Спосіб одержання засобу,що має антитоксичну і радіопротекторну активність

1. Способ получения средства, обладающего антитоксической и радиопротекторной активност ью, из селезенки крупного рогатого скота, вклю чающий измельчение селезенки, воздействие на нее экстрагирующим агентом, отделение экстрак та и последующее удаление экстрагента, отли чающийся тем, что в качестве экстрагирующего агента используют водный раствор этилового спирта, указанное воздействие экстрагирующим агентом дополняют одновременным воздействием низкочастотным ультразвуком, и отделение экстракта осуществляют путем центрифугирования 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в нем удаление экстрагента из продукта центрифугиро вания осуществляют путем отгонки спирта под ва куумом при температуре не выше 45°С. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в нем удаление экстрагента из продукта центрифугиро вания осуществляют путем отгонки спирта под ва куумом при температуре не выше 45°С и после дующей лиофилизацией водного экстракта. 4. Способ по пп. 1-3, отличающийся тем, что в нем водный раствор этилового спирта содержит 65-75 вес % этилового спирта. 5. Способ по пп 1-4, отличающийся тем, что в нем весовое соотношение селезенки и экстраген та выбрано из интервала 1/6-1/3. 6. Способ по пп. 1-5, отличающийся тем, что в нем частоту указанного ультразвука выбирают из интервала 18-70 кГц. 7. Способ по пп. 1-6, отличающийся тем, что в нем указанное воздействие ультразвуком осу ществляют интенсивностью 0,1-2,3 Вт/см2, СМ О ю см Изобретение относится к области медицины и касается получения лекарственных средств из отходов животного сырья. Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из отходов животного сырья с применением органических растворителей [1,2]. Наиболее близким по технической сути является способ получения лекарственного средства (спленин) из селезенки крупного рогатого скота с применением дихлорэтана путем настаивания [3-5]. По этому способу селезенку предварительно подвергают автолизу, при температуре 7±3°С с последующим получением фарша. В реактор под вакуумом (69+10 кПа) подают фарш и экстрагент (дихлорэтан) в весовом соотношении 1:2 (одна часть фарша и две части ди хлорэтана). Экстракцию проводят при температуре 20°С путем настаивания в течении 5-6 суток, применяя в первоначальный момент перемешивание. После экстракции смесь отстаивается и разделяется на два слоя. Затем отделяют дихлорэтановый экстракт от мезги путем фильтрования через фильтр-грибок под вакуумом. Из экстракта удаляют дихлорэтан путем отгонки под вакуумом 69±10 кПа при температуре 45°С. Полученный водный экстракт обрабатывают 70% этиловым спиртом и петролейным эфиром. Эфирную фракцию отделяют, а из водно-спиртовой фракции удаляют спирт путем отгонки под вакуумом. К водному экстракту прибавляют 0,9% (массовых) NaCI марки ОСЧ (особо чистый). Содержимое взбалтывают до полного растворения NaCI, выдерживают в холодильнике при температуре 6±1°С, 14±1 часов. После высаливания содержимое фильтруют. 27540 Полученный водный экстракт разбавляют физиологическим раствором с последующей консервацией этиловым спиртом в пределах 9-11 объемных процентов. Из 552 кг фарша селезенки крупного рогатого скота получают 3,6±0,1 кг водного экстракта спленина, что в пересчете на исходное сырье составляет 0,04%. Недостатками этого способа являются: - низкий выход экстрактивных веществ, об ладающих биологической активностью; - большая длительность процесса экстракции; - применение экологически вредных раство рителей (дихлорэтан, петролейный эфир). Задачей изобретения является создание способа получения средства, обладающего антитоксической и радиопротекторной активностью, с увеличенным выходом и с сокращенной длительностью. В соответствии с поставленной задачей предлагаемый способ получения средства, обладающего антитоксической и радиопротекторной активностью включает в себя измельчение селезенки, воздействие на нее экстрагирующим агентом, отделение экстракта и последующее удаление экстрагента и отличается от прототипа тем, что в качестве экстрагирующего агента используют водный раствор этилового спирта, одновременно с указанным воздействием экстрагирующим агентом осуществляют воздействие низкочастотным ультразвуком и отделение экстрагента осуществляют центрифугированием. В предпочтительном воплощении способа удаление экстрагента из продукта центрифугирования в части его спиртовой составляющей осуществляется путем отгонки спирта под вакуумом при температуре, не превышающей 45°С. При этом получают водный экстракт с повышенной концентрацией конечного продукта. В другом предпочтительном воплощении способа удаление экстрагента из продукта центрифугирования осуществляется путем отгонки спирта под вакуумом при температуре не выше 45°С и последующей лиофилизацией полученного водного экстракта. При этом в качестве конечного продукта получают сухой экстракт в виде порошка с более длительным сроком хранения Целесообразно, чтобы водный раствор этилового спирта содержал 65-75 весовых процентов этилового спирта. В пределах указанных концентраций обеспечивается наибольший выход конечного продукта при наименьшей длительности процесса экстракции. При этом при концентрации спирта меньше 65% процесс экстракции неприемлемо удлиняется, а при концентрации спирта больше 75% уменьшается выход биологически активных веществ. Целесообразно выбрать весовое соотношение селезенки и экстрагента из интервала 1/6-1/3, что обеспечивает наибольший выход конечного продукта и наименьшую длительность процесса экстракции при прочих одинаковых условиях. При этом превышение указанного весового соотношения 1/3 уменьшает удельный выход конечного продукта При весовом отношении селезенки к экстрагенту меньшем 1/6 увеличивается объем и длительность процесса удаления экстрагента, при этом уменьшается экспрессность способа в целом. При получении в качестве конечного продук та водного экстракта дополнительно уменьшается концентрация биологически активных веществ в экстракте Предпочтительно частоту указанного низкочастотного ультразвука выбрать из интервала 1870 кГц В указанном интервале частот при прочих одинаковых условиях осуществляется наиболее полная и быстрая экстракция. За пределами выбранного интервала частот эффективность воздействия ультразвуком снижается, что приводит к неприемлемому снижению выхода продукта или к увеличению длительности экстракции. Предпочтительно выбрать интенсивность указанного низкочастотного ультразвука из интервала 0,1-2,3 Вт/см2, в пределах которого эффективность экстракции максимальна. При интенсивности меньше 0,1 Вт/см2, сильно снижается эф4>ективность экстракции. При интенсивности воздействия ультразвуком большей чем 2,3 Вт/см2 эффективность экстракции медленно снижается на фоне увеличения энергозатрат. Далее предлагаемый способ получения средства с антитоксической и радиопротекторной активностью из селезенки крупного рогатого скота описывается на примере предпочтительного осуществления. Свежую или свежезамороженную селезенку очищают от жировой пленки и измельчают, например с помощью мясорубки. К полученной измельченной массе добавляют пять весовых частей 70% водного раствора этилового спирта, полученную смесь помещают в ультразвуковую ванну. При температуре окружающей среды 20°С на указанную смесь воздействуют непрерывным ультразвуковым излучением с частотой 18 хГц и интенсивностью 2 Вт/см2. Через 45 минут содержимое ультразвуковой ванны помещают в центрифугу, где отделяют экстракт от мезги исходного сырья. Далее из продукта центрифугирования удаляют экстрагент в части его спиртовой составляющей путем отгонки под вакуумом 69±10 кПа при температуре 45°С. Далее водный раствор экстракта как и в основе - прототипе обрабатывают NaCI марки ОСЧ и фильтруют, что способствует удалению белков. В таком виде водный раствор полученного экстракта можно использовать для получения ампульной жидкой лекарственной формы. Для повышения удобства применения, хранения и транспортировки, водный раствор экстракта, подвергают лиофильной сушке и получают сухой порошок белого цвета с выходом биологически активных веществ порядка 5,4% от веса исходного сырья. Иные примеры осуществления предлагаемого способа с различающимися режимами и условиями осуществления сведены в таблицу 1. Приведенные примеры осуществлены при одинаковой длительности экстракции (45 минут) под действием ультразвука. Исключение составляет пример 7, по которому период экстракции был удлинен до 70 минут. Как видно из приведенных примеров в пределах оптимального диапазона весовые соотношения селезенки к экстрагенту (1/6:1/3), концентрация этилового спирта в его водном растворе 65-75%, а также оптимальных частот 18-70 кГц и интенсивности 0,1-2,3 Вт/см2, воздействия ультразвуком предлагаемый способ обеспечивает выход сухого продукта, превышаю 27540 щего 5% от веса исходного сырья За пределами диопротекторной активности не уступает, а по неуказанных интервалов выход продукта относи- которым параметрам противоопухолевой активности и тельно исходного сырья становится меньше 5%, нормализации азогистого обмена превосходит спленин хотя и в этом случае превышает выход по способу (см. табл. 2) прототипа на порядок и более Использование заявленного изобретения Были проведены сравнительные испытания позволит: фармакологической активности и параметров получения препаратов, полученных из селезенки крупного рогатого скота по способу прототипу (спленин) и по предлагаемому способу (узсплен), результаты которых по сравнению с контрольными наблюдениями сведены в таблицы 2, 3. Полученное средство по предлагаемому техническому решению по антитоксической и раь выход целевого продукта; - повысить ресурсосбережение; - улучшить экологическую обстановку при получении продукта В то же время предлагаемый способ позволяет сохранить, а по некоторым параметрам улучшить биологическую активность полученного препарата. Таблица 1 Мб примеров осу ществл ения способа 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 № Весовое отношение селезенки к Концентрация спирта экстраг. 1.6 1:5 1:3 1:7 1:2 1:5 1:4 1:5 1:5 1:4 1.5 1:6 1.5 1:5 1:5 1:5 Частота ультразвука (кГц) Интенсивность ультразвука 2 (Вт/см ) 70 72 68 75 70 65 60 80 70 70 70 65 75 70 70 70 40 35 45 25 40 25 50 30 20 70 85 18 40 45 50 45 Выход сухого продукта в % от исходного сырья 1.5 2.0 1.8 1.0 1.5 0.8 0.5 0.9 2.3 1.0 1.0 1.2 2.5 3.0 0.1 0.08 5.4 5.3 5.3 5.4 4.8 5.3 5.0 4.9 5.3 5.2 4.9 4.7 4.9 4.8 5.0 4.5 Таблица 2 Сравнительные характеристики фармакологической активности препаратов из селезенки КРС - спленина и узсплена Показатель Гр /ппа наблюдения Спленин Узсплен Количество нейрогенных язв желудка 12,7±1,6 11.112,9 6,0±1,2 у беспородных мышей на фоне острого стресса, шт 2 Средний вес карциомы легких 5,0±0,5 4,9±0,4 3,6±0,3 Льюис у мышей линии BLac, г. 3 Средняя площадь метастазов 4,5±0,4 3,9±1,0 0,8±0,5 карциомы легких Льюис у мышей линии BLac, мм 4 Средний объем асцитических клеток 2,9±0.3 2,5±0.1 1.4±0,2 опухоли Эрлиха у мышей линии BLac, мл 5 Содержание мочевины в сыворотке 47,6±1,3 19,8±5.1* 9,6±1,4* крови крыс разводки Вистар с острым фон сулемовым неврозом, Ммоль/л 6,4±0,5 6 Содержание - липопротеина в сыво1,2±0,1 1.0±0,1 2,3±0,1 ротке крови беспородных крыс с CCL - гепатитом, уел ед. Примечание: - различия статистически достоверны при Р < 0,05 в сравнении с контролем. 1 - Адаптогенные свойства узсплена на модели острого стресса мышей по Ю.И. Добрякову (1978) проявились в достоверном снижении среднего числа изъявлений на слизистой желудка. 2 - Введение узсплена мышам линии BLac приводило к достоверному торможению роста основного очага опухоли 3 - Противоопухолевые свойства узсплена на модели карциомы легких Льюиса были наиболее выра жены в отношении процесса метастазирования, о чем свидетельствует площадь метастазов опухоли. 4 - Противоопухолевые свойства узсплена в отношении роста перевиваемой опухоли подтверждены Контроль 1 - у в е л и ч и т и на модели асцитной карциомы Эрлиха. Активность уэеллена превосходила таковую спленина 5 - На фоне острого сулемового нефроза крыс узсплен способствовал нормализации азотистого об мена, судя по достоверному снижению мочевины в крови, в два раза превосходя по активности спленин 6 - В условиях CCL - гепатита крыс установлено, что узсплен обладает гепатопротекторным свойст вом, судя по уровню липопротеинов в сыворотке крови. 27540 Таблица 3 Сравнительная характеристика параметров получения спленина (прототипа) и ультразвукового экстракта по предлагаемому техническому решению N9 П/П Параметры процесса 1 2 Сырье Подготовка \ Спленин (прототип) Сухой ультразвуковой экстракт [предлагаемое техническое решение) сырья Селезенка крупного рогатого скота. Автолиз в течение 5-6 суток при температуре (3-7) Гр С Очистка от жировой пленки после автолиза. Приготовление фарша. Селезенка крупного рогатого скота. Очистка от жировой пленки свежей или свежезамороженной селезенки Измельчение на куски. 3 Экстрагент Дихлорэтан 70% этиловый спирт 4 Соотношение сырье:экстраг. 1:2 1:5 5 Температура экстракции (20±3) Гр.С. 6 Продолжител. эстракции 120+ 144 часа 30+45 минут 7 Вид экстракции Настаивание Ультразвуковая 8 Выход экстрак. веществ % к сырью 0,04% 5,43±0,04 9 Вид готовой продукции Раствор Сухой порошок 10 Дополнительные материалы 70% этиловый спирт Петролейный эфир Не требуются Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (0 31 22) 3- 72- 89 (0 31 22) 2- 57- 03 (20±3) Гр.С.