача вирішується тим, що при розробці способу підвищення запліднюваності свиноматок за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів, який включає підвищення запліднюваності за кількістю колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі, згідно із запропонованим винаходом, для підвищення запліднюваності свиноматок використовують нативну, свіжорозбавлену, охолоджену або 3 відталу сперму кнурів, у см якої не більше 150 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички, при кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички від 150 до 1000 сперма вважається придатною для парування та штучного осіменіння свиноматок, якщо сумарна кількість колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички та загальної бактеріальної забрудненості не перевищує 1000; при кількості 3 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички 1000 і більше у см сперма вважається непридатною для парування та штучного осіменіння свиноматок; при цьому посіви проб сперми кнурів термостатують при температурі тіла свиней ±2 °C. Приклад конкретного виконання При визначенні колі-титру сперми за способом аналогів ми помітили, що колі-титр залежить не від фактичної кількості колоній бактерій, що зросли на чашці Петрі, а від кількості чашок Петрі, на яких є зростання бактерій групи кишкової палички (БГКП). Тому ми вирішили розробити спосіб, який би давав чітку відповідь на питання щодо кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички (БГКП) у спермі кнурів і за рахунок цього підвищував запліднюваність свиноматок. Розроблений спосіб полягає у наступних етапах: 3 1. Відбирають пробу сперми від кнурів об'ємом 1 см , або інший об'єм. 2. Проводять розбавлення проби 1:100 або 1:1000 або більше. 3. Виконують посів проб сперми на заздалегідь підготовлені чашки Петрі зі спеціальним живильним середовищем для зросту колоній бактерій групи кишкової палички (наприклад середовище Буліра, Ендо або інше) з дотриманням вимог стерильності. 4. Чашки Петрі з посівами проб сперми термостатують при температурі тіла свиней ±2 °C. Відомо, що фізіологічна температура тіла свиней становить 37,0-40,0 °C, тобто посів проб сперми кнура можна термостатувати при температурі від 35,0 до 42,0 °C. 5. Через 24 години підраховують кількість колоній бактерій групи кишкової палички і вираховують кількість їх колонієутворюючих одиниць (КУО) за загальноприйнятою формулою для підрахунку КУО: КУО=(КК*РП)/(В*КЧ), де КК - кількість підрахованих колоній, РП - розведення проби сперми, В - об'єм проби сперми, КЧ - кількість чашок Петрі, на які проводили посів. 3 Наприклад при посіві 1 см сперми, який розбавили 1:100 (у сто разів) на 1 (одну) чашку Петрі через 24 години було підраховано 5 колоній бактерій групи кишкової палички, отримуємо КУО=((5*100)/(1*1))=500. 6. Якщо через 24 години на чашках Петрі не зросла жодна колонія, то пробу вважають вільною від бактерій групи кишкової палички. 7. Для підвищення запліднюваності свиноматок використовують нативну, свіжорозбавлену, 3 охолоджену або відталу сперму кнурів, у см якої не більше 150 колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички. 3 8. При кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички (БГКП) у см від 150 до 1000 сперма вважається придатною для штучного осіменіння свиноматок, якщо сумарна кількість колонієутворюючих одиниць БГКП та загальної бактеріальної забрудненості не перевищує 1000. 3 9. При кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у см сперми більше 1000 сперма вважається непридатною і не може бути використана для парування та штучного осіменіння свиноматок. У таблиці 1 наведено порівняльні дані парування, штучного осіменіння свиноматок залежно від різної кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички (БГКП). 2 UA 112498 C2 Таблиця Ефективність парування та штучного осіменіння свиноматок залежно від кількості колонієутворюючих одиниць бактерій групи кишкової палички у спермі кнурів (М±м, n=32) БГКП у спермі Запліднюваність Запліднюваність Запліднюваність свиноматок свиноматок Спосіб свиноматок від свіжорозбавленою колі3 відталою КУО/см парування, % та охолодженою титр спермою, % спермою, % Спосіб аналога до 0,1 69,38±0,63 74,17±0,84 41,88±1,88 Розроблений до 0,1 150-1000 71,04±2,29 77,50±2,50 48,34±1,67 спосіб Розроблений до 0,1 не більше 150 75,94±4,06 80,63±0,63* 54,79±1,46* спосіб Примітка. * - р