Спосіб діагностики та прогнозування патологічних процесів ендометрія по стану сполучної тканини стінки цервікального каналу

Реферат: Спосіб діагностики та прогнозування патологічних процесів ендометрія по стану сполучної тканини стінки цервікального каналу включає гістологічне дослідження роздільного діагностичного зсшкрібка стінок цервікального каналу та порожнини матки з оцінкою та порівнянням показників стану сполучної тканини субепітеліальної строми шляхом фарбування гістопрепаратів хромотропом водним блакитним за Н.З. Слінченко. Додатково визначають за допомогою комп'ютерної мікроденситометрії показники питомого об'єму волокнистого компонента строми та оптичної густини забарвлення волокон штрих-зсшкрібків тільки цервікального каналу шийки матки, які при залозистій гіперплазії ендометрія становлять відповідно 28,7±0,2 % та 0,19+0,01 ум. од. опт. густини, поліпозі ендометрія - 39,3±0,6 % та 0,25±0,03 ум. од. опт. густини, атрофії ендометрія - 62,7±0,2 % та 0,33+0,08 ум. од. опт. густини, аденокарциномі ендометрія - 82,7±0,2 % та 0,49±0,11 ум. од. опт. густини. UA 115196 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ТА ПРОГНОЗУВАННЯ ПАТОЛОГІЧНИХ ПРОЦЕСІВ ЕНДОМЕТРІЯ ПО СТАНУ СПОЛУЧНОЇ ТКАНИНИ СТІНКИ ЦЕРВІКАЛЬНОГО КАНАЛУ UA 115196 U UA 115196 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до гінекології, і може бути використана для діагностики та прогнозування фонових, передракових станів та раку ендометрія за допомогою вивчення стану сполучної тканини стінки цервікального каналу шийки матки. В силу доступності для цитологічного і гістологічного дослідження, шийка матки є зручною моделлю для вивчення різних патологічних станів не тільки ендо- і екзоцервікса, але і ендометрія (В.П. Козаченко, 2000). Фізіологічні та патологічні зміни, пов'язані з віком, менструальним циклом, вагітністю, менопаузою, спостерігаються як з боку багатошарового плоского епітелію екзоцервікса, призматичного епітелію цервікального каналу, так і ендометрія (В.Г. Дубініна, 2007, 2009). Золотим стандартом діагностики патологічних станів ендометрія залишається гістероскопія з роздільним діагностичним вишкрібанням стінок порожнини матки і цервікального каналу. Але основна увага при цьому приділяється ендометрію, а стан епітелію цервікального каналу достатньою мірою при цьому не оцінюється (К.П. Хансон, 2002; Н. Bauer, 2005). За даними В.І. Кулакова (2004), в епітелії шийки матки спостерігаються патологічні процеси, поєднані з аналогічними в ендометрії гіперпластичними станами та атипіями. Враховуючи певну спорідненість будови шийки матки і тіла матки (призматичний епітелій цервікального каналу відповідає аналогічному епітелію функціонального шару ендометрія, близькість будови підепітеліальної строми і м'язового шару шийки матки і тіла матки) - можливо вивчення стану шийки матки при різноманітній патології ендометрія за допомогою простого і чутливого тесту прицільної біопсії шийки матки (О.К. Хмельницький, 2000). Діагностика різних елементів клітин епітелію каналу шийки матки та ендометрія з використанням різних методів дослідження гістологічних зрізів дозволяє достовірно встановлювати патологію. А визначення показників стану сполучної тканини в епітелії цих структур може стати принципово важливим для встановлення та диференціювання плоскоклітинного та аденогенного раку. Аналогом корисної моделі є вивчення властивостей білків різних структур тканини аденокарцином G1, G2, G3 та плоскоклітинних раків за допомогою гістохімічної методики з бромфеноловим синім та їх розподіл на "кислі" та "основні" білки за Мікель-Кальво (І.С. Давиденко, 2003). Вказана методика дозволяє за кольором диференціювати білки, в яких переважають карбоксильні групи над аміногрупами білків (так звані "кислі" білки) - червона (Red) та зелена (Green) ділянки спектра, від білків, в яких аміногрупи переважають над карбоксильними ("основні" білки) - синя ділянка спектра (Blue). Сучасні можливості об'єктивної оцінки кольору (комп'ютерна мікроспектрофотометрія) дозволяють отримувати високоточні та відтворювані результати вимірювань кольору. На основі комп'ютерної мікроспектрофотометрії отримують два показники - R/B та G/B, тлумачення яких по суті однакове, але залежно від особливостей певного протеїну або від механізмів розвитку певної патології один з них може бути більш чутливим. Так, без сумніву, властивості білків у цитоплазмі пухлинних клітин, які є паренхімою пухлини, залежать, у першу чергу, від конкретних порушень генетичного матеріалу клітин певного типу пухлини. Отже, властивості продукованих клітинами різних типів білків потенційно мають діагностичне значення. З іншого боку, відомо, що співвідношення між карбоксильними та аміногрупами білків міняється при процесах окиснювальної модифікації білків (ОМБ), тому з урахуванням принципової можливості використання протиоксидантів у лікуванні хворих на пухлини, визначення показників R/B або G/B може бути використаним в удосконаленні методів лікування пацієнтів, хворих на те чи інше пухлинне захворювання. Прототипом корисної моделі, що заявляється, є деклараційний патент на винахід № 70363 Спосіб диференційної діагностики аденокарциноми та плоскоклітинного раку шийки матки (автори: О.П. Пересунько, Н.В. Зелінська, І.С. Давиденко) - Бюл № 11 від 11.06.2012 року. У даному способі вимірювання окислювальної модифікації білків у структурах епітелію шийки матки та ендометрія здійснюється шляхом фарбування гістологічного препарату специфічними барвниками та візуальною оцінкою білкових груп, відповідно до корисної моделі, фарбування гістологічного препарату проводять бромфеноловим синім за методикою МікельКальво, а візуальну оцінку білкових груп проводять комп'ютерною мікроспектрометрією за оцінкою кольору RGB по співвідношенню величин червоного та синього спектрів забарвлення. Недоліком прототипу є те, що за цією методикою фарбування неможливо достовірно охарактеризувати стан сполучної тканини підлеглої строми шийки матки та ендометрія. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу діагностики патологічних станів ендометрія шляхом визначення показників питомого об'єму волокнистого компонента строми та оптичної густини забарвлення волокон штрих-зсшкрібків тільки цервікального каналу шийки матки. Отримані дані дають можливість проводити диференційну діагностику патологічних станів ендометрія в амбулаторних умовах. 1 UA 115196 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Поставлена задача вирішується тим, що у пацієнток з патологічними станами ендометрія проводять роздільний діагностичний зсшкрібок цервікального каналу та порожнини матки з наступним визначенням, оцінкою та порівнянням показників стану сполучної тканини, таких як "питомий об'єм волокнистого компонента строми" та "оптична густина забарвлення сполучнотканинних волокон строми" стінки цервікального каналу та ендометрія. Для дослідження стану сполучної тканини та її оптичної щільності матеріал біопсії фіксували 48-72 години в 10 % розчині нейтрального забуференого формаліну, після парафінової заливки на санному мікротомі МС-2 одержували гістологічні зрізи товщиною 5 мкм. З оглядовою метою гістологічні препарати зафарбовували гематоксиліном і еозином. З спеціальною метою використана методика Н.З. Слінченко ("хромотроп 2В"-"водний блакитний" після протравки фосфорно-вольфрамовою кислотою). Вказане забарвлення по результатах відповідає відомій методиці Меллорі, але на відміну від останньої дозволяє адекватно зафарбовувати тканини, фіксовані звичайним способом у формаліні. Після фарбування з'являється можливість візуалізувати волокна сполучної тканини (по чистому блакитному забарвленню різної інтенсивності), фібрин (малиновий колір), еритроцити - яскраво-червоні, різні клітини: їх ядра і цитоплазма забарвлюються у відтінки кольорів від блакитного до пурпурового. Оптичні зображення переводили в цифрові за допомогою мікроскопа ЛЮМАМ-Р8 і цифрової фотокамери Olympus C740UZ. Одержані цифрові зображення аналізували за допомогою ліцензійної копії комп'ютерної програми ВідеоТест-Розмір 5.0, виробника ТОВ Відеотест (Росія, 2000). Інтенсивність забарвлення вимірювали мікрозондовим методом згідно технології комп'ютерної мікроденсітометріїї за показником "оптична щільність" в умовних одиницях від 0 (повністю проникний для світлового пучка) до 1 (абсолютно непроникний для світлового пучка). Там, де це було можливо, попіксельно визначали питому площу (%), займану сполучнотканинними волокнами. При порівнянні цих показників стану сполучної тканини стінки цервікального каналу та ендометрія у 23 пацієнток з ендометрієм нормальної будови в проліферативній фазі знайдені достовірні (р