Спосіб визначення вмісту еуфіліну шляхом рідинної хроматографії

Спосіб визначення вмісту еуфіліну шляхом рідинної хроматографії, який містить кислотну обробку проби, її екстрагування сумішшю хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5, відділення органічного шару, фільтрацію, випаровування, розчинення сухого залишку 0,03 Н розчином соляної кислоти та хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою при заданому співвідношенні частин, який відрізняється тим, що кислотну обробку проби здійснюють еквімолярною КІЛЬКІСТЮ 6% хлорної кислоти, а задане співвідношення ацетонітрилу і води становить 20 80 Винахід відноситься до дослідження або аналізу матеріалів, переважно шляхом розділення їх на складові частини з використанням хроматографії, наприклад колоночної, та може бути використаний в дослідженнях медичних і ХІМІЧНИХ лабораторій Еуфілін (Euphilhnum) являє серцево-судинний, переважно спазмолітичний засіб, на разі теофілін з 1,2 етилендіамідом, до складу якого входять 80% теофіліну та 20% етилендіаміду (синоніми ammocardol, aminophilhnum, ammophilhn, diaphilhn (В), gemophilhn, metaphilhn, neophillm тощо) [1] Відомий спосіб визначення вмісту еуфіліну шляхом рідинної хроматографії, що містить кислотну обробку проби, и екстрагування хлороформом, відділення органічного шару, випаровування, розчинення сухого залишку розчином соляної кислоти та хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою при заданому співвідношенні частин, в якому, кислотну обробку проби здійснюють 0,05Н розчином сірчаної кислоти до досягнення рН 2,50, а співвідношення масових частин ацетонітрилу та води в одиниці об'єму становить 85 15 [2] До причин, що перешкоджають досягненню технічного результату у винаході, що заявляється, відносяться використання хлороформу для екстракції еуфіліну та використання означеної концентрації ацетонітрилу у воді при хроматографуванні Це зумовлено тим, що хлороформ знижує сту пінь екстракції еуфіліну, а співвідношення частин ацетонітрилу та води в одиниці об'єму 85 15 не призводить до бажаної селективності через надмірну експозицію продуктів розділення та недостатню активність елюенту Найбільш близьким об'єктом того ж призначення до винаходу, що заявляється, є спосіб визначення вмісту еуфіліну в рідині шляхом рідинної хроматографії, який містить кислотну обробку рідини, її екстрагування сумішшю хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5, відділення органічного шару, фільтрацію, випаровування, розчинення сухого залишку 0,03Н розчином соляної кислоти та хроматографування, з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою, при заданому співвідношенні частин, в якому кислотну обробку проби виконують соляною кислотою, а співвідношення частин ацетонітрилу та води становить 15 85 [3] Використання як екстрагенту суміші хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5, дозволило дещо поліпшити ступінь екстракції еуфіліну за рахунок підвищення полярності екстрагування, а суміші ацетонітрилу з водою при співвідношенні 15 85 частково поліпшити селективність завдяки збільшенню спорідненості одного з компонентів з елюентом і тривалості інтервалів між періодами їх утримання в суміші Однак, селективність хроматографічного розділення у відомому рішенні за дачі є ще недостат 00 ю 45278 ньою Причиною що перешкоджає досягненню очікуваного технічного результату, є недостатня елюція продукту, яка зумовлена кислотною обробкою рідини перед екстрагуванням саме соляною кислотою та співвідношенням масових частин ацетонітрилу і води у суміші 15 85 У основу винаходу поставлена задача розробити такий спосіб визначення еуфіліну в рідині, в якому шляхом оптимізацм властивостей елюенту та умов перебігу супровідних реакцій підвищується селективність хроматографічного розділення при використанні Означений технічний результат при здійсненні винаходу досягається тим, що у відомому способі визначення вмісту еуфіліну шляхом рідинної хроматографії, який містить кислотну обробку проби, и екстрагування сумішшю хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5, відділення органічного шару, фільтрацію, випаровування, розчинення сухого залишку 0,03Н розчином соляної кислоти та хроматографування, з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою, при заданому співвідношенні частин, згідно з винаходом, кислотну обробку проби здійснюють еквімолярною КІЛЬКІСТЮ 6% хлорної кислоти, а задане співвідношення ацетонітрилу води становить 20 80 Здійснення кислотної обробки водного розчину еуфіліну еквімолярною КІЛЬКІСТЮ 6% хлорної кислоти дозволяє нейтралізувати значну КІЛЬКІСТЬ ДОМІШОК, на приклад жирів, білків тощо, присутніх у початковому розчині, та забезпечує його оптимальну кислотність, а зміна взаємного співвідношення інгредієнтів, які входять до складу елюенту, посилює відділення еуфіліну та разом з ослабленням агресії соляної кислоти при розчинені сухої остачі значно підвищує ефективність рідинної хроматографії Співвідношення ацетонітрилу з водою (20 80), яке більш визначає безпосередні властивості елюенту, є найоптимальнішим, бо забезпечує найбільш вигідну полярність елюції для повноти розділення фракції при хроматографуванні, з меншою експозицією інгредієнтів Підвищення селективності хроматографічного розділення вмісту підтверджується покращенням показників ступеню екстракції та чутливості визначення еуфіліну в пробі (див таблицю) Отже, ВІДМІННОСТІ об'єкта що заявляється, є істотними, оскільки мають причинно-наслідковий зв'язок з технічним результатом Для визначення еуфіліну в рідині використовували хроматограф «Мілліхром-1», колонку з повернутонофазним сорбентом «Діасорб-130» (С16Т, D = 7mkm) або іншого типу, що забезпечує довжи ну хвилі 270нм і швидкість потоку 100мкл/хв, а також елюент, виготовлений у вигляді суміші ацетонітрилу з водою при співвідношенні масових частин 20 80, водний 2,4% розчин еуфіліну (ПО «Дарниця», Україна), хлорну кислоту 6% та екстрагент, виготовлений у вигляді суміші хлороформу з ізопропанолом при взаємному співвідношенні частин 95 5 Визначають вміст еуфіліну в рідині розчину наступним чином До водного розчину еуфіліну додають еквімолярну КІЛЬКІСТЬ 6% хлорної кислоти з подальшим перемішуванням компонентів До отриманої рідини додають екстрагент - суміш хлороформу з ізопропанолом, які беруть у співвідношенні 95 5, з подальшим екстрагуванням шляхом примусового струшування Піпеткою відокремлюють шар органічної рідини, а масу, що залишилася, фільтрують У подальшому відфільтрований екстракт випаровують насухо, а суху остачу обробляють 0,03Н розчином соляної кислоти, потім проводять хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою, взятих у співвідношенні 20 80 Для експериментального підтвердження технічного результату, що досягається способом, до 0,5мл розчину еуфіліну додавали 0,5мл хлорної кислоти та перемішували Надалі додавали 5мл екстрагенту, а саме хлороформ з ізопропанолом у співвідношенні 95 5 Екстракцію здійснювали протягом 25хв шляхом струшування, шар органічної рідини ВІДДІЛЯЛИ піпеткою, а аналізат піддавали фільтрації з подальшим промиванням фільтрувального паперу порцією 2мл хлороформу Відфільтрований екстракт насухо випаровували у скляних пробірках на роторному випарнику, а сухий залишок розчиняли в 200мкл 0,03Н соляної кислоти, після чого проводили хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрилу з водою, взятих у співвідношенні 20 80 Таким чином, шляхом оптимізацм підбору складових елюенту та умов перебігу супровідних реакцій доведена можливість перевершення технічного результату, що був відомий заявнику з рівня техніки Підвищення селективності рідинної хроматографії підтверджується покращенням чутливості та ступеню екстракції продукта за рахунок повного розділення інгредієнтів фракції при мінімальній експозиції Використання способу в науково-дослідних лабораторіях медичних або ХІМІЧНИХ підприємств допоможе підвищити вірогідність визначення шуканого агента, з можливістю високоточної оцінки імовірностей виникнення неадекватних явищ та проведення ВІДПОВІДНИХ корегувальних заходів Таблиця Порівняльний аналіз способів визначення вмісту еуфілін шляхом рідинної хроматографі Показники Чутливість визначення еуфіліну в пробі, нг/ мл Ступінь екстракції еуфіліну, од Заявлене рішення задачі Прототип 80 100 0,95 0,85 5 45278 6 Джерела інформації 3 http //ilch vsmu edu ua/hplc/drug/1-0002 htm 1 Машковский M Д Лекарственные средства Сайт совместной медикобиологическои лаборатоВ двух томах Т 1 Изд 10-е, стереотипное М рии Винницкого государственного университета «Медицина», 1987, с 457 им Н И Пирогова и Института поверхности НАН 2 Крамаренко ВФ Токсикологічна ХІМІЯ К Украины Теофиллин (Updated 10 09 2001) «Вища школа», 1989, 446с ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90