Вакцина інактивована субодинична проти сальмонельозу та ешерихіозу тварин

Реферат: Вакцина інактивована субодинична проти сальмонельозу та ешерихіозу тварин містить інактивовані антигени ешерихій і сальмонел, ад'ювант - гідроокис алюмінію, інактиватор. При цьому використовують як інактиватор - формалін, як продуценти екзотоксинів і адгезивних антигенів - Salmonella Dublin № 12, Salmonella Typhimurium № 16, Salmonella Enteritidis № 34 та Escherichia coli, що синтезують адгезивні антигени K99 (№ 957), F41 (№ 688), Att25 (№ 4), K88ad (№ 661/7), а також штами-продуценти термолабільного (№ 866) і термостабільного (№ 60) ентеротоксинів. UA 120327 U (12) UA 120327 U UA 120327 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, біотехнології, імунології, мікробіології і зокрема, до виробництва і застосування біологічних препаратів. Вакцина зареєстрована в України [реєстраційне посвідчення № ВВ-00040-02-14, від 03.04.2014]. Призначена вакцина для активної профілактики сальмонельозу та ешерихіозу (колібактеріозу) телят, поросят, тільних корів, поросних свиноматок. Відома вакцина проти ешерихіозу тварин [КОЛІ-ВАК К88, К99, 987Р, F41, ТЛ - і ТСанатоксин) (Патент РФ № 2043771 А61К 39/108 Вакцина проти еширихіозу тварин, опубликовано: 20.09.1995)]. Вакцина проти ешерихіозу тварин (КОЛІ-ВАК) виготовлена з культур ешерихій серогрупи: O8, O9, O15, О20, O26, O41, O55, O78, O86, О101, O115, O117, О119, O138, O139, О141, O147, адгезивних антигенів К88, К99, 987Р, F41, термолабільного і термостабильного анатоксинів, інактивованих формаліном (0,3 % за обсягом) з додаванням як ад'юванта гелю гідрату окису алюмінію (30 % за обсягом). Відома вакцина полівалентна гідроокисалюмінієва формол-тіомерсалова проти колібактеріозу (ешерихіозу) поросят, телят, ягнят [Ветеринарні імунобіологічні препарати: Довідник / Під ред. Вербицького П.І. та Головка A.M. - К.: Реферат, 2004. - С. 78]. Вакцину полівалентну гідроокисалюмінієву формол-тіомерсалову проти колібактеріозу (ешерихіозу) поросят, телят, ягнят виготовляють у двох варіантах, використовуючи Е.соlі наступних серологічних груп і сероварів: Перший варіант - Вакцина проти колібактеріозу поросят: 08: К43; 09: К30; 078: К80; 0138: К81; 0139: К82; 0141: К87: К88, 0147: К89: К88, 0149: К91: К88. Другий варіант - Вакцина проти калібактеріозу телят і ягнят: 08: К43, 09: К30, 015: К14: Н30, 020, 026: К60, 041, 055, 078: К80, 086: К61: Н32, 0115, 0117: К62: Н4, 0119: К69: Н4, 0101: К99. Як ад'ювант використовують гель гідрату окису алюмінію. Недоліком цих препаратів є те, що вони призначені для профілактичної імунізації тварин тільки проти колібактеріозу. Вакцини, як закордонні препарати, є дорожчими та мають недостатню імунологічну активність, у телят тривалість імунітету складає 4 місяці. До складу вакцин входять штами, що є епізоотично-актуальні для Російської Федерації, а не для України. До складу вакцин не входить штам Е.соlі, що продукує адгезини Att25, отже при застосуванні цих вакцин у тварин відсутній імунітет проти адгезивних антигенів Att25, а при застосуванні вакцини полівалентної гідроокисалюмінієвої формол-тіомерсалової проти колібактеріозу (ешерихіозу) поросят, телят, ягнят, ще проти адгезивних антигенів F41 та 987P. Крім цього наявність різних варіантів вакцини є незручним для придбання та використання в господарствах, де є різні види тварин. У своєму складі вакцини не містять антигени роду Salmonella, в той час як у тварин має місце асоційований перебіг колібактеріозу та сальмонельозу. Відома вакцина проти сальмонельозу телят із атенуйованого штаму Salmonella Dublin № 6 [Ветеринарні імунобіологічні препарати: Довідник / Під ред.Вербицького П.І., Головка A.M. - К.: Реферат, 2004. - С. 97]. Недоліком вакцини є те, що вона призначена для профілактичної імунізації тварин тільки проти сальмонельозу, у той час, як у тварин часто реєструється асоційований перебіг захворювань. Вакцина містить тільки один штам сальмонел - Salmonella Dublin, у той час, як захворювання у тварин спричиняють ще інші збудники сальмонельозу, зокрема Salmonella Typhimurium та Salmonella Enteritidis. Найбільш близькою за антигенним складом та технологічною суттю до рішення, що заявляється, є вакцина, асоційована проти діареї телят [патент РФ № 2035916 від 27.05.1995, МПК: А61К 039/116]. Вакцина включає суміш мікробних суспензій ентеробактерій Е.соlі 09: К99, Е.соlі 0138: К88, Е.соlі 200, Salmonella typhimurium 195, Salmonella dublin 196, Salmonella enteritidis 197, Klebsiella pneumoniae 201, 202, Proteus vulgaris 198 і Proteus mirabilis 199, інактивованих етанолом і депонованих на гідроокисі алюмінію. Але застосування даного препарату не забезпечує захист від хвороботворної дії збудників Е. соlі, яким властиві феноміни токсиноутворення та адгезії, зокрема до складу вакцини не включені штами E.coli з адгезивними антигенами Att25, F41 та 987Р. Для виготовлення вакцини використовуються штами мікроорганізмів, які циркулюють на території Російської Федерації. Тому при застосуванні вакцини у господарствах України бажаного результату може і не бути. Крім цього як комерційна та зарубіжна вакцина, вона є дорожчою ніж вітчизняні аналоги. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити інактивовану вакцину проти сальмонельозу та ешерихіозу тварин, що містить інактивовані антигени ешерихій і сальмонел, ад'ювант - гідроокис алюмінію, інактиватор шляхом використання як інактиватора - формаліну, використання як продуцентів екзотоксинів і адгезивних антигенів Salmonella Dublin № 12, Salmonella Typhimurium № 16, Salmonella Enteritidis № 34, та Escherichia coJi, що синтезують адгезивні антигени К99 (№ 957), F41 (№ 688), Att25 (№ 4), K88ad (№ 661/7), а також штами 1 UA 120327 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 продуценти термолабільного (№ 866) і термостабільного (№ 60) ентеротоксинів, щоб забезпечити ефективність вакцини. Порівняльний аналіз із прототипом дозволяє зробити висновок, що використання для виробництва вакцини антигенів (анатоксинів та комплексних соматичних протективних антигенів) епізоотично-актуальних для тваринницьких господарств України штамів збудників ешерихіозу та сальмонельозу, а саме: Salmonella Dublin № 12, Salmonella Typhimurium №16, Salmonella Enteritidis № 34, які є продуцентами екзотоксинів і адгезивних антигенів та Escherichia colі, що синтезують адгезивні антигени К99 (№ 957), F41 (№ 688), Att25 (№ 4), K88ad (№ 661/7), а також штами-продуценти термолабільного (№ 866) і термостабільного (№ 60) ентеротоксинів, що відповідає критерію "новизна". Вакцину готують таким чином. Для вирощування виробничих штамів ешерихій і сальмонел використовують агар та бульйон на триптичному переварі яловичини (перевар Хоттінгера). Культивування виробничих штамів-продуцентів адгезивних антигенів та ентеротоксинів проводять окремо за температури 37 °C. Для отримання анатоксинів виробничі штами сальмонел та ешерихій культивують у бульйоні Хоттінгіра, спочатку в пробірках впродовж 48-72 годин, потім бактеріальну розплодку 3 засівають у матраці об'ємом 2000 см або інші стерильні ємності, призначені для культивування мікроорганізмів з бульйоном Хоттінгіра, та культивують впродовж 10-18 годин. Після культивування бактеріальну масу відокремлюють за допомогою центрифугування, після чого до бактеріальної маси додають 0,5 % формаліну та розміщують у термостаті за температури 37 °C, утримуючи там впродовж 14-15 діб. Для отримання адгезинів виробничі штами сальмонел та ешерихій культивують на агарі Хоттінгіра, спочатку в пробірках впродовж 24 годин, потім матричну розплодку пересівають у пробірки з бульйоном Хоттінгера і культивують впродовж 48-72 годин. Отримані бактеріальні 3 розплодки засівають у матраці об'ємом 2000 см з бульйоном Хоттінгера або інші стерильні ємності, призначені для культивування мікроорганізмів. Культивують розплодки впродовж 10-15 годин, після чого до суспензії додають фосфатно-сольовий буфер (рН - 7,0-7,2). Отриману суспензію бактеріальної маси інкубують протягом 30-35 хвилин за температури 62-65 °C. Після цього центрифугуванням відокремлюють бакмасу, до якої вносять 0,5 % формалін, все перемішують та на 10-15 діб розташовують до термостату з температурою 37 °C. Отримані таким чином антигени (адгезивні та анатоксини) сальмонел і еширихій об'єднують у рівному співвідношенні. Екстракт адгезивних антигенів і екзотоксинів ешерихій та екстракт адгезивних антигенів і екзотоксинів сальмонел при постійному перемішуванні змішують у рівному співвідношенні. До комплексного антигену при постійному перемішуванні додають стерильний гідроксал (10 % від об'єму антигену) та ще перемішують 10-15 хвилин. Перевіряють рН і доводять його до 7,2-7,4 за допомогою 10 %-вого розчину їдкого натру або до комплексного антигену додають при постійному перемішуванні стерильну суспензію аеросилу розчині 0,9 % натрію хлориду (10 % від об'єму антигену). Приклад 1. Імуногенність серії вакцини перевіряли на 40 білих мишах. 20-ти мишам вводили вакцину 3 підшкірно дворазово з інтервалом 14 діб у дозі 0,5 см (1 млрд. мікр. клітин). Інших 20 мишей, які залишились, не вакцинували (контрольна група). Через 14 діб після другого введення вакцини 10 щеплених мишей заражали внутрішньочеревно культурою контрольного штаму сальмонел 3 S.dublin №12 у дозі 0,5 см (1 млрд. мікр. клітин) добової бульйонної культурою та інших 10 3 щеплених мишей культурою контрольного штаму Е. соlі № 866 у дозі 0,5 см (1 млрд. мікр. клітин) добової бульйонної культури. Мишей контрольних груп заражали внутрішньочеревно 3 культурою контрольних штамів мікроорганізмів S.dublin №12 у дозі 0,5 см (1 млрд. мікр. клітин) добової бульйонної культури (10 тварин) та інших 10 щеплених мишей культурою контрольного 3 штаму Е. соlі № 866 у дозі 0,5 см (1 млрд. мікр. клітин) добової бульйонної культури. Вакцина була імуногенною. Після контрольного зараження більш 80 % вакцинованих мишей залишилися здоровими та живими, а миші контрольних груп загинули в 100 % випадків за 10 діб спостереження. Напружений імунітет у вакцинованих тварин формується через 21 добу після вакцинації і зберігається 6-12 місяців. Вакциновані корови та свиноматки з молозивом передають специфічні антитіла телятам і поросятам, що захищають їх від захворювання на сальмонельоз та колібактеріоз (ешерихіоз) впродовж одного місяця після народження. Приклад 2. Вакцину застосовують із профілактичною метою в господарствах неблагополучних щодо сальмонельозу та ешерихіозу (колібактеріозу) тварин. Вакцинації підлягають клінічно здорові тварини. Вакцину вводять тваринам внутрішньом'язово двічі з інтервалом між ін'єкціями 10-14 2 UA 120327 U 3 5 3 діб. Тільним коровам вводять вакцину в дозі 10 см , свиноматкам в дозі 6-8 см . Перше щеплення проводять за 45-30 діб, друге щеплення за 30-15 діб до передбачуваних родів. Для формування специфічного активного імунітету телятам вводять вакцину з 10-добового віку у 3 3 3 дозі 5 см . Поросятам з 10-добового віку по 1-1,5 см , старше 60-добового віку - по 2-2,5 см . Таким чином, вакцина, що заявляється, має більш високу профілактичну та імунологічну активність та супроводжується меншими трудозатратами при її використанні у тваринницьких хазяйствах. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 Вакцина інактивована субодинична проти сальмонельозу та ешерихіозу тварин, що містить інактивовані антигени ешерихій і сальмонел, ад'ювант - гідроокис алюмінію, інактиватор, яка відрізняється тим, що використовують як інактиватор - формалін, як продуценти екзотоксинів і адгезивних антигенів - Salmonella Dublin № 12, Salmonella Typhimurium № 16, Salmonella Enteritidis № 34 та Escherichia coli, що синтезують адгезивні антигени K99 (№ 957), F41 (№ 688), Att25 (№ 4), K88ad (№ 661/7), а також штами-продуценти термолабільного (№ 866) і термостабільного (№ 60) ентеротоксинів. Комп’ютерна верстка М. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3