Застосування гуманізованого антитіла, що специфічно зв’язує епітоп, який знаходиться між положеннями 13 та 28 бета-амілоїдного пептиду (аb ), для виготовлення лікарського засобу для запобігання або лікування п

1. Застосування гуманізованого антитіла, що специфічно зв’язує епітоп, який знаходиться між положеннями 13 та 28 бета-амілоїдного пептиду (A ) та секвеструє A з білка-носія, для виготовлення лікарського засобу для запобігання або лікування передклінічної або клінічної форми хвороби Альцгеймера. 2. Застосування за п. 1 для виготовлення лікарського засобу для пригнічення утворення амілоїдних бляшок або ефектів токсичних розчинних видів A , пов’язаних з хворобою Альцгеймера. 2 (19) 1 (послідовність SEQ ID NO:7), де Xaa у положенні 2 - Val або Ile; Xaa у положенні 7 - Ser або Thr; Xaa у положенні 14 - Thr або Ser; 3 89028 4 Xaa у положенні 15 - Leu або Pro; (послідовність SEQ ID NO:8), Xaa у положенні 30 - Ile або Val; де Xaa у положенні 50 - Arg, Gln або Lys; Xaa у положенні 1 - Glu або Gln; Xaa у положенні 88 - Val або Leu; Xaa у положенні 7 - Ser або Leu; Xaa у положенні 105 - Gln або Gly; Xaa у положенні 46 - Glu, Val, Asp або Ser; Xaa у положенні 108 - Lys або Arg; та Xaa у положенні 63 - Thr або Ser; Xaa у положенні 109 - Val або Leu; Xaa у положенні 75 - Ala, Ser, Val або Thr; та варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка має Xaa у положенні 76 - Lys або Arg; таку послідовність: Xaa у положенні 89 - Glu або Asp; та Xaa у положенні 107 - Leu або Thr. 10. Застосування за п. 10, причому антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка має послідовність SEQ ID NO:9, та варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка має послідовність SEQ ID NO:10. 11. Застосування за п. 11, причому антитіло містить легкий ланцюг, який має послідовність SEQ ID NO:11, та важкий ланцюг, який має послідовність SEQ ID NO:12. Перехресне посилання на споріднені заявки. Ця заявка претендує на пріоритет за тимчасовими заявками США 60/184,601, яка була подана 24 лютого 2000 року, 60/254,465, яка була подана 8 грудня 2000 року, та 60/254,498, яка була подана 8 грудня 2000 року, вміст кожної з яких включено до цього опису як посилання. Галузь, до якої належить винахід. Цей винахід має відношення до гуманізованих антитіл, які зв'язуються з епітопом між амінокислотами 13 та 28 Аβ пептиду та до профілактики та лікування станів, які пов'язуються з бетаамілоїдом, наприклад, хвороби Альцгеймера, синдрому Дауна та церебральної амілоздної ангіопатії. Зокрема, він має відношення до використання гуманізованих моноклональних антитіл для секвестрування бета-амілоїдного (Аβ) пептиду у плазмі, головному мозку та цереброспінальній рідині для запобігання накопичення або для реверсування відкладення Аβ пептиду у межах головного мозку та судинної сітки головного мозку, та поліпшення пізнавальної діяльності. Знаний рівень техніки. Видається, що з бляшками у периферичних нервах та судинах головного мозку, які вміщують бета-амілоїдний пептид (Аβ), пов'язується цілий ряд симптоматологічних комплексів, наслідком яких є порушення пізнавальної здатності, інсульт, внутрішньомозковий крововилив та загальне послаблення розумової діяльності. До цих станів відносять як передклінічну, так і клінічну форми хвороби Альцгеймера, синдром Дауна та передклінічну та клінічну форми церебральної амілоїдної ангіопатії (САА). Амілоїдні бляшки утворюються з бета-амілоїдних пептидів. Ці пептиди циркулюють у крові та у цереброспінальній рідині (CSF), як правило, у формі комплексних сполук із ліпопротеїнами. Аβ пептид у циркулятор ній формі складається з 39-43 амінокислот (головним чином, з 40 або 42 амінокислот) і є наслідком розщеплення загального білка-попередника, білкапопередника амілоїду, який часто позначають як АРР. Деякі форми розчинного Аβ є нейротоксичними самі по собі і можуть визначати тяжкість дегенерації нервових волокон та/або погіршення пізнавальної діяльності (Маклін К.А. (McLean C.A.) та інші, Ann. Neurol. (1999) 46:860-866; Ламберт М.П. (Lambert М.Р.) та інші, (1998) 95:6448-6453; Несланд Дж. (Naslund J.), J. Am. Med. Assoc. (2000) 283:1571). Наявні дані дозволяють зробити припущення про те, що Аβ може транспортуватись між головним мозком та кров'ю як у прямому, так і у зворотному напрямках (Герсі-Еджа Дж-Ф. (Ghersi-Egea JF.) та інші, J. Neurochem. (1996) 67:880-883; Злоковіч Б.В. (Ziokovic B.V.) та інші, Biochem. Biophys. Res. Comm. (1993) 67:1034-1040; Шібата M. (Shibata М.) та інші, J. Clin. Invest. (2000) 106:14891499). Додаткова кількість Аβ у бляшках знаходиться у рівновазі з розчинним Аβ у головному мозку та крові (Каварабаяші Т. (Kawarabayashi Т.) та інші, J. Neurosci. (2001) 21:372-381). За описом, який наведено у міжнародній заявці PCT/US00/35681 та заявці США № 09/153,130 (обидві включено до цього опису як посилання), загальні циркуляторні рівні Аβ пептиду у цереброспінальній рідині є однаковими у нормальних індивідів та індивідів, які мають схильність до демонстрування симптомів хвороби Альцгеймера. Однак рівні Аβ42 є нижчими, за середніми показниками, в індивідів, які мають хворобу Альцгеймера (Нітш P.M. (Nitsch R.M.) та інші, Ann. Neurol. (1995) 37:512-518). Відомо, що Аβ42 має більшу схильність до агрегування, аніж Аβ40, і, у разі, коли це трапляється, виникають негативні наслідки, такі як відкладення Аβ у амілоїдних бляшках, перетво 5 89028 6 рення Аβ на токсичні розчинні форми, пошкоджентому числі антитіла, які були одержані проти суміня нервових клітин та порушення поведінки, такі як ші фенілаланін-статинових перехідних сполук Cysслабоумство (Голд Т.Е. (Golde Т.Е.) та інші, Аβ10-25, статин Рhе19-Рhе20 та Cys-Аβ10-25 статин Biochem. Biophys. Acta. (2000) 1502:172-187). Рhе20-Аlа21, та антитіла, одержані проти Аβ10-25, які Опис способів індукування імунної реакції для мають відновлений амідний зв'язок між Phe19 та зменшення відкладення амілоїду наводять у пубРhe20. У цьому документі згадується секвеструлікації міжнародної заявки WO 99/27944, яка була вання Аβ, але це лише здогади, оскільки у ньому опублікована 10 червня 1999 року. У згаданому не наводяться дані на підтвердження такого секописі стверджується, що повномірний агрегований вестрування. Цей документ, окрім того, не навоАβ пептид може бути придатним імуногеном. Введить даних in vivo про те, що введення антитіл дення фрагмента Аβ (амінокислот 13-28), кон'юговикликає відтік Аβ з центральної нервової систеваного з овечим антимишачим IgG, не викликало ми, перешкоджає утворенню бляшок, зменшує змін у загальному вмісті амілоїду у корі головного загальний вміст бляшок, утворює комплекси між мозку, і лише одна з дев'яти тварин, які одержали антитілами та Аβ у зразках тканин або впливає на впорскування кон'югованого 13-28 фрагмента Аβ, пізнавальну діяльність. демонструвала деякі ознаки лімфопроліферації у Було показано, що одним із шляхів метаболізвідповідь на Аβ40. У згаданій заявці вказується му Аβ є перенесення з центральної нервової систакож, що антитіла, які специфічно зв'язуються з теми до плазми (Злоковіч Б.В. (Ziokovic B.V.) та Аβ пептидом, можуть використовуватись як тераінші, Рrос. Natl. Acad. Sci. (США) (1996) 93:4229певтичні засоби. Однак це видається здогадами, 4234; (Герсі-Еджа Дж-Ф. (Ghersi-Egea J-F.) та інші, оскільки підтверджувальні дані свідчать про застоJ. Neurochem. (1996) 67:880-883). На додаток до сування протоколів, які залучають активну імунізацього, було показано, що Аβ у плазмі може долати цію з використанням, наприклад, Аβ42. Пептиди гематоенцефалічний бар'єр та потрапляти до гопостачаються за допомогою ад'ювантів і визначаловного мозку (Злоковіч Б.В. (Ziokovic B.V.) та інші, ються як титри антитіл, які є наслідком імунізації, Biochem. Biophys. Res. Comm. (1993) 67:1034так і рівні Аβ пептиду та пептиду-попередника. Ця 1040). Було показано також, що введення певних публікація дозволяє майже з певністю стверджуполіклональних та моноклональних Аβ антитіл вати, що для полегшення симптомів хвороби Альзменшує відкладення Аβ у амілоїдних бляшках у цгеймера Аβ бляшки повинні зменшуватись і для АРРV717F трансгенної мишачої моделі хвороби успішного зменшення Аβ бляшок необхідними є Альцгеймера (Бард Ф. (Bard F.) та інші. Nature клітинно-опосередковані процеси. Med. (2000) 6:916-919); однак вказувалось на те, WO 99/60024, яка була опублікована 25 лисщо згадане обумовлювалось певними анти-Аβ топада 1999 року, спрямована на способи видаантитілами, які долають гематоенцефалічний балення амілоїду за допомогою антиамілоїдних анр'єр та стимулюють фагоцитоз амілоїдних бляшок титіл. Стверджується, однак, що цей механізм клітинами мікроглії. У експериментах Барда аналіз використовує здатність анти-Аβ антитіл до зв'язузрізів головного мозку ex vivo показав, що присутвання із попередньо утвореними відкладами аміність додаткових Аβ антитіл, разом з екзогенно лоїду (наприклад, бляшками) із подальшим місцедоданою мікроглією, індукувала фагоцитоз Аβ, вим виведенням з мікроглії локалізованих бляшок. наслідком чого було видалення відкладів Аβ. Цей механізм не було випробувано in vivo. У цій Рівні розчинних Аβ40 та Аβ42 у цереброспінапублікації додатково стверджується, що для того, льній рідині та крові можуть легко виявлятись за щоб бути ефективними проти Аβ бляшок, анти-Аβ допомогою стандартизованих аналізів з викорисантитіла повинні одержати доступ до паренхіми танням антитіл, спрямованих проти епітопів головного мозку та подолати гематоенцефалічний вздовж ланцюга Аβ. Про такі аналізи повідомлябар'єр. лось, наприклад, у патентах США № 5,766,846, № 7 грудня 2000 року були опубліковані декілька 5,837,672 та № 5,593,846. Ці патенти описують міжнародних заявок, які мають відношення до продукування мишачих моноклональних антитіл спроб контролювання амілоїдних бляшок. У WO до центрального домену Аβ пептиду, які, за пові00/72880 описується значне зменшення бляшок у домленням, мають епітопи довкола та із включенкорі головного мозку та гіпокампі трансгенної миням положень 16 та 17. Було також наведено опис шачої моделі хвороби Альцгеймера у разі обробки антитіл, спрямованих проти N-кінцевої ділянки. мишей з використанням N-кінцевих фрагментів Аβ Стверджувалось, що декілька моноклональних пептидів та антитіл, які зв'язуються з ними, але не антитіл вступали до імунної реакції з положеннями у разі обробки 13-28 фрагментом Аβ, кон'югова13-28 Аβ пептиду; вони не зв'язувались із пептиним з овечим антимишачим IgG або з антитілом дом, який представляв положення 17-28, що, за проти 13-28 фрагмента, антитілом 266. Результати згаданим патентом, встановлювало, що ця діляндосліджень in vitro підтвердили, що антитіла, ка, із включенням положень 16-17 (сайт αспрямовані проти N-кінцевої ділянки, долають гесекретази), була мішенню цих антитіл. До числа матоенцефалічний бар'єр та індукують фагоцитоз антитіл, які, як відомо, зв'язуються між амінокислоамілоїдних бляшок. тами 13 та 28 Аβ, належать мишачі антитіла 266, WO 00/72876 має по суті таке ж саме розкрит4G8 та 1С2. тя, що і WO 00/72880, і спрямовується на імунізаМи несподівано встановили, що введення анцію за допомогою самих складових амілоїдних титіла 266 дуже швидко і майже повністю відновфібрил. лює пізнавальну здатність (пам'ять на об'єкти) у WO 00/77178 описує антитіла, які були розро24-місячних гемізиготних трансгенних мишей блені для каталізування гідролізу β-амілоїду, у (АРРV717F). Ці антитіла, однак, не мають властиво 7 89028 8 стей, які, за положеннями цієї галузі, є необхідниред тим, вектори, до складу яких входять полінукми для того, щоб антитіло було ефективним при леотидні послідовності, які кодують гуманізовані лікуванні хвороби Альцгеймера, синдрому Дауна антитіла та їхні фрагменти, клітини-хазяї, транста інших станів, пов'язаних з Аβ пептидом. Додатформовані векторами або такі, що включають поковий подив викликало спостереження, яке полялінуклеотиди, які експресують гуманізовані антитігало у тому, що антитіла, які зв'язують Аβ між пола або їхні фрагменти, фармацевтичні композиції ложеннями 13 та 28 (266 та 4G8), є здатними до гуманізованих антитіл та їхніх фрагментів, які розсеквестрування розчинних форм Аβ з їхніх зв'язакривають у цьому описі, та способи їх одержання них, циркуляторних форм у крові, і що наслідком та використання. периферичного введення антитіла 266 є швидкий Такі гуманізовані антитіла та їхні фрагменти є відтік відносно великих кількостей Аβ пептиду з придатними для секвестрування Аβ у людей; для центральної нервової системи до плазми. Наслідлікування та запобігання хвороб та станів, які хаком цього є зміна виведення розчинного Аβ, запорактеризуються Аβ бляшками або Аβ токсичністю бігання утворенню бляшок і, що викликає найбіу головному мозку, наприклад, хвороби Альцгейльший подив, поліпшення пізнавальної здатності, мера, синдрому Дауна та церебральної амілоїдної навіть без обов'язкового зменшення загального ангіопатії у людей; для діагностування цих хвороб вмісту Аβ амілоїдних бляшок, подолання гематоеу людей; та для визначення, чи буде людина реанцефалічного бар'єру у скільки-небудь значному гувати на лікування з використанням людських обсязі, сполучення із бляшками, активування кліантитіл проти Аβ. тинних механізмів або зв'язування з великою споВведення відповідного гуманізованого антитірідненістю до агрегованого Аβ. ла in vivo для секвестрування Aβ пептиду, який Розкриття винаходу. циркулює у біологічних рідинах, є корисним для Цей винахід надає гуманізовані антитіла або профілактики та лікування станів, зв'язаних з їхні фрагменти, які позитивно впливають на пізнаутворенням Aβ-вмісних дифузних бляшок у перивальну діяльність у разі хвороб та станів, до яких феричних нервах та кровоносних судинах головможе залучатись Аβ, наприклад, при клінічній або ного мозку. Згадане гуманізоване антитіло, а тапередклінічній формах хвороби Альцгеймера, сикож його імунологічно реактивний фрагмент, ндромі Дауна та клінічній або передклінічній форзабезпечує видалення Aβ пептиду з макромолекумах церебральної амілоїдної ангіопатії. Згадані лярних комплексів, які, за нормальних умов, були антитіла або їхні фрагменти не повинні долати б залучені до його перенесення у загальній воді гематоенцефалічний бар'єр, сполучатись з амілоїорганізму до/з місць, у яких можуть утворюватись дними бляшками, активізувати клітинні реакції або бляшки або де він може бути токсичним. На доданавіть у обов'язковому порядку зменшувати загаток до цього, секвестрування Aβ пептиду, який льний вміст амілоїдних бляшок. За іншим аспекзнаходиться у плазмі, антитілом або його фрагметом, цей винахід надає гуманізовані антитіла або нтом, відіграє роль "поглинача", який ефективно їхні фрагменти, які секвеструють Аβ пептид з його секвеструє розчинний Aβ пептид у плазмовому зв'язаної, циркуляторної форми у крові та змінюкомпартменті та індукує проникнення Aβ до плазють виведення розчинних та зв'язаних форм Аβ у ми з місцеположень у центральній нервовій сисцентральній нервовій системи та плазмі. За іншим темі. Завдяки секвеструванню Aβ у крові, стимуаспектом, цей винахід надає гуманізовані антитіла люється загальний відтік із головного мозку і та їхні фрагменти, де згадані гуманізовані антитіла запобігається відкладення розчинного Aβ у формі специфічно зв'язуються з епітопом між амінокиснерозчинних бляшок та утворення токсичних розлотами 13 та 28 молекули Аβ. За іншим аспектом, чинних видів у головному мозку. На додаток до цей винахід надає гуманізовані антитіла або їхні цього, нерозчинний Aβ у бляшках, який знаходитьфрагменти, де гіперваріабельні ділянки одержуся у рівновазі з розчинним Aβ, може видалятись із ють з мишачого моноклонального антитіла 266 і де головного мозку завдяки секвеструвальному ефезгадані антитіла зберігають приблизно зв'язувалькту у крові. Секвестрування Aβ пептиду антитілом ні властивості мишачого антитіла і мають in vitro та також стимулює його видалення з тіла та пригнічує in vivo властивості, функціонально еквівалентні токсичні ефекти розчинного Aβ у головному мозку мишачому антитілу (послідовності № 1-6). За інта розвиток і додаткове накопичення нерозчинного шим аспектом, цей винахід надає гуманізовані Aβ у вигляді амілоїду у бляшках. Антитіла, які виантитіла та їхні фрагменти, де згадані варіабельні користовуються у цьому винаході, не долають геділянки мають послідовності, які включають гіперматоенцефалічний бар'єр у значних кількостях варіабельну ділянку мишачого антитіла 266 та ( 0,1% від рівнів у плазмі). На додаток до цього, специфічні людські каркасні послідовності (послігуманізовані антитіла, які використовуються у цьодовності № 7-10), де згадані антитіла зберігають му винаході, у разі їх периферичного введення, не приблизно зв'язувальні властивості мишачого анповинні викликати клітинної імунної реакції у голотитіла і мають in vitro та in vivo властивості, функвному мозку, у разі зв'язування з Aβ пептидом або ціонально еквівалентні мишачому антитілу 266. За у разі вільного циркулювання, для проявлення іншим аспектом, цей винахід надає гуманізовані своїх цілющих ефектів. Крім того, у разі їх периантитіла та їхні фрагменти, де легким ланцюгом є феричного введення, вони не повинні суттєво зв'япослідовність № 11 і важким ланцюгом є послідовзувати агрегований Aβ пептид у головному мозку ність № 12. для проявлення своїх цілющих ефектів. Крім того, частиною цього винаходу є полінукТаким чином, за одним з аспектів, цей винахід леотидні послідовності, які кодують гуманізовані спрямовано на спосіб лікування та запобігання антитіла або їхні фрагменти, які були розкриті пестанів, які характеризуються утворенням бляшок, 9 89028 10 які містять бета-амілоїдний білок, у людей, який такою ж самою або відрізняється від першої кільвключає введення, за варіантом, якому віддається кості; та d) введення другої кількості антитіла або перевага, периферичне, людині, яка потребує тафрагмента. кого лікування, терапевтично або профілактично Цей винахід включає також спосіб визначення ефективної кількості гуманізованого моноклональу людини ефективності антитіла, яке зв'язується з ного антитіла або його імунологічно реактивного Aβ, або його фрагмента відносно пригнічення або фрагмента, причому згадане антитіло специфічно запобігання утворення Aβ амілоїдних бляшок, зв'язується з середньою ділянкою Aβ пептиду. За зменшення Aβ амілоїдних бляшок, послаблення іншим аспектом, цей винахід спрямовано на спосіб ефектів токсичних розчинних видів Aβ або лікупригнічення утворення амілоїдних бляшок та вивання стану чи хвороби, пов'язаної з Aβ бляшками, ведення амілоїдних бляшок у людей, який включає який включає: а) одержання першого зразка плазвведення людині, яка потребує такого пригнічення, ми або цереброспінальної рідини людини; b) виефективної кількості гуманізованого антитіла, яке значення вихідної концентрації Aβ у першому зрасеквеструє Aβ пептид з його циркуляторної форми зку; с) введення антитіла або його фрагмента у крові та індукує відтік із головного мозку, а також людині; d) одержання другого зразка плазми або змінює виведення Aβ із плазми та головного мозцереброспінальної рідини людини через термін від ку. За додатковими аспектами, цей винахід спря3 год. до двох тижнів після введення антитіла або мовано на такі гуманізовані антитіла, у тому числі його фрагмента; та e) визначення концентрації Aβ на їхні імунологічно ефективні ділянки, та на споу другому зразку; де ефективність пов'язується з соби їх одержання. кількістю Aβ, яка зв'язалась з антитілом у крові, та Цей винахід включає також способи реверсуконцентрацією Aβ у цереброспінальній рідині. вання погіршення пізнавальної здатності, поліпКороткий опис малюнків шення пізнавальної здатності, лікування погіршенНа Фіг. 1 показано відсоток Aβ пептиду, відвеня пізнавальної здатності та запобігання дений з цереброспінальної рідини людини через погіршення пізнавальної здатності у суб'єкта, у діалізну мембрану Mab 266, як функцію молекуляякого була діагностована клінічна або передклінічрномасової межі пропускання діалізної мембрани. на форма хвороби Альцгеймера, синдром Дауна На Фіг. 2 показано концентрацію АβЗагального, або клінічна чи передклінічна форма церебральної яка визначається у плазмі APPV7i7F трансгенної амілоїдної ангіопатії, які включають введення згамиші після впорскування 200 мкг або 600 мкг Mab даному суб'єкту ефективної кількості гуманізовано266 як функція часу. го антитіла за цим винаходом. На Фіг. 3А показано кількість відкладення Aβ Цей винахід включає також використання гупептиду у корі головного мозку APPV717F трансгенманізованого антитіла за цим винаходом для вигоних мишей, яким вводили фізіологічний розчин, товлення лікарського засобу, у тому числі пролонмишачий IgG або Mab 266. На Фіг. 3В показано гованої експресії рекомбінантних послідовностей кореляцію цих результатів із батьківським похоантитіла або фрагмента антитіла у тканинах людженням. дини, для лікування, запобігання або реверсуванНа Фіг. 4 показано полінуклеотидні послідовня хвороби Альцгеймера, синдрому Дауна або ності для експресування легкого ланцюга гуманіцеребральної амілоїдної ангіопатії; для лікування, зованого 266 із плазміди pVk-Hu266 і одну амінозапобігання або реверсування погіршення пізнакислоту, яка кодує експресований легкий ланцюг вальної здатності у разі клінічної або передклінічгуманізованого 266 (який, уразі визрівання, відпоної форм хвороби Альцгеймера, синдрому Дауна відає послідовності № 11). або клінічної чи передклінічної форм церебральної На Фіг. 5 показано полінуклеотидні послідовамілоїдної ангіопатії; або для пригнічення утвоності для експресування важкого ланцюга гуманірення амілоїдних бляшок або ефектів токсичних зованого 266 із плазміди pVg1-Hu266 і одну амінорозчинних видів Aβ у людей. кислоту, яка кодує експресований важкий ланцюг Цей винахід має відношення до спостереженгуманізованого 266 (який, у разі визрівання, відпоня, яке викликає подив і полягає у тому, що у мевідає послідовності № 12). жах короткого періоду часу після введення антитіФіг. 6 - плазмідна карта pVk-Hu266. ла за цим винаходом, відносно великі кількості Aβ Фіг. 7 - плазмідна карта PVg1-Hu266. відтікають із центральної нервової системи до Способи здійснення винаходу крові. Таким чином, цей винахід включає способи Aβ пептиди, які циркулюють у біологічних рівизначення реакції людини на лікування антитідинах організму людини, представляють собою лом, яке зв'язує Aβ, або його фрагментом, які карбоксильну кінцеву ділянку білка-попередника, включають: а) введення антитіла або його фрагякий кодується на хромосомі 21. За результатами мента людині; та b) визначення концентрації Aβ у експериментів in vitro повідомлялось, що Aβ пепкрові людини. тид має погану розчинність у фізіологічних розчиЦей винахід включає також спосіб лікування нах, оскільки до його складу входить смуга гідролюдини антитілом, яке зв'язує Aβ, або його фрагфобних амінокислот, які є частиною ділянки, яка ментом, який включає: а) введення першої кількоприкріплює його довшого попередника до ліпідних сті антитіла або його фрагмента людині; b) визнамембран клітин. Таким чином, не викликає подиву чення концентрації Aβ у крові людини через термін те, що циркуляторний Aβ пептид, як правило, від 3 год. до двох тижнів після введення першої утворює комплекси з іншими складовими, які задози; с) у разі необхідності, визначення другої кіпобігають його агрегуванню. Наслідком цього є лькості антитіла або його фрагмента на основі труднощі виявлення циркуляторного Aβ пептиду у результатів етапу b), причому друга кількість є біологічних рідинах. 11 89028 12 Вищезгадані патентні документи (патенти лювання з метою їх перетворення на гуманізовану США № 5,766,846, № 5,837,672 та № 5,593,846) форму. Антитіла можуть або можуть не глікозилуописують одержання антитіл, у тому числі монокватись, хоча перевага надається глікозилованим лонального антитіла, що було позначене як клон антитілам. Загальновідомо, що антитіла відповід266, яке було одержане проти і показане як таке, ним чином структуруються за допомогою дисульщо специфічно зв'язується з пептидом, до складу фідних зв'язків. якого входять амінокислоти 13-28 Aβ пептиду. ЗаВідомо, що основна структурна одиниця антиявники встановили, що антитіла, які зв'язуються у тіла включає тетрамер. Кожний тетрамер складамежах цієї ділянки, у протилежність до антитіл, які ється із двох ідентичних пар поліпептидних ланцюзв'язуються будь-де на амінокислотній послідовгів, причому кожна пара має один "легкий" ності Aβ, є здатними до дуже ефективного секвес(приблизно 25 кДа) та один "важкий" ланцюг (притрування Aβ пептиду з макромолекулярних комблизно 50-70 кДа). Амінокінцева частина кожного плексів. Це секвестрування буде викликати ланцюга включає варіабельну ділянку із приблиззагальний відтік Aβ пептиду з центральної нервоно 100-110 або більше амінокислот, яка, головним вої системи, змінювати його виведення з центрачином, відповідає за розпізнавання антигена. Карльної нервової системи та плазми і зменшувати боксильна кінцева ділянка кожного ланцюга предрівень його доступності для утворення бляшок. ставляє собою константу ділянку, яка відповідає, Таким чином, антитіла такої специфічності, модиголовним чином, за ефекторну функцію. фіковані для зниження їхньої імуногенності шляЛегкі ланцюги класифікуються як гамма, мю, хом перетворення на гуманізовану форму, надаальфа та лямбда. Важкі ланцюги класифікуються ють можливість лікування як профілактичного, так і як гамма, мю, альфа, дельта або епсілон і визнатерапевтичного станів, які пов'язуються з утворенчають ізотип антитіла як IgG, IgM, IgA, IgD та IgE, ням бета-амілоїдних бляшок. До таких станів навідповідно. Варіабельні та константні ділянки у лежать, як згадувалось перед тим, передклінічна межах легких та важких ланцюгів з'єднуються діта клінічна форми хвороби Альцгеймера, синдром лянкою "J", яка складається із приблизно 12 або Дауна та передклінічна та клінічна форми цереббільше амінокислот. До складу важкого ланцюга ральної амілоїдної ангіопатії. входить також ділянка "D", яка складається із приТермін "лікування", яке використовується у близно 10 або більше амінокислот. цьому описі, означає терапевтичне лікування у Варіабельні ділянки кожної пари легкоразі уже відомої присутності стану для лікування, го/важкого ланцюгів утворюють сайт зв'язування та профілактику, тобто запобігання, або поліпшенантитіла. Таким чином, інтактне антитіло має два ня можливої майбутньої появи стану. сайти зв'язування. Усі ланцюги мають однакову Вираз "моноклональні антитіла, які зв'язуютьзагальну структуру, яка включає відносно консерся з середньою ділянкою Aβ пептиду" означає мовативні каркасні ділянки (FR), які сполучаються ноклональні антитіла (Mab або Mabs), які зв'язують трьома гіперваріабельними ділянками, що назиамінокислотну послідовність, яка представляє соваються також комплементарними визначальними бою епітоп, що знаходиться між положеннями 13ділянками або CDR. Гіперваріабельні ділянки двох 28 Aβ. Немає потреби у забезпеченні спрямованої ланцюгів кожної пари впорядковано розміщаються доставки до усієї ділянки. Доти, доки антитіло зв'яу межах каркасних ділянок, що забезпечує їх зв'язується як мінімум з одним епітопом у межах цієї зування зі специфічним епітопом. До складу легких ділянки (зокрема, наприклад, із включенням сайту та важких ланцюгів, від N-кінцевої до С-кінцевої α-секретази 16-17 або сайту, на якому зв'язується ділянок, входять домени FR1, CDR1, FR2, CDR2, антитіло 266), такі антитіла є ефективними у споFR3, CDR3 та FR4. Співвіднесення амінокислот та собі за цим винаходом. кожного домену відповідає добре відомим угодам Термін "антитіло" означає моноклональне ан[Кабат (Kabat) "Sequences of Proteins of титіло per se або його імунологічно ефективний Immunological Interest" National Institutes of Health, фрагмент, наприклад, такі його фрагменти, як Fab, Bethesda, Md., 1987 та 1991; Чотья (Chothia) та Fab' або F(ab')2. У деяких контекстах цього опису інші, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Чотья фрагменти будуть згадуватись із конкретною ме(Chothia) та інші, Nature 342:878-883 (1989)]. тою надання особливого значення; слід розуміти, У цій галузі загальновідомо, що моноклональні однак, що незалежно від того, чи вказуються фраантитіла з відповідною специфічністю можна легко гменти, термін "антитіло" включає як такі фрагменодержати стандартними методами імунізації ссавти, так і одноланцюжкові форми. Доти, доки білок ців, з одержанням гібридом з антитілопродукуючих зберігає здатність до специфічного зв'язування з клітин згаданих ссавців або шляхом їх іморталізайого наміченою мішенню, і, у цьому разі, до секвеції будь-яким іншим способом, та культивуванням стрування Aβ пептиду від його білків-носіїв у крові, гібридом або іморталізованих клітин із визначенвін входить до обсягу поняття, яке визначається ням відповідної специфічності. У даному разі, такі терміном "антитіло". До обсягу поняття, яке визнаантитіла можна одержати шляхом імунізації людичається терміном "антитіло" входять також однони, кролика, пацюка або миші, наприклад, пептиланцюжкові форми, які, взагалі, позначаються як дом, який представляє собою епітоп, що охоплює Fv ділянки антитіл із такою специфічністю. За варі13-28 ділянку Aβ пептиду або його відповідний антом, якому віддається перевага, однак не обосубрегіон. Матеріали для рекомбінантного маніпув'язково, антитіла, придатні для цього винаходу, лювання можна одержати шляхом віднаходження продукують рекомбінантними способами, оскільки нуклеотидних послідовностей, які кодують необтипові мишачі або інші нелюдські антитіла з відпохідне антитіло, з гібридоми або іншої клітини, яка відною специфічністю потребують деякого маніпуйого продукує. Після цього зі згаданими нуклеоти 13 89028 14 дними послідовностями можна маніпулювати для ше знищувати клітини-мішені комплементодержання їх у гуманізованій формі. залежною цитотоксичністю (CDC) або антитілоТермін "гуманізоване антитіло" означає антизалежною клітинною цитотоксичністю (ADCC)). тіло, яке частково або повністю складається з амі2) Людська імунна система не повинна розпінокислотних послідовностей, які були одержані з знавати каркасну або С-ділянку гуманізованого зародкової лінії людських антитіл шляхом зміни антитіла як чужорідну і, таким чином, гуморальна послідовності антитіла, яке має нелюдські гіперваімунна відповідь проти такого антитіла, яке було ріабельні ділянки. Найпростішою з таких змін є впорснуто, повинна бути меншою, аніж проти повзаміна мишачої константної ділянки константною ністю чужорідного нелюдського антитіла або частділянкою людського антитіла, завдяки чому утвоково чужорідного химерного антитіла. рюється людська/мишача химера, яка може мати 3) Повідомлялось, що впорснуті нелюдські андостатньо низьку імуногенність, щоб бути прийнятитіла мають набагато коротший час напівжиття у тною для фармацевтичного використання. Однак кровообігу людини, аніж людські антитіла. Впорсза варіантом, якому віддається перевага, варіабенуті гуманізовані антитіла будуть мати час напівльна ділянка антитіла і навіть гіперваріабельна життя по суті ідентичний природним людським ділянка також гуманізуються за допомогою метоантитілам, що дозволить вводити менші дози з дів, які на цей час є загальновідомими у цій галузі. меншою частотою. Каркасні ділянки варіабельних ділянок замінюютьГуманізовані імуноглобуліни можуть створюся на відповідні людські каркасні ділянки. Нелюдватись наведеним далі чином. У разі, коли аміноські гіперваріабельні ділянки у цьому разі залишакислота підпадає під наведену далі категорію, карються по суті інтактними або навіть замінюються касна амінокислота людського імуноглобуліну, що послідовностями, які одержують із людського гемає бути використана (імуноглобулін-реципієнт), ному. Повністю людські антитіла продукуються у замінюється на каркасну амінокислоту нелюдськогенетично модифікованих мишах, імунна система го імуноглобуліну, який забезпечує гіперваріабеяких була змінена і відповідає імунній системі люльну ділянку (імуноглобулін-донор): дини. Як згадувалось перед тим, для здійснення (a) амінокислота на людській каркасній ділянці способів за цим винаходом достатньо використоімуноглобуліну-реципієнта є незвичною для людвувати імунологічно специфічний фрагмент антиського імуноглобуліну у цьому положенні, у той час тіла, у тому числі фрагменти, які представляють як відповідна амінокислота у імуноглобулінуодноланцюжкові форми. донора є типовою для людського імуноглобуліну у Гуманізоване антитіло означає антитіло, до цьому положенні; складу якого входить людський каркас, як мінімум (b) положення амінокислоти є безпосередньо одна гіперваріабельна ділянка нелюдського антисуміжним із положенням гіперваріабельних ділятіла, і будь-яка константна ділянка якого є по суті нок; або ідентичною константній ділянці людського імуног(c) будь-який атом бічного ланцюга каркасної лобуліну, наприклад, ідентична на приблизно 85амінокислоти знаходиться на відстані приблизно 90%, за варіантом, якому віддається перевага, 5-6 Å (міжцентрова відстань) від будь-якого атому ідентична як мінімум на 95%. Таким чином, усі амінокислоти гіперваріабельної ділянки на об'ємчастини гуманізованого антитіла, за виключенням, ній моделі імуноглобуліну [Квін (Queen) та інші, можливо, гіперваріабельних ділянок, є по суті ідецитована робота, та Ко (Со) та інші, Proc. Natl. нтичними відповідним частинам однієї або декільAcad. Sci. USA 88, 2869 (1991)]. У разі, коли кожна кох нативних людських імуноглобулінових посліамінокислота на людській каркасній ділянці імунодовностей. Наприклад, до складу гуманізованого глобуліну-реципієнта та відповідна амінокислота імуноглобуліну за типовим варіантом не буде вхоімуноглобуліну-донора є незвичною для людського дити химерне антитіло, що включає мишачу варіаімуноглобуліну у цьому положенні, така амінокисбельну ділянку/людську константну ділянку. лота замінюється на амінокислоту, типову для Гуманізовані антитіла мають як мінімум три людського імуноглобуліну у цьому положенні. потенційні переваги над нелюдськими та химерГуманізованим антитілом, якому віддається ними антитілами при використанні для лікування перевага, є гуманізована форма мишачого антитілюдей: ла 266. Гіперваріабельні ділянки гуманізованого 1) оскільки ефекторна частина є людською, антитіла 266 мають наведені далі амінокислотні вона може краще взаємодіяти з іншими частинами послідовності: людської імунної системи (наприклад, ефективніCDR1 легкого ланцюга: (Послідовність № 1) CDR2 легкого ланцюга: (Послідовність № 2) CDR3 легкого ланцюга: (Послідовність № 3) CDR1 важкого ланцюга: 15 89028 16 (Послідовність № 4) CDR2 важкого ланцюга: (Послідовність № 5) та CDR3 важкого ланцюга: (Послідовність № 6). Варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, якій віддається перевага, за цим винаходом має наведену далі амінокислотну (Послідовність № 7), де Хаа у положенні 2 - Val або I1е; Хаа у положенні 7 - Ser або Thr; Хаа у положенні 14 - Thr або Ser; Хаа у положенні 15 - Leu або Pro; Хаа у положенні 30 - I1е або Val; Хаа у положенні 50 - Arg, Gln або Lys; Хаа у положенні 88 - Val або Leu; Хаа у положенні 105 - Gln або Gly; Хаа у положенні 108 - Lys або Arg; та послідовність, де каркас походить зі сегментів DPK18 людської зародкової лінії Vk та сегмента Jk1 людської зародкової лінії J, з декількома амінокислотними замінами на консенсусні амінокислоти у тій же самій V людській підгрупі для зменшення потенційної імуногенності: Xaa у положенні 109 - Val або Leu. Варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, якій віддається перевага, за цим винаходом має наведену далі амінокислотну послідовність, де каркас походить зі сегментів DP53 людської зародкової лінії VH та сегмента JH4 людської зародкової лінії J, з декількома амінокислотними замінами на консенсусні амінокислоти у тій же самій людській підгрупі для зменшення потенційної імуногенності: 17 89028 18 (Послідовність № 8), де Хаа у положенні 1 - Glu або Gln; Хаа у положенні 7 - Ser або Leu; Хаа у положенні 46 - Glu, Val, Asp або Ser; Хаа у положенні 63 - Thr або Ser; Хаа у положенні 75 - Ala, Ser, Val або Thr; Хаа у положенні 76 - Lys або Arg; Хаа у положенні 89 - Glu або Asp; та Хаа у положенні 107 - Leu або Thr. Варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, якій віддається особлива перевага, за цим винаходом має наведену далі амінокислотну послідовність, де каркас походить зі сегментів DPK18 людської зародкової лінії Vk та сегмента Jk1 людської зародкової лінії J, з декількома амінокислотними замінами на консенсусні амінокислоти у тій же самій V людській підгрупі для зменшення потенційної імуногенності: (Послідовність № 9). Варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, якій віддається особлива перевага, за цим винаходом має наведену далі аміно кислотну послідовність, де каркас походить зі сегментів DP53 людської зародкової лінії VH та сегмента JH4 людської зародкової лінії J: 19 89028 20 (Послідовність № 10). Легкий ланцюг для гуманізованого антитіла, якому віддається перевага, за цим винаходом має амінокислотну послідовність: 21 89028 22 (Послідовність № 11). Важкий ланцюг для гуманізованого антитіла, якому віддається перевага, за цим винаходом має амінокислотну послідовність: 23 (Послідовність № 12). Для гуманізованих антитіл за цим винаходом та для гуманізованого антитіла 266 можливими є інші послідовності для легких та важких ланцюгів. Імуноглобуліни можуть мати дві пари комплексів легкий ланцюг/важкий ланцюг, причому до складу як мінімум одного ланцюга входить одна або декілька мишачих гіперваріабельних ділянок, функціонально зв'язаних зі сегментами людської каркасної сегментної ділянки. За іншим аспектом, цей винахід спрямовано на рекомбінантні полінуклеотиди, які кодують антитіла, до складу яких, у разі їх експресування, входять суперваріабельні ділянки важкого та легкого ланцюга антитіла за цим винаходом. Щодо людської каркасної ділянки, амінокислотна послідовність каркасної або варіабельної ділянки нелюдського імуноглобуліну, який забезпечує гіперваріабельну ділянку, порівнюється з відповідними послідовностями колекції послідовностей варіабельної ділянки людського імуноглобуліну і обирається послідовність, яка має високий відсоток ідентичних амінокислот. Типові полінуклеотиди, які при експресуванні кодують поліпептидні ланцюги, до складу яких входять гіперваріабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів моноклонального антитіла 266, представлені на Фіг. 4 та Фіг. 5. Унаслідок виродження кодонів та некритичної заміни амінокислот, замість цих послідовностей можуть підставлятись інші полінуклеотидні послідовності. Полінуклеотиди, яким віддається особлива перевага, за цим винаходом кодують антитіла, до складу яких, після експресування, входять гіперваріабельні ділянки Послідовності № 1Послідовності № 6 або будь-яка з варіабельних ділянок послідовності № 7-послідовності № 10, або легкі та важкі ланцюги послідовності № 11 та послідовності № 12. До складу полінуклеотидів, як правило, додатково входить полінуклеотидна послідовність контролювання експресії, яка функціонально зв'язана з 89028 24 послідовностями кодування гуманізованого імуноглобуліну, з включенням природно-асоційованих або гетерологічних промоторних ділянок. За варіантом, якому віддається перевага, послідовностями контролювання експресії будуть еукаріотні промоторні системи у векторах, здатних до трансформування або трансфікування еукаріотних клітин-хазяїв, однак використовуватись можуть також контрольні послідовності для прокаріотних хазяїв. Після включення вектора до складу відповідної лінії клітин-хазяїв, клітина-хазяїн розмножується за умов, придатних для високорівневої експресії нуклеотидних послідовностей з подальшим, за бажанням, збиранням та очищенням легких ланцюгів, важких ланцюгів, димерів, які складаються з легких/важких ланцюгів або інтактних антитіл, зв'язувальних фрагментів або інших імуноглобулінових форм. Нуклеотидні послідовності за цим винаходом, здатні до кінцевого експресування необхідних гуманізованих антитіл, можуть формуватись із цілого ряду різних полінуклеотидів (геномна або кДНК, РНК, синтетичні олігонуклеотиди тощо) та компонентів (наприклад, ділянки V, J, D та С), а також за допомогою цілого ряду різних способів. Поєднання відповідних геномних та синтетичних послідовностей є загальноприйнятим способом продукування, однак використовуватись можуть також послідовності кДНК. Послідовності ДНК людських константних ділянок можуть виділятись за добре відомими методиками з різноманітних людських клітин, однак за варіантом, якому віддається перевага, з іморталізованих В-клітин. Гіперваріабельні ділянки для продукування імуноглобулінів за цим винаходом будуть подібним же чином одержуватись із нелюдських моноклональних антитіл, здатних до зв'язування з епітопом між амінокислотами 13 та 28 Aβ пептиду, причому згадані моноклональні антитіла продукуються у будь-якому придатному джереліссавці, у тому числі мишах, пацюках, кроликах або 25 89028 26 інших хребетних, здатних до продукування антитіл бути будь-яка кількість добре відомих промоторів, добре відомими методами, як описувалось перед таких як лактозна промоторна система, триптофатим. Відповідні клітини-джерела для полінуклеонова (trp) промоторна система, бета-лактамазна тидних послідовностей та клітини-хазяї для експромоторна система або промоторна система з пресії та секретування імуноглобулінів можуть фагу лямбда. Згадані промотори будуть, як правиодержуватись із ряду джерел, добре відомих у цій ло, контролювати експресію, факультативно з галузі. операторною послідовністю, та мати послідовності На додаток до гуманізованих імуноглобулінів, сайту зв'язування рибосом тощо для ініціювання конкретний опис яких наведено, інші "по суті гомота закінчення транскрипції та трансляції. логічні" модифіковані імуноглобуліни можуть легко Для експресії можуть використовуватись також створюватись та одержуватись за допомогою різінші мікроби, такі як дріжджі. Сахароміцети є хазяноманітних методів рекомбінантних ДНК, добре їном, якому віддається перевага, з придатними відомих фахівцям у цій галузі. Наприклад, каркасні векторами, які мають послідовності контролюванділянки можуть відрізнятись від нативних послідоня експресії, такі як промотори, з включенням 3вностей на рівні первинної структури декількома фосфогліцераткінази або інших гліколітичних феамінокислотними замінами, кінцевими та проміжрментів, та сайти ініціювання реплікації, термінаними доданнями та делеціями тощо. Більше того, тори тощо, за бажанням. цілий ряд різноманітних людських каркасних діляОкрім мікроорганізмів, для експресії та продунок може використовуватись самостійно або у кування поліпептидів за цим винаходом можуть комбінації як основа для гуманізованих імуногловикористовуватись також клітини культур тканин булінів за цим винаходом. Взагалі, модифікації ссавців. Перевага фактично надається клітинамгенів можуть легко здійснюватись за допомогою еукаріотам, оскільки у цій галузі було створено цілого ряду добре відомих методів, наприклад, цілий ряд придатних ліній клітин-хазяїв, здатних сайт-спрямованого мутагенезу. до секретування інтактних імуноглобулінів, у тому За альтернативним варіантом можуть продучислі лінії клітин яєчника китайського хом'ячка, куватись поліпептидні фрагменти, до складу яких різні лінії клітин яєчника мавп, лінії клітин яєчника входить лише частина структури основного антисірійського хом'ячка, клітини HeLa, за варіантом, тіла, причому згадані фрагменти мають одну або якому віддається перевага, лінії клітин мієломи, декілька імуноглобулінових активностей (напритрансформовані B-клітини, лінії клітин нирок людклад, комплементзв'язувальну активність). Ці поліського зародка або гібридоми. Вектори експресії пептидні фрагменти можуть продукуватись протедля цих клітин можуть включати послідовності олітичним розщепленням інтактних антитіл за контролювання експресії, такі як сайт ініціювання допомогою методів, добре відомих у цій галузі, реплікації, промотор, енхансер та необхідні сайти або шляхом введення стоп-кодонів до необхідних обробки інформації, такі як сайти зв'язування риположень у векторах за допомогою сайтбосом, сайти сплайсинга РНК, сайти поліаденілуспрямованого мутагенезу, наприклад, після СН1 вання та послідовності термінаторів транскрипції. для одержання Fab фрагментів або після шарнірПослідовностями контролювання експресії, яким ної ділянки для одержання F(ab')2 фрагментів. Одвіддається перевага, є промотори, одержані з імуноланцюжкові антитіла можна одержувати шляхом ноглобулінових генів, SV40, аденовірусу, вірусу сполучення легкого (VL) та важкого (VH) ланцюгів папілом великої рогатої худоби, цитомегаловірусу за допомогою лінкерної ДНК. тощо. Як вказувалось перед тим, кодувальні нуклеоВектори, до складу яких входять необхідні нутидні послідовності будуть експресуватись у хазяклеотидні послідовності (наприклад, послідовності ях після функціонального зв'язування послідовнокодування важких та легких ланцюгів та послідовстей (наприклад, позиціонованих для ності контролювання експресії) можуть переносизабезпечення функціонування) з послідовністю тись до клітини-хазяїна добре відомими методами, контролювання експресії. Ці вектори експресії, як які різняться у залежності від типу клітинного хазяправило, реплікуються у мікроорганізмах-хазяях як їна. Наприклад, для клітин-прокаріотів традиційно епісоми або як складова частина хромосомної ДНК вдаються до трансфекції хлоридом кальцію, у той хазяїна. До складу векторів експресії, як правило, час як для інших клітинних хазяїв може використовходять селекційні маркери, наприклад, тетрациквуватись обробка фосфатом кальцію або електролін або неоміцин, для забезпечення виявлення порація. трансформованих клітин із необхідними послідовПісля експресії цілі антитіла, їхні димери, ностями ДНК. окремі легкі та важкі ланцюги або інші імуноглобуE.coli представляє собою прокаріотного хазяїлінові форми за цим винаходом можуть очищатись на, придатного, зокрема, для клонування полінукза стандартними процедурами цієї галузі, у тому леотидів за цим винаходом. До числа інших хазячислі осадженням сульфатом амонію, іонообмінїв-мікробів, придатних для використання, ною, афінною хроматографією, хроматографією з належать бацили, наприклад, Bacillus subtilus, та оберненою фазою, гідрофобною хроматографією, інші ентеробактерії, наприклад, Salmonella, Serratis гель-електрофорезом тощо. Для фармацевтичних та інші види Pseudomonas. У цих хазяяхцілей перевага віддається по суті чистим імуногпрокаріотах можна також створювати вектори екслобулінам, які мають як мінімум приблизно 90-95% пресії, до складу яких, як правило, будуть входити гомогенність, і більша перевага віддається імуногпослідовності контролювання експресії, сумісні із лобулінам, які мають 98-99% або більшу гомогенклітиною-хазяїном (наприклад, сайт ініціювання ність. Після очищення (часткового або до рівня реплікації). На додаток до цього, присутньою може необхідної гомогенності) поліпептиди можуть ви 27 89028 28 користовуватись із терапевтичними або профілакN,N,N-триметиламонійхлорид (DOTMA), або різні тичними цілями, як вказується у цьому описі. сполуки, такі як гемісукцинат холестерину, фосфаАнтитіла (у тому числі імунологічно реактивні тиділгліцерин тощо. фрагменти) вводяться суб'єкту з підвищеним ризиКонцентрація гуманізованого антитіла у комком або суб'єкту, який демонструє Aβ-пов'язані позиції становить від приблизно 0,1% (мас.) до симптоми або патологію, таку як клінічна або пе15% (мас.) або 20% (мас.) і буде обиратись, голоредклінічна форми хвороби Альцгеймера, синдром вним чином, виходячи з об'ємів рідини, в'язкості Дауна або клінічна чи передклінічна форми амілотощо, відповідно до конкретного способу введенїдної ангіопатії, за допомогою стандартних методів ня, який було вибрано. Таким чином, до складу введення, за варіантом, якому віддається переватипової фармацевтичної композиції для впорскуга, периферично (тобто не шляхом введення до вання буде входити 1 мл стерильної забуференої центральної нервової системи), інтравенозно, внуводи або забуференого фосфатом фізіологічного трішньоочеревинно, підшкірно, долегенево, черерозчину та 1-100 мг гуманізованого антитіла за зшкірно, внутрішньом'язово, інтраназально, пербуцим винаходом. Композиція, після одержання, букально, сублінгвально або за допомогою де піддаватись стерильному фільтруванню або її супозиторіїв. Хоча антитіла можуть вводитись мікробіологічна прийнятність буде забезпечувабезпосередньо до вентрикулярної системи, спінатись будь-яким іншим способом. До складу типової льної рідини або паренхими головного мозку і мекомпозиції для інтравенозного вливання може тоди введення до цих ділянок є добре відомі у цій входити до 250 мл рідини, такої як стерильний галузі, немає необхідності вдаватись до цих більш розчин Рінгера, з концентрацією антитіла 1-100 важких процедур. Антитіла за цим винаходом є мг/мл або більше. ефективними у разі введення більш простими меТерапевтичні засоби за цим винаходом мотодами, які покладаються на периферичну систежуть заморожуватись або ліофілізуватись для му кровообігу. Перевагою цього винаходу є здатзбереження та відновлюватись у відповідному ність антитіла реалізувати свої цілющі ефекти стерильному носії перед використанням. Насліднавіть у тому разі, коли воно не доставляється ком ліофілізації та відновленням може бути різний безпосередньо до самої центральної нервової ступінь втрати активності антитіла (наприклад, із системи. Дійсно, у цьому описі було показано, що традиційними імуноглобулінами, IgM антитіла макількість антитіла, яка долає гематоенцефалічний ють схильність до більшої втрати активності, аніж бар'єр, дорівнює