Спосіб доклінічної оцінки інтоксикації організму від впливу ксенобіотиків

Спосіб доклінічної оцінки інтоксикації організму від впливу ксенобіотиків, що здійснюють шляхом дослідження сироватки, який відрізняється тим, що проводять біохемілюмінесцентне і фосфоресцентне дослідження сироватки крові, метаболічну активність визначають по інтенсивності спалаху індукованої хемілюмінесценції та активації фосфоресценції в порівнянні з контрольними значеннями. (19) (21) u200907866 (22) 27.07.2009 (24) 25.12.2009 (46) 25.12.2009, Бюл.№ 24, 2009 р. (72) СІРЕНКО ОЛЕНА ВІТАЛІЇВНА, ЖУКОВ ВІКТОР ІВАНОВИЧ, КУЧЕРЕНКО ЕЛА ОЛЕКСІЇВНА (73) ХАРКІВСЬКА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ 3 46608 дії різноманітних шкідливих чинників або виникнення патології. Поставлена задача вирішується в способі доклінічної оцінки інтоксикації організму від впливу ксенобіотиків, який здійснюють шляхом дослідження сироватки крові, згідно з корисною моделлю, проводять біохемілюмінесцентне та фосфоресцентне дослідження сироватки крові, її метаболічну активність визначають по інтенсивності спалаху індукованої БХЛ, кінетиці реакції та інтенсифікації фосфоресценції зразку сироватки в порівнянні з контрольними значеннями. Відомо, що люмінесценцією називають процес, не пов'язаний з випромінюванням тепла, а заснований на спонтанному світінні біологічних об'єктів, обумовленому вільнорадикальним окисненням ліпідних і білкових компонентів тканин організму. До складу сироватки крові входять різні фракції білків, ліпідів, ферментів, мікроелементів, вміст кожного з котрих має значення для оцінки порушень гомеостатичної функції організму та діагностики донозологічних станів. Вплив ксенобіотиків здатний модулювати радіотоксичні ефекти, що призводять до змін метаболічної активності ліпопротеїдів сироватки. Реєстрація біохемілюмінесценції (БХЛ) та фосфоресценції (Ф) досліджуваного біологічного матеріалу є інтегративним способом, який дозволяє оцінити вплив шкідливого чинника саме на ліпідні та білкові компоненти сироватки, швидко отримати дані щодо активації процесів вільнорадикального окиснення (ВРО) та перекисного окиснення ліпідів (ПОЛ), які потенцюють розвиток вільнорадикальної патології та порушують співвідношення анаболічних і катаболічних процесів в організмі. Виконання дослідження займає мінімум часу, є простим, інформативним і може використовуватися на превентивних етапах діагностики великої кількості захворювань. Показники хемілюмінесценції та фосфоресценції сироватки крові при навантаженні ксенобіотиками або патології відрізняються від нормальних вірогідно підвищеними значеннями. Інтенсивність спонтанного світіння відображує специфіку біохімічних процесів та взаємодії компонентів сироватки крові. Спосіб виконують за допомогою люмінесцентного комплексу, який складається з фосфороскопу, ртутної лампи, що генерує світло оптичного діапазону та спектрофотометру (СФ-4). Визнача 4 ють зміни метаболічної активності сироватки крові груп населення, що протягом тривалого часу контактують зі шкідливими речовинами: гальмівними та охолоджуючими рідинами (ГР та ОР). У групи працівників виробництва вищезазначених органічних сумішей вранці натще беруть кров з локтевої вени, отримують сироватку крові. Зразки готують шляхом нанесення на покровне скло сироватки, після чого препарат висушують протягом 30 хвилин при 24°С, поміщують у фосфороскоп та проводять дослідження. Використовують спектри збудження ( - 297, 313, 334, 365, 404, 434) протягом 1млсек. Після збудження зразків біологічного матеріалу реєструють показники ФР. Контролем є зразки сироватки групи ІТР, які не контактують з органічними речовинами. Ступінь підвищення метаболічної активності сироватки визначають по інтенсивності світіння зразків на різних хвилях збудження. Інтенсифікація ФР виникає за рахунок наявності молекул білків та ліпопротеідів у триплетному стані, які висвітлюють фотони енергії при падінні збудження у відсутності світла оптичного діапазону. Реєстрація ФР проводилася на вимірювальному обладнанні, основою якою є фосфороскоп, який забезпечує розділення у часі процесів опромінювання зразка збуджуючим світлом та його ФР з обов'язковим забезпеченням абсолютного світлозахисту фотоприймальника від дифракції збуджуючого світла, чого можна досягнути, використовуючи люменометр, який забезпечує абсолютний світлозахист фотоелектронного множника. Для вимірювання ФР зразків на кварцеву пластину розміром 15×15мм наносили 50мкл сироватки, які висушували при 30°С у термостаті протягом 20хв до виникнення твердої плівки. Пластину з висушеною сироваткою помішували у фосфороскоп та виміряли її ФР. Джерелом збуджуючого світла була ртутна лампа ДРК-120 монохроматора ДМП-4, виділяли наступні лінії збудження: 297, 313, 334, 365, 404 і 434нм. Розмір вихідної щілини монохроматора складав 2мм, зона спектральної чутливості ФЕМ - 300-530нм. ФР реєстрували при кімнатній температурі у режимі підрахунку фотонів. Вимірювальним пристроєм був лічильник СБС2, усі процеси вимірювань автоматизовані, погрішність складала менше 3%. Таблиця 1 Динаміка фосфоресценції сироватки крові робітників виробництва Спектри збудження ( ) 297 313 334 365 404 434 Контроль (ІТР) 4248,6±68,7 3248,5±27,8 618,9±20,3 1889,5±39,4 459,7±17,9 609,6±14,8 ГР 4327,6±61,1 3612,8±42,5* 794,9±20,4* 2064,3±33,1* 638,4±18,5* 815,2±20,1* Примітка: різниця показників вірогідна, (р