Живильне середовище для одержання і вирощування калюсних тканин рослин

Изобретение относится к культивированию растительных тканей и может применяться в биотехнологии, в частности, для получения клеточной биомассы лекарственных, пищевых, особенно кустарниковых и древесных, а также др растений. Наиболее близкой по составу к заявляемой является питательная среда для выращивания культуры ткани раувольфии змеиной - продуцента алкалоидов [1] Известная питательная среда содержит смесь солей, смесь микроэлементов, смесь витаминов и углеводов, состоящую из тиамина, инозита, сахарозы, а также агар-агар и воду. Количественное соотношение компонентов в среде следующее (мг/л): Известная питательная среда обеспечивает значительное повышение накопления алкалоидов в культивируемых клетках раувольфии, Однако она не пригодна для индукции каллусообразования, не обеспечивает получение и рост пассируемых клеточных культур других видов растений. В основу изобретения поставлена задача разработать питательную среду для получения и выращивания каллусных тканей растений путем дополнительного введения новых компонентов в известную питательную среду при новом количественном соотношении компонентов в среде, что приводит к повышению эффективности каллусообразования и получению пассируемых клеточных культур. Поставленная задача достигается тем, что известная питательная среда дополнительно содержит пиридоксин, никотиновую кислоту, глицкн, кинетин, гидролизат казеина и соль (ΝΗ4)2 · ΗΡΟ4 при следующем соотношении компонентов (мг/л): Заявляемая питательная среда для получения и выращивания каллусных тканей растений может дополнительно содержать в своем составе 2,4-ди-хлорфеиокеиуксус-ную кислоту в количестве не более 1,0 мг/л. Технология приготовления питательной среды заключается в следующем; Прежде чем приступить к приготовлению среды, готовят серию концентратов: Концентрат микроэлементов готовят из расчета, чтобы в 1 мл раствора содержалось указанное в прописи количество всех микроэлементов. Каждый из микроэлементов растворяют отдельно в небольшом количестве воды, затем растворы сливают и доводят до нужного объема. Концентраты тиамина, пирьдоксина, никотиновой кислоты, глицина - по 10 мг каждого растворяют в 10 мг воды. Концентрат Fe-хелата - FeSO4 * 7НгО и №гЭДТА растворяют при подогревании в воде так, чтобы указанные в прописи дозировки этих солей содержались в 5 мл раствора. Агар-агар растворяют при кипячении в 500 мл воды. Макроэлементы растворяют в отдельности в небольшом количестве воды. Подготовленные ингредиенты сливают в раствор агара, добавляя кинетии и 2,4-Д. Раствор доводят водой до 1 л. Среду разливают в пробирки или колбы, стерилизуют в автоклаве при 1 атм 10-15 мин. После застывания и естественного охлаждения до комнатной температуры на поверхность среды в стерильных условиях высаживают первичные эксплантаты растений (предварительно простерилизованные) или эксплантаты полученных и/или длительно пассируемых каллусных тканей. Для иллюстрации эффективности каллусообразования заявляемой питательной среды были изготовлены питательные среды по классическим прописям, по прототипу и в соответствии с заявляемым изобретением. Высаживали эксплантаты разных видов растений и вели учет образовавшихся первичных каллусов на 35-40 сутки роста. Эффективность образования первичного каллуса на эксплантатах разных видов растений при использовании известных и предлагаемой питательных сред (в процентах от числа высаженных эксплантатов) представлена данными табл.1. Полученные дание свидетельствуют, что эффективность каллусообразования на предлагаемом составе питательной среды в несколько раз выше, чем на известных составах сред. Для получения пассируемых тканей образовавшиеся первичные каллусы переносили на те же составы питательных сред и выращивали в течение 3-4 пассажей. Учет полученных пассируемых тканей вели на 3040 сутки роста 3-4 пассажа. Данные (в процентах от числа высаженных эксплантатов), представленные в табл.2, свидетельствуют, что эффективность получения пассируемых тканей на предлагаемом составе питательной среды значительно выше, чем на известных составах сред для всех изученных видов растений. Из данных таблицы 1, которую можно озаглавить "Эффективность образования первичного каллуса на эксплантатах разных видов растений при использовании известных и предлагаемой питательных сред (в процентах от числа высаженных эксплантатов)", и таблицы 2, которую можно озаглавить "Эффективность получения пассируемых тканей (в процентах от числа высаженных эксплантатов)", следует, что повышение эффективности каллусообразования и получения пассируемых клеточных культур обеспечивается совокупностью существенных признаков заявляемого изобретения, т.е. качественным и количественным соотношением компонентов новой питательной среды.