Мутантний штам вірусу гепатиту b, виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує мутантний головний поверхневий антиген штаму вірусу гепатиту в, вектор та векторна система для одержання поліпептиду, спосіб оде

1. Виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), що зберігається під номером доступу № Р97121504, Р97121505 і Р97121506 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997 року.

2. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, яка відрізняється тим, що поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, причому вказана послідовність являє собою послідовність № 1 на Фіг. 3.

3. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність № 1.

4. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 3, яка відрізняється тим, що містить "ACG" в положеннях 551-553.

5. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це ДНК.

6. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це РНК.

7. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це кДНК.

8. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це геномна ДНК.

9. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид містить послідовність амінокислот, по суті ту саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3.

10. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, причому такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, призначена для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), де таке визначення включає:

а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти суб'єкта, і

б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.

11. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить мРНК, яка відповідає копії ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає:

і) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 35 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс,

іі) виділення комплексу, який утворився таким чином, і

ііі) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.

12. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за пп. 10, 11, яка відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.

13. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти на стадії а) включає мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення на стадії б) включає:

і) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і іі) порівняння послідовності амінокислот зі стадії і) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової кислоти за п. 9 так, щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.

14. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що визначення стадії б) включає:

і) ампліфікацію нуклеїнової кислоти у зразку стадії а) та

іі) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті.

15. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок містить кров, тканину або сироватку.

16. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де визначення включає:

а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти з суб'єкта, і

б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.

17. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 16, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні, 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає:

і) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 35 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс, іі) виділення комплексу, який утворюється таким чином, і

ііі) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержана з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.

18. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 16, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти на стадії а) містить мРНК, що відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає:

і) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і іі) порівняння послідовності амінокислот стадії і) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової кислоти за п. 9 так, щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.

19. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527 -595 Послідовності № 1.

20. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3.

21. Вектор, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і функціонально з'єднана з промотором транскрипції РНК.

22. Вектор за п. 21, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу.

23. Вектор, який відрізняється тим, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527-595 Послідовності № 1.

24. Вектор за п. 23, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу.

25. Векторна система хазяїна для одержання поліпептиду, що містить вектор за п. 21 в придатному хазяїні.

26. Векторна система хазяїна для одержання пептиду, що містить вектор за п. 23 в придатному хазяїні.

27. Спосіб одержання поліпептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 25 за придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином.

28. Спосіб одержання пептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 26 за придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином.

29. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає:

а) введення вектора за п. 21 в придатну клітину-хазяїна,

б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид,

в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і

г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.

30. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає:

а) введення вектора за п. 23 в придатну клітину-хазяїна,

б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид,

в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і

г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.

31. Очищений поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.

32. Очищений поліпептид, одержаний згідно зі способом за п. 29.

33. Очищений пептид, де пептид має послідовність, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3.

34. Очищений пептид, одержаний згідно зі способом за п. 30.

35. Олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з унікальною послідовністю нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, без гібридизації до будь-якої послідовності нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує головний поверхневий антиген вірусу гепатиту В дикого типу, причому олігонуклеотид включає нуклеотиди 527-595 Послідовності № 1.

36. Спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, а не головним поверхневим антигеном вірусу гепатиту В дикого типу, що включає:

а) одержання поліпептиду в очищеній формі;

б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного поліпептиду,

в) збирання утворених антитіл,

г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного поліпептиду за умов формування комплексу, і

д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним поліпептидом так, щоб одержати антитіла до поліпептиду.

37. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність № 1.

38. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що поліпептид має послідовність амінокислот, головним чином таку саму, що й залишки амінокислот 174 - 400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3.

39. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша.

40. Спосіб одержання антитіл до пептиду, де пептид має послідовність амінокислот, що включає залишки амінокислот 298 - 320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3, який включає:

а) одержання пептиду в очищеній формі,

б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного пептиду,

в) збирання утворених антитіл,

г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного пептиду за умов формування комплексу, і

д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним пептидом так, щоб одержати антитіла до пептиду.

41. Спосіб за п. 40, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша.

42. Антитіло, одержане за п. 36 або 40.

43. Антитіло за п. 42, яке відрізняється тим, що воно являє собою моноклональне антитіло.

44. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де зазначений поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і нездатне до виявлення головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу.

45. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, де пептид має послідовність амінокислот, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3.

46. Антитіло за пп. 44, 45, яке відрізняється тим, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), де визначення включає:

а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і

б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоб зв'язатися з антитілами за п. 44 або 45 так, щоб визначити, чи інфікований суб'єкт.

47. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.

48. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, флюорофор або фермент.

49. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В, причому такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де таке визначення включає:

а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і

б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоб зв'язатися з антитілами за п. 44 або 45 так, щоб визначити, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки.

50. Антитіло за пп. 47, 48 або 49, яке відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.

51. Антитіло за п. 50, яке відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, флюорофор або фермент.

52. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає:

а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою,

б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і

в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб ідентифікувати хімічну сполуку, придатну для лікування інфекції вірусним штамом.

53. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для запобігання інфікуванню штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає:

а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою,

б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і

в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб розпізнати хімічну сполуку, придатну для попередження інфікування вірусним штамом.

54. Композиція, яка містить поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного зовнішнього вірусу В антигенного гепатиту дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, причому кількість такого поліпептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, і є фармацевтично прийнятним.

55. Композиція, яка містить пептид, де пептид включає послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність № 3, причому кількість такого пептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, і є фармацевтично прийнятним.

56. Композиція, що містить хімічну сполуку, визначену відповідно до способу за п. 52, у кількості, ефективній для лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), і фармацевтично ефективний носій.

57. Композиція, що містить хімічну сполуку, визначену відповідно до способу за п. 53, у кількості, ефективній для попередження інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), і фармацевтично ефективний носій.

58. Композиція за п. 54 або 55, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін).

59. Композиція за п. 56, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін).

60. Композиція за п. 54 або 55, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін).

61. Композиція за п. 57, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін).

62. Спосіб скринінгу рідин організму суб'єкта на вірус гепатиту В, визначеного як штам Оon вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-'S'-133 (метіонін на треонін), який включає:

а) одержання відповідного зразка рідини організму суб'єкта,

б) визначення наявності поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, у зразку стадії а) так, щоб піддати зразок скринінгу на штам.

63. Спосіб за п. 62, який відрізняється тим, що рідина організму включає кров, сироватку або зразок нуклеїнової кислоти крові або сироватки.

64. Вакцина від гепатиту, що містить мутантну форму поверхневого антигену вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену гепатиту В тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.

65. Вакцина за п. 64, яка відрізняється тим, що додатково містить ад'ювант.