Живильне середовище для виділення культур мікобактерій

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской микробиологии и касается получения питательных сред для выделения из патологического материала возбудителей туберкулеза и атипичных микобактєрий и может быть использовано в работе практических и научно-исследовательских лабораторий с целью постановки первичного диагноза на туберкулез, а также для излучения у культур микобактєрий культуральных, биохимических и биологических свойств. Известна сред Гельберга для выделения культур микобактєрий, содержащая калий двухосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магнезию сернокислую, пептон, глицерин, воду, молоко, картофельный отвар, цельные яйца, желтки и 2%-ный водный раствор малахитового зеленого. В лабораторной практике используется также среда Финн-2, содержащая магний сульфат, натрий цитрат, квасцы железоаммиачные, калий фосфат однозамещенный, аммоний цитрат однозамещенный, натрий глутаминат однозамещенный, глицерин, яичную массу и малахитовый зеленый. Наиболее близким решением, выбранным в качестве прототипа, является среда Левенштейна-Иенсена, содержащая калий фосфат однозамещенный, магний сульфат, натрий цитрат, Л-аспэрагин, глицерин, яичную массу и малахитовый зеленый. Недостатком известной среде является недостаточная ее элективность. Кроме того, в состав компонентов среды входит дорогостоящий препарат Л-аспарогин, который не выпускается отечественной промышленностью и закупается за рубежом. В основу изобретения поставлена задача - изыскать компоненты, позволяющие исключить из состава среды Л-аспарагии, повысить питательные свойства и уменьшить их себестоимость. .Указанная задача решается путем ведения в состав среды солей: аммония азотнокислого и цинка сернокислого при следующем соотношении компонентов, мас.%: Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый состав среды отличается от известного заменой Л-аспарагина и введением новых компонентов, а именно солеи аммония азотнокислого и цинка сернокислого. Анализ известных питательных сред для культивирования и выделения микобактерий показал, что введенные в состав среды соли аммония и цинка находят применение в других известных средах. Однако их применение в этих срезах в сочетании с иными компонентами не обеспечивает средам такие свойства, которые они проявляются в заявляемом решении, а именно улучшение ростовых питательных свойств среды при исключении из состава компонента Л-аспарагина. Таким образом, данный состав компонентов придает среде более высокие ростовые свойства. Питательную среду готовят следующим образом: Навески солей в указанной последовательности растворяют в дистиллированной воде, добавляют глицерин, смешивают и подщелачивают 20% раствором едкого натрил до рН 7,0-7,2, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы и автоклаьируют при 1,5 атм в течение 30 мин. Солевой раствор хранят при 4°С не более двух недель. Яичную массу приготавливают из свежих куриных яиц, которые тщательно моют щеткой с милом, протирают тампоном, смоченным в 70° спирте, разбивают, содержимое помещают в стерильную колбу, гомогенизируют, фильтруют через два слоя марли, добавляя к ней раствор солей и 2% раствор малахитового зеленого, тщательно перемешивают и разливают в бактериологические пробирки. Коагулируют в наклонном положении при 90°С в течение 1 часа в аппарате для инактивации сыворотки. Пример 1, Питательную среду готовят как указано выше, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Пример 2. То же, что в примере 1, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Πример 3. То же, что в примерах 1 и 2, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Элективные свойства среды определяют путем посева 0,1 мл взвеси микобактерий туберкулеза на стерильном физиологическом растворе, концентрация клеток бактерий в растворе 10 клеток (мл) бычьего /штамм Vallee/. Человеческого штамм H37RV/ видов, а также патологического маїериала, полученного от больных туберкулезом животных. Пробирки с посевами закрывают ватно-марлевыми пробками, заливают парафином и помещают в термостат, Выращивают культуры при 37°С в течение 90 дней. Учет роста колоний проводят через каждые 37 дней. Результаты исследований приведены в таблице. Анализ полученных данных показан, что предлагаемая питательная среда является более элективной для возбудителей туберкулеза, которые на 3 дня раньше вегетируют и приживаются, чем на среде Ливенштеина-Иенсена. Кроме того, она в 25 раз дешевле от известной среды и не требует для приготовления импортных компонентов