Спосіб моделювання глобальної ішемії мозку

Спосіб моделювання глобальної ішемії мозку, який відрізняється тим, що оцінюють стан мозкової тканини та розміри ядер нейронів поля СА1 ппокампа за умови створення кисневого голодування мозку впродовж 3 годин за допомогою накладання затискачів (КЛІПСІВ) на обидві СПІЛЬНІ СОННІ артерії з наступною реперфузією 20 хвилин та 24 години 624, Плотников М Б , Ваизова О Е Сравнительный анализ двух моделей хронической ишемии головного мозга у крыс //Журн пат физ и экспер терап —1994 — № 1 - 4 — С 59-60) Проте всі ці моделі мають ряд суттєвих недоліків Моделювання ішемії мозку при цьому проводиться шляхом перев'язки загальних сонних артерій або виключання хребтових артерій шляхом коагуляції в криловидних отворах першого шийного хребця з накладанням затискачів (КЛІПСІВ) на сонні артерії Це супроводжується ішемією тільки окремих ділянок мозкової тканини, а також інших тканин голови та суттєво позначається на отриманих результатах Окрім того складна техніка виконання процедури не завжди є ефективною та адекватною головній меті - глобальній ішемії мозку Нами запропоновано подовжити термін реперфузм до 24 годин, що дає змогу вивчати морфологічні зміни структур головного мозку з використанням світлового мікроскопу і доступних методів забарвлення З метою усунення недоліків та збільшення ефективності моделі глобальної ішемії мозку нами запропонована така методика Під внутрішньоочеревинним наркозом етамшалом-натрію (40мг на кг ваги тіла) щурам переднім серединним шийним доступом розтинають шкіру і підшкірну клітковину, виділяють обидві СПІЛЬНІ сонні артерії Після цього на обидві СПІЛЬНІ СОННІ артерії накладають кліпси (затискачі) Кліпси знімають через 3 години для здійснення реперфузм головного мозку Рану зашивають безперервним швом Частину щурів забивають через 20 хвилин, а частину — через 24 години після зняття затискачів і припинення дії ішемії Для контролю створення моделі ІНШІЙ групі ю (О (О 46651 тварин проводять розрізи на шкірі, сепарацію мятканини з розвитком у корі великих півкуль початзів і виділення судин без їх перетиснення кових явищ некрозу, які візуалізуються на ГІСТОЛОЗабиття тварин здійснюють шляхом декапітаГІЧНИХ препаратах за світлової мікроскопи цм під легким ефірним наркозом У щурів виділяУ інфантильних щурів вже через добу після дії ють головний мозок, поміщують у 10% розчин нейгострої ішемії виявляються вогнищеві некрози у трального формаліну для подальшої оцінки багатьох місцях кори великих півкуль та підкіркопатоморфолопчних змін у структурах головного вих ядрах Вогнища некрозу найбільш ПОМІТНІ у тих мозку, яку здійснюють за допомогою морфологічділянках, що межують з кровоносними судинами них і морфометричних досліджень згідно наявних При цьому у нейронах поля СА1 гіпокампа виниу літературі рекомендацій (Буреш Я , Бурешова кають виражені дистрофічні зміни із зменшенням О, Хьюстон Д П Методики и основные эксперидіаметра ядер (табл 1) менты по изучению мозга и поведения Пер с У молодих тварин через 24 години після вплиангл — М Высш шк , 1991 — 399 с, Хамильтон ву гострої ішемії виявляються виражені некрози у Л У Основы анатомии лимбической системы крыкорі великих півкуль, чисельні вогнища некрозу сы — М Изд-во Моек ун-та, 1984 — 1 8 4 с ) При цьому дистрофічні зміни поля СА1 гіпокампа супроводжуються менш вираженим зменшенням За нашими даними, проведення такої методирозмірів ядер (табл 1) Водночас у зрілих щурів ки у тварин різного віку (інфантильних, молодих та після гострої ішемії головного мозку та реперфузм зрілих) після 20-ти хвилинної реперфузм, призво24 год практично не спостерігається деструктивдить до розвитку характерної ознаки кисневого них змін в корі головного мозку та у ппокампі голодування мозку - дифузного набряку нервової Таблиця 1 Діаметр ядер нейронів поля СА1 дорсального гіпокампа щурів після глобальної ішемії Характер впливу Інфантильні Молоді Контроль (п = 7) 13,82 ±0,62 13,82 ±0,63 Ішемія 3 год + 11,45 ±0,28 11,45 ± 10,28 реперфузія 20 хв (п = 10) р < 0,01 р < 0,01 Ішемія 3 год + 6,57 ± 0,25 10,67 ±0,47 реперфузія 24 год (п = 12) р < 0,01 р < 0,01 р - ступінь вірогідності різниць при порівнянні з контролем Тобто, формування глобальної ішемії головного мозку при розробленій нами моделі дозволяє 1) повністю припинити доставку кисню до органу (мозкової тканини), 2) забезпечує створення ішемії, тяжкість якої легко дозувати за часом, 3) забезпечує рівномірність порушення кровотоку в різних відділах мозку, що дозволяє їх ставити в однакові умови та виявляти механізми ішемічних та реперфузійних пошкоджень в різнихструктурах мозку Всі вище вказані характеристики способу моделювання глобальної ішемії головного мозку забезпечують даному винаходу ВІДПОВІДНІСТЬ критерію "позитивний ефект" ВІДПОВІДНІСТЬ критерію "новизна" даному винаходу забезпечується тим, що вперше показана можливість використання світлового мікроскопу для вивчення морфологічних змін структур голо Зрілі 13,82 ±0,62 13,82 ±0,63 13,82 ±0,63 вного мозку вже через 24 години після припинення дії ішемії Можливість порівняння отриманих результатів дії глобальної ішемії з інтактними тваринами забезпечує ВІДПОВІДНІСТЬ критерію "суттєві ВІДМІННОСТІ" Таким чином, розроблений спосіб глобальної ішемії головного мозку забезпечує підвищення об'єктивності і точності визначення впливу гострого кисневого голодування на всю тканину головного мозку з подальшим відокремленим диференціюванням порушень в його окремих відділах як за дії кисневого голодування, так і після відтворення кровопостачання тканин мозку Це дає можливість вивчити всі зміни в тканинах головного мозку за різних умов кисневого голодування та при його реперфузм з точним дозування часу дії ішемії та реперфузм ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71