Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини (віл-1, віл-2, віл-0) (dia-hiv 1/2 -0)

Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини (ВІЛ-1, ВІЛ-2, ВІЛ-0) (DIA-HIV 1/2-0), в якій в складі імуносорбенту і кон'югату використовуються рекомбінантні поліпептиди - аналоги антигенів р17, р24, gp41, gpl20 ВІЛ-1 та р36 ВІЛ-2, яка відрізняється тим, що для підвищення чутливості і специфічності діагностикума до імуносорбенту і кон'югату додаються рекомбінантні білки gpll0 ВІЛ-2 і злітний EnvGag поліпептид ВІЛ, що дає змогу за рахунок одностадійної процедури з одночасною інкубацією сироваток і кон'югату провести імуноферментний аналіз і виявити інфікованих на ВІЛ-1, ВІЛ-2 і ВІЛ-0. Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної діагностики ВІЛ-інфекції та СНІДу. Відома тест-система для виявлення антитіл проти ВІЛ у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці ВІЛ-інфекції і СНІДу [1]. В основі тестсистеми лежать рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів p17, р24, gp120 ВІЛ-1 і p 36 ВІЛ-2, використані в імуносорбенті і в складі кон'югату, які реагують з антитілами проти цього збудника. В основу корисної моделі поставлене завдання створити імуноферментну тест-систему на основі нових рекомбінантних поліпептидів-аналогів ВІЛ і за рахунок цього забезпечення надійного виявлення антитіл проти ВІЛ-1, ВІЛ-2 та ВІЛ-0 і підвищення чутливості та специфічності діагностикума. Поставлене завдання вирішують шляхом використання рекомбінантних поліпептидів p17, р24, gp41 і gp120 ВІЛ-1, р36 та gp110 ВІЛ-2 і злітного Env-Gag поліпептиду ВІЛ-0 в складі як імуносорбенту так і кон'югату, що дає змогу за рахунок одностайної процедури з одночасною інкубацією сироваток і кон'югату провести імуноферментний аналіз і виявити інфікованих на ВІЛ-1, ВІЛ-2 і ВІЛ-0. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи на основі рекомбінантних поліпептидів p17, р24, gp41 і gp120 ВІЛ-1, р36 та gp110 ВІЛ-2 і злітного Env-Gag поліпептиду ВІЛ-0 в складі як імуносорбенту так і кон'югату, за рахунок цього забезпечується надійне виявлення антитіл проти ВІЛ-1, ВІЛ-2 та ВІЛ-0 і підвищується чутливість та специфічність діагностикума. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-1 в сироватці крові хворої А., 1985 року народження. Визначення проводять згідно з відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять у лунки планшета з фіксованими на ньому рекомбінантними поліпептидами p17, р24, gp41 i gp120 ВІЛ-1, р36 та gp110 ВІЛ-2 і злітного Env-Gag білку ВІЛ-0 досліджуваний матеріал від хворої для визначення наявності ВІЛінфекції та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних) в буфері з кон'югатом - сумішшю рекомбінантних поліпептидів, мічених пероксидазою. Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37°С протягом 90хв. Після закінчення інкубації промивають лунки (19) UA (11) 17187 (13) U (21) u200603072 (22) 22.03.2006 (24) 15.09.2006 (46) 15.09.2006, Бюл. № 9, 2006 р. (72) Семиноженко Володимир Петрович, Шевчук Олександр Анатолійович, Пилипенко Віталій Григорович, Іванська Наіля Валєєвна, Троянський Василь Васильович, Горлов Юрій Іванович, Терещенко Михайло Іванович, Ганова Лариса Олександрівна, Михайленко Людмила Петрівна, Трохимчук Тетяна Юріївна, Грабченко Наталія Іванівна, Мельник Анатолій Іванович, Мойса Лариса Миколаївна (73) АКЦІОНЕРНЕ ТОВАРИСТВО ЗАКРИТОГО ТИПУ НАУКОВО-ВИРОБНИЧА КОМПАНІЯ "ДІАПРОФ-МЕД" 3 17187 4 вісім разів і вносять по 100мкл розчину проявника чності пропонованої тест-системи. (субстратний розчин з хромогеном) та інкубують Використовуючи пропоновану тест-систему і при 18-22°С у темряві 30хв. набір “Genscreen Plus HIV 1/2“ (BioRad) [1], досліЗупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх джували сироватки крові (по 20 достеменно позипроб по 50мкл стоп-реагенту. тивних та 100 достеменно негативних сироваток). Не більш як через 1хв. після зупинення кольоУсі сироватки досліджували у двох повторах кожрової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в ною тест-системою за описаною методикою. Обилунках у двохвильовому режимі за допомогою дві тест-системи показали однакові результати: з спектрофотометра. При ОГ більше граничного 20 позитивних сироваток всі зразки виявлено як значення досліджувана проба розцінюється як позитивні, що складає 100% чутливості. З 100 непозитивна. гативних сироваток виявилися справді негативниДосліджений матеріал від хворої було ідентими 100 (специфічність - 100%). фіковано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. Таким чином, пропонована тест-система заПриклад 2. Визначення наявності антитіл до безпечує виявлення ВІЛ-інфекції. Проста і надійна ВІЛ-2 в сироватці крові хворого G., 1978 року нав роботі, проявляє високу чутливість та специфічродження. ність. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. ДосВикористана література ліджений матеріал від хворого G. було ідентифіко1. Инструкция по применению тест-системи вано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. "Genscreen Plus HIV 1|2 -kit for direction of HIV Приклад 3. Визначення наявності антитіл до infection in human serum/plasma by enzyme ВІЛ-0 в сироватці крові хворого С., 1979 року наimmunoassay" виробництва "BioRad" (Франція) родження. 2005, 20с. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. Дос2. А.Т.Михайлов, В.Н.Симирский "Методы имліджений матеріал від хворого С. було ідентифікомунохимического анализа в биологии развития". вано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. М. "Наука", 1981. Приклад 4. Визначення чутливості та специфі Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601