Засіб для визначення лейкоцітів в сечі

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (5У 4 G 01 N 3 3 / 6 8 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР (21) 3278845/28-U (22) 08.05.81 (31) Р 3017721.0 (32) 0 9 . 0 5 . 8 0 (33) D E (46) 1 5 . 0 3 . 8 9 . Бюл, & 10 (7 0 Берингер Маннхайм ГмбХ (DE) (72) Дитер Бергер, Гюнтер *реч, Еольфганг-Райнхольд Кнаппе, Манфред Кур, Вальтер Риттерсдорф и Вольфганг Еернер (UE) (53) 612,015 (088.8) (56) Заявка на патент ФРГ № 2240471, кл„ G 0! N 33/16, 1974. I Изобретение относится к медицине, в частности к средствам для в и з у ального ИПІІ фотометрического о п р е д е ления лейкоцитов в моче по уровню ферментов. Цель изобретения - повышение чувствительности средства. Поставленная цель д о с т и г а е т с я з а с ч е т использования реактива на осно*ве диазоциевой соли производных б е н з о л а общей формулы 1 где R4 - водород» хлор, бром, С,,-Суа л к и л , С,-С£-алкокси, группа метилмеркапто, М~ (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЧЕ * (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повышение чувствительности с р е д с т в а . Фильтровальную бумагу пропитывают средством, содержащим водный буфер из буры и соляной: кислоты, основной реактив и дополнительный. Затем фильтроваль-* ную бумагу погружают з MO4ys с о д е р жащую 200 лейкоцитов/мкл, Чувстви-' тельность с р е д с т в а тем выше, чем интенсивнее о к р а с к а . 7 т а б л . пиррилидино, в случае необходимости замещенная метилом группа N-пштеразино, группа N-пиперидиноі R^ - водород, Cj-C^-алкил, метокси» бром; R 3 ' водород, фтор, хлор, бром, гидроксил,, С ч -С ? -алкил, С, -Су-алкокСІІЛ^ группа меті-шамино, Г^-С^-диалкиламино, в случае необходимости замещенная метилом или метокси фенильная группа, группа фенокси, Nморфолиио» N-тиоморфолино t группа Ы-пирролидиио, в случае необходимости замещенная метилом группа N-пкпераэино, N-пиперидиио, метилмеркапто; R^ - водород, метил, метокси» бром; R ? - водород, С,-С 5 -алкил, С 1 - С 5 - а л к о к с и > метилмеркяпто, бром и хлор; 3 1466663 X - тетрафгорборат, перхлорат к і 3 - водород, метил, этил, метоки тетрахлорцинкат, си, а также два согедних заместитеи в качестве дополнительного реактн-* ля R10 , R14 , R , г и R,3 ' аннелированва содержит соединение обпей форму5 ное бензольное кольцо; лы I I А - аланил, L-аланил-аланил, L-аланил-аланил-аланил, валил, фенилаланил, лейцил, глицил; А-В В - толуолсульфонил, ацил, 10 бензаил^ бензилоксикарбонил, зцетамидо-бенэолсульфонил, бензоилкарбонил и метокситозил, при следующих соотношениях компоненгде R - водород, хлор, бром, метокси, тов, мол./%: '5 Соединение формулы 1 0,05-25 пентил водород, бром, С^-С^-алкил, Соединение формулы I I или соединение формуметокси нитро, ацетиламино, аннелиг' рованное бензольное кольцо; лы I I I 0,05-25 R g - водород, бром, метил, эток-, Остальное Буфер с рН 6-Ю си, бензил, аннелированное бензоль20 Средство получают путем простого ное кольцо; смешивания его ингредиентов в у к а Rcj - водород, бром, метил, фенил; занном соотношении. А - аланил, Ь-аланил-аланил, Соединение общей формулы I I I L-аланил-аланил-аланил, глицил, ва1получают путем взаимодействия соеди2 5 лил, L-лейцил, фенилаланил; нения общей формулы IV Б - бензоил, толуолсульфонил, ацетил, бензилоксикарбонил, анетимидо-бензолсульфонил и метокситозил, или содержит соединение общей форму30 лы I I I где R10 - имеют указанные значения, 35 с соединением общей формулы V Н - А* - В* ; О г д е й 1 0 - водород, С,,-С 5 -алкил, С , С ? - а л к о к с и , метиламино, диметиламино; R.( - водород, э т и л , метил, метокс и , диметиламино, диэтиламино; R 1 2 - водород, метил, С 1 -С д .-алко к с и , С,,-С 3 -алкилам1(ро, дилропилами45 но; где А* и в' имеют указанное значение, или его реакционноспособным производным. Реакцию проводят известными в химии пептидов приемами. В приведенных примерах испытывают средства, содержащие реактивы, приведенные в т а б л . 1 - 3 . Т а б л и ц а ! Реактив к. 1 2 •3 1 сн } с,н 7 с 5 н„ оси, н 2. 3 4 5 6 ОС5Н„ S—СН» к, R, н н сн 3 н я. 4 5 6 сн. н н н н сн, н н н ос 5 н ч С 5Н11 н н н оац н S-CHj " — —— — X 1 ПА * 7 8 cin 4 117 98 93 115 142 BF 4 BF+ BF 4 BF 4 BF 4 *-• (раэл.) 96 1466663 Продолжение табл.] Г ЕПИІГП 7 н 0-Г 5 Н„ Н 1 8 122 Н ч н 13 н BF. 119 н н н BF, 105 BF. 108 н н н н. н BF. 108 BF, 92 сн я н BF. 102 н н BF, 93 н Вг С1 Вг BF. 127 123 н н 11 12 н г-н 10 н осн О н /—ч 14 15 Г6 СІ Вг 17 СН, н в BF. 117 18 19 20 21 н н н сн, н н н н н н н сн, BF 4 BF4 BF4 89 142 146 137 22 н н н BF, 121 BF4 108 BF, 117 BF 93 128 осн 23 24 н ОСНз и н осн 3 н н 2& 29 30 осн, осн, н н н н 31 осн; н осн, н 2$ 27 32 С1 F оосн 5 н = 8 > 2, 6 і ,3 2, Л 2, 4 , 2, 7 , , 2, 6 2, 4 , , 2, 2 , 2, 5 2,6 2,7 Л 2,4 2,4 2,6 Согласно прототипу 35 і 0,3 Известное средство 1 0,8 40 Сравнение данных по экстинкции через 3 мин, приведенных в табл.5, свидетельствует о том, что предлага* емое средство1 проявляет более высо45 кую чувствительность, чем известнові Ч р и м е р 3. Процесс проводят согласно примеру 2, за исключением 'того,что используют средства, содержащие по 10 или 25 мол,% реакти50 ва и дополнительного реактива, указанных в табл.6. 15 1466663 16 Т а б л и ц а б Активные вещества Реактив Содержание реактива, мол.% средства Дополнительный реактив Предлагаемое 1 1 I 1 10 10 10 10 20 20 20 20 30 30 30 30 10 • 25 10 25 Ю 25 10 25 10 25 10 25 10 25 10 25 1 1 1 1 10 10 X X 20 20 XX XX 26 26 XXV XXV Содержание допол нительного реактива, мол.% й ЭКС средство 10 25 10 25 10 25 10 25 10 25 10 25 10 25 10 25 2,6 2.7 2,6 2,8 2,3 2,5 2,5 2,7 2,7 2,9 2,8 3,0 2,8 2,9 2,7 2,9 Согласно прототипу 1 1 10 25 Известное средство 1 1 10 25 0,4 0,9 1,1 ж) трис-буфер с рН 6; Сравнение данных табл.6 свидетельз) трис-буфер с рН 8. ствует о том, что при высоком содерРезультаты опытов приведены в жании активных веществ известные средства уступают по чувствительтабл.7. ности предлагаемому с о с т а в у . Т а б л и ц а П р и м е р 4. Процесс ведут ана- 45 _ Д экс. логично примеру 2, з а исключением Опыт Дополнитого» что используют средство, с о Дополнидержащее I молЛ р е а к т и в а ( 1 , 1 мол.% тельный тельный дополнительного реактива 1 или X ** реактив 1 реактрв 1 '50 98 мол.% следующего водного буфера: 2J 2,6 а) натриево-боратный/соляная киса) 2.7 2,6 лота с рН 8; б) 2,4 2,3 б) натриево-боратный/борная кисло в) 2,4 та с рН 8; 2,3 г) 55 2,6 2,5 в) натриево-боратный с рН 6; д) 2,2 2,2 в) г) калиево-фосфатный с рН 6 ; 2,4 ж) 2,3 д) калиево-фосфатный с рН 8; 2,6 2,5 е) калиево-фосфатный с рН 10; э) 17 Ф о р м у л а U66663 и з о б р е т е н и я где R 6 - водород, хлор, бром, метокси, пентил; Средство для определения лейкоциRT - водород, бром, С,-С^-алтов в моче, содержащее реактив на кил, метокси, нитро, ацетиламино, основе диазоние.вой соли производных аннелированное бензольное кольцо; бензола и буферное вещество, о т л и Ro - водород, бром, метил, ч а ю щ е е с я тем, что, с целью этокси, бензил, аннелированное бенповышения чувствительности средства, зольное кольцо; оно содержит в качестве диазониевой 10 R^ - водород, бром, метил, соли соединение общей формулы I фенил; А - аланил, 1,-аланил-аланил, L-аланил-аланил-аланил, глицил, в а лил, L-лейцил, , фенилаланил; В - бензоил, толуолсульфонил, ацетил, бензилоксикарбонил, ацетимидо-бензолсульфонил и метокситозил, или содержит соединение общей формугде R, - водород, хлор, бром, С,-Су-алкшГ, С 4 - С 5 -алкокси, группа 20 л ы 1 1 1 О - А ' - В 1 •;;.• ••;;• метилмеркапто, N-морфолино , fJ-тио. морфолино, N-пиррилидино, в случае необходимости замещенная метилом группа N-пиперазино, группа N-пнперидино; 25 R2 - водород, Cf-Cj-алкил, где R,o - водород, С 1 -Су-алквп» метокси, бром; С 1 -С 5 **алкокси, метнламино; диметилR- водорпд, фтор, хлор, бром, амино; гидроксил, С,~С ? -алкил, С,-С 5 -алкокR,, - водород, этил, метил, месил, группа метиламино, С^-Сзр-диалтокси, диметиламино, диэтиламино; зо киламино, в случае необходимости з а R(i - водород, метил, С^-Ср-алкмещенная метилом или метокси фенильокси, С^-С^-алкиламино, дипропилами- • ная группа, группа фенокси, N-морно; - . • ' • ' • фолино, N-тиоморфолино, группа N-* R ,з - водород, метил, этил, пирролидино, в случае необходимости метокси, а таже два соседних заместизамещенная метилом группа N-пиперат 35 теля R 10 , RM , R AZ и К п - аннелирозино, N-пнперндино, метилмеркапто; ванное бензольное кольцо; R^ - водород, метил, метокси, А* - аланил, L-аланил-аланил, бром; L-аланил-аланил-аланил, в алил, феR5 - водород, d - С ^ а л к и л , 40 нилаланил , лейцил, глицил; С*-Се--алкокси, метилмеркапто, бром В - толуолсульфонил, ацил,' и хлор; бензоил, бензилоксикарбонил, ацетамидо-бенэолсульфонил, бензоилкарбоX - тетрафторбо.рат, перхлонил и метокситозил, рат и тетрахлорцинкат, и в качестве дополнительного реакти- 45 при следующих соотношениях компоненва содержит соединение общей форму.тов, мол.%: .'•••. лы I I . Соединение общей . формулы Г 0,05-25 • Соединение общей . . 0-А-Ъ формулы I I или сое50 динение общей формулы I I I 0,05-25 Буферное вещество с рН 6-10 , •.Остальное . •ЪЛ'"' 1466663 Редактор А.Огар Составитель А.Агуреев Техред М.Ходанич Корректор М.Гамборскяя Заказ 961/59 Тираж 788 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКИТ СССР НИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,101