Спосіб стимуляції репаративної регенерації кісткових тканин

Спосіб стимуляції репаративної регенерації кісткових тканин, що включає застосування аутологічних клітин, нанесених на біоматрицю для регенерації дефектів щелеп, який відрізняється тим, що як клітини використовують клітини кісткового мозку, суспензію клітин крові, фібробласти шкіри, а як біоматрицю - колапан. (19) (21) u200602060 (22) 24.02.2006 (24) 15.08.2006 (46) 15.08.2006, Бюл. № 8, 2006 р. (72) Яриніч-Бучинська Наталія Петрівна, Скрипніков Петро Миколайович, Богашова Лідія Яківна, Боброва Нелля Олександрівна, Кайдашев Ігор Петрович (73) Яриніч-Бучинська Наталія Петрівна, Скрипніков Петро Миколайович, Богашова Лідія Яківна, 3 16622 4 Для демінералізації кісткового матрикса у щурез 2 дні моношар фібробластів відокремлювали рів брали циліндр з кортикальної частини діафіза, від скла за допомогою розчину версену, відмивали частково подрібнювали і занурювали у посудину з у фосфатно-сольовому буфері, розводили в пожимагнітною мішалкою. Кістки оброблювали послідовному середовищі до концентрації 3х108/мл. вно 2год в дистильованій воді, по 1год в 70%, 96%, Для дослідження реконструкції кістки і гемопо100% розчинах етанолу і 30 хвилин в дистильоваетичного мікрооточення був застосований синтеному ефірі. Висушували в ламінарному потоці потичний остеопластичний препарат «Коллапан». вітря і занурювали в рідкий азот на 12 годин. В експерименті використовували комбіновані Кістки подрібнювали до розмірів фрагментів трансплантати, які готували перед використанням: 300-450 мікрон. Отриманий порошок демінералізуа) 20мкл суспензії клітин кісткового мозку в вали протягом 12 годин в 0,6M соляної кислоти, концентрації 3х108/мл змішували з 4мг демінералівідмивали кислоту в дистильованій воді, дегідразованого кісткового матрикса; тували в етанолі і діетиловому ефірі. Всі процедуб) 20мкл суспензії клітин кісткового мозку ри здійснювали при 40С. Отриманий демінералізо(3х108/мл) змішували з 4мг гранул коллапана; ваний кістковий матрикс зберігали при 40С. в) 20мкл суспензії клітин плазми крові Клітини кісткового мозку отримували з стегно(3х108/мл) змішували з 4мг гранул коллапана; вих кісток щурів. Отриманий кістковий мозок зміг) 20мкл суспензії фібробластів (3х108/мл) шували з фосфатно-сольовим буфером pH7,4, змішували з 4мг гранул коллапана. ресуспендували, двічі відмивали у буфері. КільТварини були розділені на 7 груп. Щурам у кість клітин підрахували у камері Горяєва за доповсіх групах, крім контрольної, наносили дозований могою мікроскопа Біолам Р-ІІ (об’єктив 8х10 окудефект діаметром 3мм і глибиною 3мм в ділянці ляр) і доводили клітинну суспензію до концентрації тіла нижньої щелепи справа і альвеолярного від3х108/мл. ростка за допомогою фісурного бора під інгаляційДля отримання суспензії клітин плазми крові у ним ефірним наркозом: 2-й групі наносили дозоватварин під наркозом тіопенталу натрію забирали ний дефект, 3-й групі - дефект заповнювали кров з правого передсердя в пластиковий шприц і комбінованим трансплантатом з 20мкл суспензії стабілізували 3,8% розчином цитрату натрію у клітин кісткового мозку і 4мг демінералізованого співвідношенні 1:10. Кількість клітин підраховували кісткового матрикса; 4-й групі тварин дефект запов камері Горяєва за допомогою мікроскопа Біолам внювали 20мкл суспензії клітин кісткового мозку і Р-ІІ і доводили клітинну суспензію до концентрації 4мг гранул коллапана; 5-й групі - 20мкл суспензії 3х108/мл. клітин плазми крові і 4мг гранул коллапана; 6-й Клітини кісткового мозку і суспензію плазми групі дефект заповнювали гранулами коллапана; крові готували в день експерименту. 7-й групі - 20мкл суспензії фібробластів і 4мг граДонорські фібробласти отримували методом нул коллапана. трипсинізації шкіри щурів-донорів. Для цього у Дефект після заповнення трансплантатом пощурів в асептичних умовах брали шматочок шкіри, кривали фібриновим клеєм. обробляли 96% спиртом і поміщали в поживне Для гістологічного дослідження у тварин забисередовище. В стерильних умовах шкіру розрізали рали нижні щелепи. Фіксацію матеріалу здійснюна шматочки 3х3мм, промивали фосфатновали 10% розчином нейтрального формаліну, щесольовим розчином, переносили в посудину з маглепи декальцінували в 10% розчині ЕДТА, нітною мішалкою і ставили на 10хв. на трипсинізазнежирювали етанолом і заливали парафіном, цію. Розчин трипсину з розміщеними в ньому кліпісля чого готували зрізи. тинами зливали крізь стерильну лійку з двома Як показали наші дослідження, найбільш вишарами марлі в стерильну колбу і ставили в холоражений ефект спостерігали при заміщенні дефекдильник для зупинки трипсинізації. Для шматочків ту демінералізованим кістковим матриксом з сушкіри, що залишились, в посудину наливали нову спензією клітин кісткового мозку. порцію трипсину для подальшої трипсинізації. Цей Заміна демінералізованого кісткового матрикпроцес повторювали кілька разів до повного виса коллапаном зменшила активність регенераторснаження тканин. них процесів, однак ця активність була суттєвою. Отримані суспензії центрифугували, осад реПри заміні клітин кісткового мозку клітинами перисуспендували в живильному середовищі, підрахоферійної крові ще більше знизило активність провували кількість клітин у камері Горяєва і доводицесів регенерації, однак результативність їх була ли клітинну суспензію до кінцевої концентрації достатньо високою, перевищуючи комбінацію кол250-500тис. клітин. По 1мл суспензії розливали у лапана з суспензією фібробластів. флакони, розміщали їх у термостаті при 370С. Че Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601