Спосіб моделювання атеросклерозу

Спосіб моделювання атеросклерозу шляхом утримання тварин на спеціальній ДІЄТІ, ЯКИЙ відрізняється тим, що тварини отримували разом із звичайним раціоном харчування поварену сіль з розрахунку 2 г на 1 кг ваги тварин з одночасним утворюванням стресової ситуації шляхом обмеження життєвого простору до 8-10 см 2 на одну тварину Винахід відноситься до області фізіологи, а саме до моделювання патологічних процесів Більш поширеною сьогодні є холестеринова модель атеросклерозу Існує спосіб моделювання атеросклерозу шляхом годування тварин натуральним свинячим салом з подальшим піддаванням їх імобілізаційному стресу і введенням токсичної дози обзидану (авт св-во № 2033646 кл G 09В 23/28, 1995 р) Відомий також спосіб моделювання шляхом утримання тварин на атерогенній ДІЄТІ І введення в область середнього гіпоталамусу розплавленого парафіну (авт св-во № 982073 кл G 09В 23/28, 1982р) раціоном харчування поварену сіль з розрахунку 2г на 1кг ваги тварини, з одночасним утворюванням стресової ситуації шляхом обмеження життєвого простору до 8-10см2 на одну тварину Пропонуєма модель активує декілька атерогенних факторів По-перше, збільшення концентрації натрію в плазмі підвищує її осмолярність, що приводить до коректирующої секреції вазопресину, а також підвищує збудливість нервової системи і чутливість судини до вазопресорних впливів, що сприяє розвитку стійкої гіпертензії По-друге, обмеження життєвого простору для тварин даного виду є сильним стресовим впливом, що реалізується через активацію вегетативної нервової системи На першому МІСЦІ серед всіх відомих атерогенних факторів стоїть стрес і артеріальна гіпертензія (яка виникає як слідство стресу чи дії інших факторів) В пропонуємій моделі досліджувалась концентрація натрію та рівень кортизола в плазмі крові щурів і проводилось мікроскопічне дослідження шарів аорти Досліди були проведені на 82 щурах-самцях, яким на початку експерименту було 4 МІСЦІ ДОСЛІД продовжувався 21 тиждень Щоб уникнути змін, які спостерігаються при старінні всі тварини були поділені на 2 групи (контрольну і досліджувану) і всі виміри в цих групах проводились паралельно Для точного вияву стадій атеросклерозу всі досліди проводились через кожні три тижні Розглядаючи отримані дані, слід підкреслити, що концентрація натрію в плазмі на 21 тижні експерименту складала 93,61+12,13ммоль/л і 802,76+20,79ммоль/л у тварин контрольної і експериментальної груп ВІДПОВІДНО Таким чином, концентрація натрію в плазмі виросла майже в 10 разів, що призводить до утримання води і як слідство - до виробки стійкої гіпертензії Підвищена Найбільш близьким до пропонуємого способу є спосіб моделювання атеросклерозу шляхом годування тварин обезжиреним вівсом, вітамінами А і Д, хлоридом натрію, 6-метілтюурацилом та пряженим свинячим салом щоденно до появи ознак атеросклерозу (авт св-во №1133613 кл G 09В 23/28, 1985 р) Цей спосіб має слідуючи недоліки багатокомпонентний склад дієти, якісний склад якої такий, що часто тварини відмовляються м приймати, що змушує дослідника застосовувати насильне годування (через зонд) В результаті все це ускладнює роботу, утруднює засвоювання харчових складових, затягує дослід та збільшує матеріальні витрати Представлений винахід спрямовано на рішення задачі по створенню способу моделювання атеросклерозу, де поєднувались би атерогенні фактори, що найбільш часто зустрічаються в реальному житті і котрі утворюють морфологічну картину, найбільш близьку до клінічної Для рішення цієї задачі тварини отримували разом з звичайним 00 со 43978 концентрація натрію впливає на осморецептори гіпоталамусу і таким чином, на секрецію вазопресину Крім цього тварини були обмежені в життєвому просторі Це досягалося тим, що в стандартну клітину розміром 0,3 х 0,5м, де повинно бути 2-3 тварини розміщали 15-18 щурів Для тварин цього виду ця ситуація служить сильним стресовим стимулом Цей стимул через активацію симпатичного відділу вегетативної нервової системи призводить до підвищеної секреції катехоламшів Катехоламіни в свою чергу викликають реакції, підсумком яких будуть такі ж явища, які викликає ппернатрійплазмія стійке звуження судин, підвищення артеріального тиску і глюкози крові Всі ЦІ явища у сукупності впливають на виникнення атеросклерозу Контроль стресової ситуації вівся по утриманню кортізола в плазмі щурів Цей гормон вважається "гормоном стресу" і по його утриманню можна судити про стресовий стан організму Концентрація кортізола в плазмі крові тварин контрольної групи в КІНЦІ дослідження складала 161+8,5нг/мл, у тварин досліджуваної групи 240+12,4нг/мл Вся сукупність описаних факторів корелює з факторами, що найбільш частіше зустрічаються в реальному житті і які утворюють таку клінічну картину у тварин яка практично ідентична людській Це проілюстровано на мікрофотографіях (фіг 1, фіг 2) На фіг 1 представлена частина брюшної аорти в КІНЦІ дослідження (збільшення 40х) На фіг 2 аорта щура в КІНЦІ дослідження (збільшення ЮОх) Описане вище підтверджує причинослідствений зв'язок між сукупністю істотних ознак винаходу і отриманими результатами При порівнюванні наявного способу з прототипом отримали слідуючий технічний результат утворення моделі атеросклерозу, що має морфологічну картину, найбільш близьку до клінічної завдяки комбінації факторів, що найбільш часто зустрічаються в реальному житті Крім того модель надзвичайно проста як в технічному, так і в матеріальному виконанні Приклад 1 Щур-самець вагою 175г отримував зі звичайним раціоном харчування NaCI із розрахунку 2г на 1кг ваги і утримувався в стандартній КЛІТИНІ 0,3 х 0,5м разом з 17 іншими тваринами Таким чином досягалось обмеження нормального життєвого простору в 6 разів Через 21 тиждень тварину декапітували і збирали кров у пробірку Сироватку з крові отримували шляхом центрифугування м в центрифузі К-24 при 1500об/хв протягом 15 хвилин Визначення вмісту натрію в сироватці крові проводили у полум'ї "ацетилен - повітря" на атомно-абсорбційному спектрометрі AAS-30 фірми Карл Цейс Йена (Німеччина) Концентрація натрію у сироватці крові визначалася по такій формулі С о = С 1 -V/V^ де Co - утримання натрію в сироватці, мкг/мл, Сі - показання приладу концентрації натрію в мкг/мл розчину, V - обсяг розчину в мл, Vi - обсяг сироватки крові в мл Показник Со, мкг/мл переводили в ммоль/л за допомогою перерахуй ко во го коефіцієнту Концентрацію кортізола в сироватці крові визначали за методом імуноферментного аналізу Було виявлено, що утримання натрію в сироватці крові складало 848,52ммоль/л, кортізола 200нг/мл, що у порівнянні з твариною такого ж віку і статі більше в 9 і в 2 рази ВІДПОВІДНО Приклад 2 Щур-самець вагою 200г разом із звичайною їжею отримував NaCI із розрахунку 2г на 1кг ваги Обмеження у питної воді не було Ця тварина утримувалась у стандартній КЛІТИНІ 0,3 х 0,5м разом з 18 іншими особами такого ж віку і статі Через 21 тиждень тварину декапітували і в сироватці крові визначали утримання натрію і кортізола Далі у тварини вскривали грудну клітину і забирали для дослідження аорту Аорту фіксували, обезводнювали, заключали в смолу і виготовляли ультратонкі зрізи, котрі потім фарбували гематоксилин-еозином (фіг 1) та за методом Маллорі-Слінченко (фіг 2) і досліджували під світловим мікроскопом На фіг 1 представлена частина брюшної аорти щура, який разом з їжею отримував 2г NaCI на 1кг ваги тварини і утримувався в стандартній КЛІТИНІ разом з 17 іншими тваринами На зрізі (збільшення 40х) спостерігається проліферація гладком'язових клітин і фібробластів з формуванням атеросклеротичної бляшки Видно очаги некрозу, атероматоз На фіг 2 представлена та ж сама аорта при збільшенні ЮОх Наявно видно дегенерацію еластичного каркасу, деструкцію стінки аорти Еластичні волокна зруйновані, заміщені колагеном Спостерігається ЛІПІДОЗ, атероматоз, ксантоматоз стінки аорти з із'язвленням Отримана нами морфологічна картина ідентична спостерігаємій у людини Пропонуємий спосіб використовувався для створення моделі атеросклероза на 76 щурахсамцях Пропонуєма модель утворює морфологічну картину атеросклерозу, найбільш близьку до клінічної Це дозволяє прослідкувати всі стадії атеросклерозу і виявити роль кожного фактору в патогенезі захворювання Фактори, що викликають спостерігаєму морфологічну картину дуже природні і постійно зустрічаються в реальному житті Крім того, модель надзвичайно проста як в технічному, так і в матеріальному виконанні 43978 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім і Хохлових 15 м Київ 04119 Україна (044) 456 - 20 - 90