Спосіб визначення апоптозу в тестованих клітинах організму

Спосіб визначення апоптозу в тестованих клітинах організму, шляхом індикації фрагментів ДНК при гель-електрофоретичному аналізі, який відрізняється тим, що диференціює однонитяні фрагменти від двонитяних шляхом реєстрації різної флюоресценції фрагментів ДНК, забарвлених акридиновим оранжевим. (19) (21) 98094896 (22) 17.09.1998 (24) 15.12.2000 (33) UA (46) 15.12.2000, Бюл. № 7, 2000 р. (72) Кайряк Ольга Василівна, Лісовська Наталія Юріївна (73) Кайряк Ольга Василівна 31503 розчином акридинового оранжевого, реєструють червону (однонитяні фрагменти ДНК) і зелену (двонитяні фрагменти ДНК) флюоресценцію у відбитому УФ-світлі. Приклад здійснення способу Тестували лімфоцити, виділені з периферичної крові двох хворих на злоякісні пухлини після проведення їм курсу хіміотерапії. При проведенні гель-електрофорезу ДНК, виділеної з лімфоцитів, з подальшим забарвленням бромістим етидієм за відомою методикою одержано характерне "сходове" світіння на електрофореграмах у обох хворих. При проведенні електрофорезу ДНК з забарвленням геля акридиновим оранжевим за пропонуючою методикою у одного з хворих зареєстровано лише зелене світіння у відбитому УФ-світлі (двонитяні фрагменти ДНК), у той час як ДНК, виділена з лімфоцитів іншого хворого, була представлена поряд з двонитяними і однонитяними фрагментами (червона флюоресценція). Таким чином, можна говорити про процес апоптозу в лімфоцитах ли ше у одного хворого, хоча тестування клітин за відомою методикою дозволило припустити, що апоптотичні клітини присутні серед лімфоцитів обох хворих. Перевагою запропонованого способу є те, що будучи простим у виконанні, він добре відтворюється. Даний метод дозволяє точно ідентифіціювати апоптотичні клітини. Це пов'язано з тим, що на відміну від інших способів, коли про апоптоз міркують опосередковано (за морфологічними ознаками, наявністю на клітинній мембрані рецептора), даний спосіб дозволяє ідентифіціювати безпосередньо зміни ДНК, характерні для апоптозу. Область застосування даного способу досить широка. Він може бути використаний під час вивчення радіаційноіндукованого апоптозу в біології і медицині, генетиці і селекції рослин і тварин, в медицині під час вивчення хвороб апоптозу (пухлинного росту, а утоімунних розладів, ендокринних захворювань,...). Джерела інформації 1. Carbonari M., Cibati M., Cherchi М. et al. Detection and charactserization of apoptotic peripherial blood lymphocytes in human immunodeficiency virus infection and cancer chemotherapy by a novel flow immunocytometric method // Blood, - 1994, - N 1, - 83 (5), - P. 1268-1277. 2. Сидоренко С.П., Бердова А.Г., Ветрова Е.П., Шлапацкая Л.Н., Юрченко О.В., Евсевьева А.И., Моноклональные антитела ИПО-4, распознающие антиген-активированные Т- и В-лимфоциты человека // Эксперим. онкол. - 1990, - 12 (3), - С. 21-24. 3. Herrmnann M., Lorenz H., Voll R. et al. A rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments // Nucl. Acid. Res., - 1994, 22, - P. 55065507. 4. Yoshida A. et al. DNA damage and cell killing by camptothecin and its derivative in human leukemia HL-60 cells. // Jpn J Cancer Res, - 1993, - 84, P. 566-573. 5. Duvall E., Wyllie A. Death and the cell. // Immunol. Today - 1986, - 7, - P. 115-119. 6. Grasl-Kraupp В. Et al. In situ detection of fragmented DNA (TUNEL Assay) fails to discriminate among apoptosis, necrosis, and autolytic cell death: a cautinary note. // Hepatology - 1995, - 21, - P. 14651468. 7. Зеленин А.В. Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой. М., Наука 1971. С. 26. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2