Протипухлинна вакцина, що містить моноклональне антиідіотипове антитіло проти са-125 та алюміній

1. Фармацевтична композиція для парентерального введення як протипухлинна вакцина, яка містить моноклональне антитіло і похідну алюмінію як ад'ювант, в якій концентрація іонів алюмінію у межах від 2,4 мг/мл до 5,2 мг/мл, причому: - згадане моноклональне антитіло являє собою моноклональне антиідіотипове антитіло MEN2234 проти СА-125, адсорбоване сполукою алюмінію, яке містить Послідовність № 1 та Послідовність № 2, і концентрація якого становить від 0,1 мг/мл до 4 мг/мл; та - згадана сполука алюмінію вибрана з-посеред гідроксиду алюмінію та фосфату алюмінію і суспендована у забуференому фізіологічному розчині. 2. Фармацевтична композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що концентрація похідної алюмінію у 2 (19) 1 3 Цей винахід стосується галузі фармацевтичних композицій, призначених для застосування як вакцина для парентерального введення. Як відомо, при одержанні фармацевтичних лікарських форм для посилення імуногенності профілактичних або терапевтичних вакцин вдаються, як правило, до застосування ад'юванту, наприклад, сполуки алюмінію, у вигляді розчинів або суспензій для парентерального введення (Ф'єжка (Fiejka) та інші, Rocz Panstw Zakl Hig 1993, 73-80). Мета введення цих композицій полягає у одержанні максимального та тривалого імуногенного ефекту. Однак до цього часу у складі зареєстрованих вакцин, що знаходяться у продажу, застосовується обмежена кількість алюмінієвих ад'ювантів, і фактично Європейською Фармакопеєю встановлюється межа у 1,25 мг/доза. Окрім того, FDA (Управління з санітарного нагляду за харчовими продуктами і медикаментами США) у 21 CFR 610.15 (Зведення федеральних постанов СІЛА) встановлює, що кількість алюмінію у рекомендованій індивідуальній дозі біологічного продукту не повинна перевищувати: (1) 0,85 мг у разі експериментального визначення; або (2) 1,14 мг у разі розрахунку, виходячи з кількості доданої сполуки алюмінію; або (3) 1,25 мг у разі експериментального визначення, за умови, що дані демонструють, що застосована кількість алюмінію є безпечною і необхідною для одержання бажаного ефекту. Було доведено, що імуногенність антитіл, адсорбованих алюмінієвими ад'ювантами, залежить від ступеня адсорбції (Капелль (Capelle) та інші, Vaccine 2005, 1686-1694), але невідомим залишається найкраще відношення для застосування з метою досягнення максимальної імуногенної реакції з одночасним збереженням профілю безпеки. Всесвітня організація охорони здоров'я (WHO) рекомендує, наприклад, адсорбцію алюмінієвими ад'ювантами на рівнях токсоїдів із перевищенням 80% у разі правцевих та дифтерійних токсощів (Гупта (Gupta) та інші, Vaccine 1995, 1263-1276; WHO Technical Report Series No. 595, 1996, crop. 6). У протилежність до цього, опубліковані факти, які демонструють, що адсорбція правцевих компонентів гідроксидом алюмінію з перевищенням рівня 80% не посилює імунної реакції у здорових дорослих осіб (Паолетгі (Paoletti) та інші, Infect. Immun. 2001, 6696-6701). Найприйнятніший вміст сполуки алюмінію для підвищення до максимального рівня імуногенності вакцини, яка містить моноклональне антитіло (без ризику неприйнятного токсичного побічного ефекту), все ще залишається відкритим технічним питанням. Іншою технічною проблемою є стабільність вакцин, яка коливається у значних межах. За своєю стійкістю у разі збереження при підвищених температурах вакцини можуть бути розташовані в такому порядку: вакцини з дифтерійним та правцевим токсощами та вакцина проти гепатиту В демонструють найвищу термостабільність, ліофілізовані вакцини проти кору, жовтої лихоманки та 95806 4 туберкульозу (BCG) займають середнє положення, і найбільш нестійкою є пероральна вакцина проти поліомієліту (Галазка (Galazka) та інші, Thermostability of vaccines, World Health Organisation, 1998). Відновлені вакцини проти кору, жовтої лихоманки та туберкульозу (BCG) є нестійкими; при проведенні кампанії вакцинації вони повинні застосовуватись як найшвидше після відновлення і зберіїатись на водяній бані з температурою 0C Незважаючи на те, що вакцини з правцевим або дифтерійним токсоїдом (наприклад, адсорбованим солями алюмінію), у вигляді моновалентних вакцин або складових елементів комбінованих вакцин, є стійкими впродовж тижнів при температурі 350 37 C, наслідком кожного випадку піддання вакцин впливу температури навколишнього середовища є певний ступінь їх розкладу (Галазка (Galazka) та інші, дивись вище, стор. 48). Отже для вакцин цих "стабільних" типів рекомендованим також є зберігання за умов охолодження (Rote Liste, Edition Cantor Verlag, 2005). Невирішеною технічною проблемою для вакцин цього типу, які містять моноклональні антитіла, є низька стабільність при температурах навколишнього середовища. Унаслідок природи активної речовини, яка являє собою складний білок, ці готові лікарські форми повинні зберігатись за умов охолодження (28°С), що вимагає постійного охолодження. Це призводить до підвищення витрат на збут, ставить під загрозу загальну безпечність і, що є можливо більш важливим, обмежує застосування по усьому світу надзвичайно благотворних лікарських засобів, наприклад, протиракової вакцини. Розробка вакцинних композицій, які забезпечують постійний рівень якості готових лікарських форм навіть при температурах навколишнього середовища і більших за них (25-37C), поліпшила б загальну безпечність та ефективність цих лікарських форм. Це було б не тільки дуже корисним для хворих, але забезпечило б також загальне спрощення застосування цих цінних лікарських форм. З іншого боку, добре відомою є важливість імунотерапії при лікуванні пухлин у людей, зокрема, застосування моноклональних антиідіотипових антитіл як протипухлинних терапевтичних вакцин. Такі вакцини повинні активувати імунну систему хазяїна зі стимулюванням гуморального та клітинного впливу на пухлину. Розробка і визначення композиції такого типу є особливо важливими для ACA125/MEN2234 (опис наведено у ЕР700305), яке являє собою надзвичайно перспективне антиідіотипове моноклональне антитіло, призначене для застосування у ролі терапевтичної вакцини проти раку яєчника. Згадане антитіло MEN2234 одержало наведену нижче назву за Індексом ракових антигенів: імуноглобулін G1, анти-(мишаче OC 125) (мишаче моноклональне АСА-125, клон 3D5, g-ланцюг), дисульфід із мишачим моноклональним АСА-125, клон 3D5, кланцюг, димер. Відповідним реєстраційним номером хімічної реферативної служби є 792921-10-9. Запропонованою міжнародною незапатентованою назвою є абаговомаб (Abagovomab). 5 Амінокислотна послідовність MEN2234 наведена нижче. MEN2234 являє собою мишаче моноклональне антитіло, що одержують проти мишачого моноклонального антитіла OC125, яке розпізнає пухлиноспецифічний антиген (TAA) CA125. MEN2234 ефективно імітує тривимірну структуру СА125 TAA і завдяки цьому індукує у хазяїна продукування антиантиідіотипових антитіл (Аb3), спрямованих проти пухлинних клітин, які експресують антиген СА125. MEN2234 є також здатним до викликання у хазяїна клітинної імунної реакції, специфічно спрямованої проти пухлинних клітин, які експресують СА125. Приблизно у 80% хворих із задавненим раком яєчника спостерігається підвищена експресія СА125. Незважаючи на те, що СА125 надекспресується у разі раку яєчника, сам людський організм є неспроможним до розвитку ефективної імунної реакції проти цих ракових клітин. Лікування терапевтичною вакциною, яка містить MEN2234, натомість повинно активувати імунну систему хазяїна для агресивного впливу на дисеміновані клітини раку яєчника і знищення їх. У ЕР700305 наведено опис моноклональних антиідіотипових антитіл проти CA125, але не надається опису специфічної фармацевтичної композиції, придатної для лікування патологій. У журналі Hybridoma, 1995, 14 (2), 164-174, наведено характеристики антитіла АСА-125, але немає опису розробки композиції. У журналі Clinical Cancer Research, 2004, 10, 1580-1587, наведено опис вакцинації хворих за допомогою АСА-125; даних щодо концентрації алюмінію у згаданій композиції не розкривають, але фахівець у цій галузі, виходячи з відомого рівня техніки, може легко припустити відносно низьку концентрацію алюмінію як ад'юванту (менше за 1,25 мг на індивідуальну дозу). У журналі Hybridoma, 2005, 133-140, наведено опис системи доставки для безперервного ендогенного виділення ACA125hFc (химерна форма АСА-125) для поліпшення його імуногенності як вакцини проти раку яєчника, але там йдеться про препарат пролонгованої дії in vitro на основі технології біокапсулювання. У інших публікаціях узагальнюють результати передклінічних та клінічних досліджень вакцин проти раку яєчника, у тому числі MEN2234, але не наводять конкретних даних щодо композиції або застосованої концентрації ад'ювантів (наприклад, сполука алюмінію не згадується): (Clinical Cancer Research, 2004, 1580-1587; Clinical Cancer Research, 2003, 3234-3240; Clinical Cancer Research, 2001, 1154-1162; Clinical Cancer Research, 2001, 1112-1115). Докладний опис винаходу Цей винахід пропонує фармацевтичну композицію для парентерального застосування (за варіантом, якому віддається перевага, підшкірного або внутрішньом'язового), яка містить моноклональне антиідіотипове антитіло MEN2234, адсорбоване сполукою алюмінію, вибраною з-посеред гідроксиду алюмінію (галун) 95806 6 або фосфату алюмінію, і суспендують у водній забуференій системі. Застосування високих концентрацій (значно вище концентрацій, які звичайно розглядаються і рекомендуються) сполуки алюмінію у ролі ад'юванту надає вакцині неочікувані клінічні та фармацевтичні переваги, такі як: I. Гарантія надзвичайно високої специфічної імуногенності як для гуморальної, так і для клітинної імунних реакцій; II. Гарантія тривалої індукції і підтримання імунної реакції; III. Гарантія безпечного введення лікарського препарату; IV. Спрощення методики виготовлення і промислового випуску кінцевої готової лікарської форми; V. Підвищення ступеня узгодженості процесів виготовлення; VI. Поліпшення стабільності готової лікарської форми у діапазоні підвищених температур. Фармацевтичні композиції за цим винаходом містять антиідіотипове антитіло MEN2234 у кількості від 0,1 мг/мл до 4 мг/мл, за варіантом, якому віддається перевага, від 0,2 мг/мл до 2,5 мг/мл, за варіантом, якому віддається ще більша перевага, з концентрацією приблизно 2 мг/мл (від 1,9 мг/мл до 2,1 мг/мл). Антитіло MEN2234 адсорбується сполукою алюмінію (за варіантом, якому віддається перевага, з концентрацією алюмінію приблизно 3,5 мг/мл) і суспендується у забуференому та ізотонічному фізіологічному розчині. Ці композиції не потребують жодного іншого інгредієнта, окрім антитіла, адсорбованого сполукою алюмінію, і солей буферів, результатом чого є дуже простий розчин, позбавлений будь-яких додаткових проблем із безпечністю, які могли б виникнути у разі застосування інших реагентів, наприклад, стабілізаторів, антиоксидантів, інших ад'ювантів тощо. До буферів, яким віддається перевага, належать буфери, одержані з фосфатними або цитратними солями. Кінцева композиція, за варіантом, якому віддається перевага, містить 1 мл продукту, призначеного для парентерального введення, переважно шляхом підшкірних або внутрішньом'язових ін'єкцій. Однією з головних відмінностей цього винаходу є те, що, для забезпечення майже повної адсорбції MEN2234 адсорбентом, необхідною є відносно висока концентрація сполуки алюмінію, вибраної з-посеред фосфату алюмінію та гідроксиду алюмінію; гідроксиду алюмінію віддають вкрай високу перевагу (довідкова Таблиця 1). +++ Концентрація алюмінію (Аl ) у композиціях, якій віддається перевага, знаходиться у межах 2,45,2 мг/мл, за варіантом, якому віддають найбільшу перевагу, вона становить приблизно 3,5 мг/мл (у межах 3,1-3,8 мг/мл), що відповідає масовому вмісту гідроксиду алюмінію у межах 0,7-1,5%, за варіантом, якому віддається перевага, 1% (у межах 0,9-1,1%). 7 95806 8 Таблиця 1 Залежність адсорбції MEN2234 (неадсорбований білок) від концентрації алюмінію (гідроксид алюмінію) Концентрація АІ +++ [мг/мл] 0 0,9 1,2 1,7 2,6 3,5 6,9 AI(OH)3 [%] 0 0,25 0,36 0,5 0,75 1,0 2,0 Вміст гідроксиду алюмінію, який становить 1%, +++ відповідає вмісту алюмінію (А1 ) приблизно 3,5 мг/мл, що значно перевищує вміст, який на цей час застосовують у зареєстрованих вакцинах, наявних на ринку, і загалом рекомендований службами та органами охорони здоров'я. Ці композиції можна одержати за стандартними методиками, добре відомими у цій галузі. Загальна методика, яка може застосовуватись, наведена нижче. Кінцевий продукт одержують шляхом змішування розчину антитіла і ад'юванту (гель сполуки алюмінію) за визначених умов. Готова лікарська форма повинна задовольняти вимоги до стерильності за монографією "Parenteral preparation" ("Парентеральний препарат") Європейської Фармакопеї. Унаслідок цього, за законодавчими вимогами, процес виготовлення буде здійснюватись з додержанням асептичних умов. Усі застосовані інгредієнти є стерильними і у процесі виготовлення фільтруються у формі розчину через фільтр Неадсорбований білок [%] 100 78 59 30