Спосіб оцінки ефективності імунотерапії при сечостатевих інфекціях

Спосіб оцінки ефективності імунотерапії при сечостатевих інфекціях, який включає застосування імунотропного препарату для стимуляції продукції оксиду азоту клітинами крові, який відрізняється тим, що як імунотропний препарат застосовують манакс та визначають його дію in vitro на співвідношення про- та антиапоптотичних маркерів CD95:bcl-2 клітин периферичної крові і при величині співвідношення більше 1,40 вважають недоцільним призначення імунотропного препарату. (19) (21) u200512765 (22) 29.12.2005 (24) 15.06.2006 (46) 15.06.2006, Бюл. № 6, 2006 р. (72) Драннік Георгій Миколайович, Дріянська Вікторія Євгенівна, Порошина Тетяна Вікторівна, Калініна Наталія Альбертівна, Савченко Вікторія Станіславівна, Шалімова Наталія Вікторівна, Горпинченко Ігор Іванович, Негрей Лариса Миколаївна (73) ІНСТИТУТ УРОЛОГІЇ АМН УКРАЇНИ, ІНСТИТУТ НЕФРОЛОГІЇ АМН УКРАЇНИ 3 15231 4 Відомий також спосіб комплексного лікування крові відмивають тричі в середовищі 199 і ресусхворих на хронічний сечостатевий хламідіоз [4], пензують в культуральному середовищі RPMIщо взятий нами за прототип, який полягає у засто1640, що містить 10% ембріональної телячої сиросуванні імунотропного препарату лаферону для ватки, 40мкг/мл гентаміцину, 5 10М 2підвищення імунного статусу шляхом стимуляції меркаптоетанолу та 3% L-глютаміну. Клітинну су6 продукції оксиду азоту (NО). спензію в концентрації 1,5 10 кл/мл інкубують 24 Недоліком способу є те, що вивчають дію імугодини в СО2-інкубаторі при t=37°C без стимулююнотропного препарату лаферон на деякі показники чого агента та в присутності препарату манакс у імунітету в клініці без попередньої оцінки його розведенні 20мкг/мл культурального середовища. впливу на ці показники. По закінченні строку інкубації клітини осаджують В основу корисної моделі поставлене завданцентрифугуванням при 1600об/хв. протягом 10 ня удосконалити спосіб оцінки ефективності імунохвилин, збирають супернатант і зберігають до тестерапії при сечостатевих інфекціях шляхом застотування при t= -20°С. сування імунотропного препарату манакс для б) Визначення рівня продукції оксиду азоту. стимуляції продукції оксиду азоту в умовах in vitro Для визначення в лімфоцитах стабільного метата оцінюють його вплив на апоптоз клітин по співболіту оксиду азоту - нітриту іону - (NO2) до 100мкл відношенню про-та антиапоптотичних маркерів супернатанту додають Greiss-реактив в об'ємі 1:1 CD95: bcl-2 клітин периферичної крові і при велив якості кольорутворюючого агенту для оцінки реачині відповідного співвідношення оцінюють доцікції. Останній складають з 1 частини 1% сульфанільність призначення імунотропного препарату, що ламіду, 1 частини 0,1% нафтилетиленаміду та дає можливість запобігання ускладнень імунотрорівного їм об'єму 5% фосфорної кислоти. Після 10пної терапії. хвилинної інкубації проводять визначення оптичВажливість визначення оксиду азоту пов'язана ної густини стандартів (розтитровка нітриту азоту в з тим, що він продукується багатьма клітинами та культуральному середовищі) та зразків суперналегко проходить через їх мембрани, виявляючи тантів на спектрофотометрі при довжині хвилі 492цитотоксичну та цитостатичну дію по відношенню 630 нанометрів. Для вірогідної оцінки результатів до внутрішньо- та зовнішньоклітинних збудників стандартна крива при побудові повинна бути ліінфекції, в тому числі сечостатевих. нійною та вказувати на прямопропорційний харакПоставлена задача вирішується тим, що спотер залежності між рівнем концентрації оксиду сіб оцінки ефективності імунотерапії при сечостаазоту в супернатанті та одиницями оптичної густитевих інфекціях, який включає застосування імунони. Дані аналізу проб відносно рівню синтезу окситропного препарату для стимуляції продукції ду азоту визначають шляхом їх інтерполяції з оксиду азоту клітинами крові, згідно з корисною отриманою кривою. моделлю, в якості імунотропного препарату виков) Рівень мононуклеарних клітин, що експреристовують манакс та визначають його дію in vitro сують CD95 і bcl-2 молекули, визначають за допона співвідношення про- та антиапоптотичних мармогою імунофлюоресцентного аналізу до та після керів CD95:bcl-2 клітин периферичної крові і при інкубації клітин, отриманих вищезазначеним, сповеличині співвідношення більше 1,4 вважають собом, при 37°С в присутності манаксу. недоцільним призначення імунотропного препараПрактичне використання способу, що пропоту. нується, проведено в лабораторії імунології ІнстиСпосіб оцінки ефективності імунотерапії при туту урології та Інституту нефрології АМН України. сечостатевих інфекціях проводять на підставі анаВизначення впливу імунотропного препарату лізу результатів досліджень клітин периферичної манаксу на рівень оксиду азоту, про- та антиапопкрові in vitro хворих на хронічний сечостатевий тотичних маркерів CD95 і bcl-2 в умовах in vitro хламідіоз наступним чином: проводили на клітинах крові 25 хворих на хроніча) одержання супернатантів для подальшого ний сечостатевий хламідіоз та 20 здорових доновимірювання в них оксиду азоту. Виділені на станрів (норма), дані досліджень наведені в таблиці. дартному градієнті фікол-верографін (щільність 1,076-1,078) мононуклеарні клітини периферійної Таблиця Результати вивчення in vitro впливу імунотропного препарату манакс на показники крові в нормі та хворих на хронічний сечостатевий хламідіоз Хворі на хронічний сечостатевий хламідіоз Показники крові Норма (n=20) 1 до дії манаксу (n=25) 2 післядії манаксу (n=25) 3 14,6±1,0 25,6±3,2 46,5±6,8 CD95 (%) 11,35±1,07 37,45±4,65 33,27±3,12 bcl-2 (%) 9,60±1,08 30,70±3,24 22,67±3,70 CD95:bcl-2 1,17±0,09 1,23±0,09 1,15±0,07 NO (пкг/мл) Статистичний показник Р Р1-2