Спосіб деконсервації сперми бугаїв

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. Известен способ деконсервации спермы быков, включающий обработку спермы раствором, содержащим лимоннокислый натр 3-замещенный 5-водный и дистиллированную вод, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Лимоннокислый натр 3-замещенный 5-водный 2,9 Вода дистиллированная остальное (при этом рН не учитывается и не изменяется), температура раствора должна составлять 38-40°С. Недостатком предлагаемого способа является неотрегулированность раствора по рН. Результаты многочисленных проверок свидетельствуют о том, что рН 2,9% раствора цитрата Na неодинаково, разница рН в одинаковых по содержанию цитрата Na растворах составляет 0,16-0,18. Кроме того, активизация спермиев после размораживания недостаточна, особенно, если используются способы обработки нативной спермы с введением дополнительных гипобиотических факторов. Задачей предлагаемого изобретения является совершенствование способа деконсервации спермы быков, в котором увеличение продолжительности жизни сперматозоонов после их оттаивания достигается путем обработки репродуктивных клеток средой, содержащей раствор цитрата натрия и бикарбоната калия, отрегулированной по содержанию водородных ионов. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что при деконсервации спермы быковпроизводителей в раствор цитрата Na при температуре 38~40°С дополнительно вводят бикарбонат калия при следующем соотношении компонентов, мас.%: Лимоннокислый натр 3-замещенный 5-водный 2,76-2,88 Бикарбонат калия 0,50-0,75 Вода дистиллированная Остальное при этом рН доводят до 6,0-6,1. По сравнению с применяемой на производстве средой (2,9-3,0% раствор цитратат натрия) предлагаемый способ содержит дополнительно бикарбонат калия, который, как известно, активирует обменные процессы между протоплазмой клетки и внешней средой через полупроницаемую мембрану. Кроме того, общепринятая среда в производственных условиях не проверяется по содержанию водородных ионов. Мы же во время исследований постоянно определяли с помощью иономера рН раствора цитрата натрия заводской расфасовки и предлагаемой среды. Было установлено, что рН стандартной (производственной) среды варьирует в пределах 8,00-8,36. Опытные среды применялись в нескольких вариантах, значение рН которых колеблется в пределах 5.88.1. Таким образом, изучалось воздействие кислой, нейтральной и щелочной среды на сперматозоона. В результате проведенных исследований установлено, что оптимальная концентрация бикарбоната калия равнялась 0.5-0,75 мас.%, что соответствует физиологической норме, при рН 6,0-6,1. Существует тесная корреляция между подвижностью деконсервированных сперматозоонов после пяти часов инкубации при 38°С (нормальная температура тела крупного рогатого скота) и продолжительностью их жизнедеятельности. В опытных образцах спермы подвижность сперматозоонов была почти в 2 раза выше, нежели в контрольных образцах. Таким образом, гаметы, обработанные во время деконсервации предлагаемым способом, дольше сохраняют способность к оплодотворению яйцеклетки, что способствует увеличению выхода потомства Ожидаемый технический результат от использования предлагаемого способа - активность сперматозоидов, деконсервированных в стандартном 2,9%-растворе цитрата Na, после 5-часовой выдержки при температуре 38-40°С была на 0,80 балла ниже, чем в опытных образцах (табл.1). Пример 1. Гранулы замороженной спермы от 2 быков британо-фризской породы деконсервировали в обычной среде (2,9% растворе цитрата Na) и опытной при следующей соотношении компонентов, мас.%: Цитрат Na 2,70 Бикарбонат калия 0,25 Вода дистиллированная Остальное, при этом рН доводили до 5,8. Температура обеих сред была 38°С. В опытных образцах активность деконсервированной спермы была 2 балла, а у прототипа - 4,075 балла (табл.2). После 5 часов выдержки в опытных образцах не было ни одного полноценного спермия. Пример 2. Сперма тех же быков использовалась и в следующем опыте по деконсервации. В отличие от предыдущего опыта способ обработки спермы отличался соотношением компонентов, мас.%: Цитрат Na 2,76 Бикарбонат калия 0,25 Вода дистиллированная Остальное, а рН доводили до 5,9. Активность деконсервированной спермы после 5 ч выдержки была на 28,2% выше, чем в прототипе. Пример 3. При соблюдении той же технологии сперму деконсервировали путем обработки ее следующей средой, мас.%: Цитрат Na 2.82 Бикарбонат калия 0,50 Вода дистиллированная Остальное, а рН составило 6,0. Один из основных показателей качества размороженной спермы - активность после 5 ч выдержки при 38°С составила 1,65 балла, что на 94,1% больше, чем в прототипе. Пример 4. Для того, чтобы определить оптимальные параметры предлагаемого способа деконсервации был проведен следующий опыт. Для размораживания образцов прототипа использовалась та же стандартная среда, состоящая из цитрата Na и дистиллированной воды при температуре 38°С. Опытные образцы обрабатывались средой, состоящей из мас.%1 Цитрата Na 2,98 Бикарбоната калия 0,75 Воды дистиллированной Остальное, а рН составляло 6,1. По сравнению с предыдущим опытом активность сперматозоидов после 5 ч выдержки была на 0,50 балла ниже, но на 35,3% выше по сравнению с прототипом. Пример 5. Деконсервацию спермы проводили также следующим образом. Соотношение компонентов, мас.%: Цитрат Na 2,94 Бикарбонат калия 0,75 Вода дистиллированная Остальное, а рН 6,2 опытного способа обработки спермы по сравнению с прототипом оказалось не перспективным, так как после 5 ч выдержки в исследуемых образцах были лишь единичные прямолинейно движущиеся спермин, а сразу же после размораживания активность сперматозоидов была на 0,975 балла ниже в опытных образцах по сравнению с прототипом.