Спосіб виготовлення вакцини інактивованої асоційованої проти респіраторних захворювань телят, спричинених умовно-патогенною мікрофлорою

Спосіб виготовлення вакцини інактивованої асоційованої проти респіраторних захворювань 3 52026 4 імуногенність через використання гідроксиду алютелят, спричинених умовно-патогенною мікрофломінію в якості ад'юванта. рою використовували епізоотичні штами бактерій з В основу корисної моделі поставлено задачу місцевих осередків, а саме: Е.соlі серовару O8 (№ розробити спосіб, який дозволив би отримати уні11), P.multocida серовару D (№ 3), S.pneumonia (№ версальний препарат на основі місцевих бактеріа22) та P.vulgaris (№ 5), які були ізольовані в твальних штамів для приготування інактивованої асоринницькому господарстві СТОВ «Степове» Слоційованої вакцини проти респіраторних в'яносербського району Луганської області від зазахворювань молодняку великої рогатої худоби, гиблих телят групи 0-2, які хворіли на респіраторні яка забезпечує більш тривалий та напружений захворювання. імунітет і більш специфічна для телят даного регіПриклад 2.Накопичення бактерійної маси умоону, таким чином вакцина діє більш ефективно. вно-патогенних бактерій. Застосування в якості ад'юванту дистильоваДля виготовлення вакцини, накопичення бакного гліцерину в 0,9% розчині натрію хлориду теріальної маси умовно-патогенних бактерій просприяє більш повільнішому визволенню антигенів водили на МПА з додаванням 10,0 % дріжджового з вакцини, а тривале стимулювання імунної систеаутолізату крові (ДАК) у 1,5 л матрацних колбах. ми призводить до виникнення більш стійкого імуніМатричні культури епізоотичних штамів Е. соlі тету. серовару O8 (№ 11), P.multocida серовару D (№ 3), Задача корисної моделі вирішується тим, що S.pneumonia (№ 22) та P.vulgaris (№ 5) вирощувадевіталізацію виробничих культур ешерихій, пасли у пробірках з 9,0см3 МПБ за температури терел, стрептококів та протеїв проводять за допо37,5±0,5°С на протязі 20,0±2,0 годин з розрахунку могою 0,3% водного розчину перекису водню та 1 пробірка на матрац з 250,0см3 щільним пожив0,1% водного розчину формальдегіду, з наступною ним середовищем. інкубацією одержаної суміші при 37,0-38,0°С проКультурами бактерій що виросли, засівали матягом 15 годин та додавання до корпускулярних траци, які після висіву витримували агаром вниз інактивованих антигенів ад'юванту на основі гліцепри кімнатній температурі 20-30 хвилин, а потім рину (20% від об'єму антигену). перевертали агаром догори, розташовували в Спосіб виконується таким чином: термостаті і вирощували за температури 1) Проводять бактеріологічні дослідження біо37,5±0,5°С впродовж 18-22 годин в залежності від логічного матеріалу від загиблих телят з ознаками накопичення біомаси. респіраторних або респіраторно-кишкових ураПісля візуальної перевірки чистоти росту кульжень для виділення збудників захворювання; тур, робили мазки, які фіксували над полум'ям 2) 3 метою ідентифікації та визначення біолоспиртівки і фарбували за Грамом. Суспензії бактегічних властивостей досліджують ізольовані кульрій були типовими до штамів Е. соlі серовару O8 тури умовно патогенних бактерій і виявляють у них (№ 11), P.multocida серовару D (№ 3), S.pneumonia ознаки патогенності (визначення ЛД50 в тесті лета(№ 22) та P.vulgaris (№ 5) і не мали домішок стольності для білих мишей); ронніх бактерій. 3) На підставі одержаних даних проводять відЗ матраців зливали конденсат і в кожну матбір і селекцію мікроорганізмів із високим патогенрацну колбу наливали по 15,0-20,0 см3 стерильноним потенціалом; го фосфатно-буферного фізіологічного розчину. 4) Проводять культивування відібраних мікроБіомасу бактерій змивали коливанням матрацу. організмів з метою накопичення біомаси; Суспензії умовно-патогенних мікроорганізмів 5) Виготовляють корпускулярний антиген, який стандартизували шляхом вимірювання об'єму і інактивують за допомогою 0,3 % розчину перекису визначення кількості мікробних клітин, яку прововодню та 0,1 % водного розчину формальдегіду дили за стандартом каламутності ДНКІБШМ при експозиції 15 годин; (1,0˙109 мікробних клітин в 1 см3). Встановлювали 6) Вносять до корпускулярного інактивованого концентрацію 12˙109 мікробних клітин шляхом доантигену ад'ювант (дистильований гліцерин в 0,9% давання стерильного фосфатно-буферного фізіорозчині натрію хлориду); логічного розчину. 7) Складають серію вакцини, фасують, укупоПриклад 3. Виготовлення корпускулярного анрюють, закатують, етикетують; тигену. 8) Проводять контроль вакцини; В отриману стандартизовану мікробну завись 9) Забезпечують пакування, транспортування, штамів E. coli серовару O8 (№ 11), P.multocida сезберігання готового препарату. ровару D (№ 3), S.pneumonia (№ 22) та P.vulgaris Порівняльний аналіз з відомими технічними (№ 5) додавали інактиватори (32,3-32,6% розчин рішеннями в галузі ветеринарної мікробіології та перекису водню та 38,0 % розчину формальдегіду, біотехнології дозволяє зробити висновок, що в для одержання кінцевої їх концентрації відповідно основі виготовлення вакцини інактивованої асоціу 0,3 % та 0,1 %). Після чого витримували впройованої проти респіраторних захворювань телят довж 15,0 годин за температури 37,5±0,5°С для використовується ад'ювант на основі дистильоваповної девіталізації. ного гліцерину в 0,9% розчині натрію хлориду, що Проводили об'єднання антигенних препаратів, відповідає критеріям «новизна» та «суттєві ознавиготовлених з виробничих штамів E. coli серовару ки». O8 (№11), P.multocida серовару D (№ 3), Приклад 1. Виробничі штами умовноS.pneumonia (№ 22) та P.vulgaris (№ 5) у співвідпатогенних бактерій. ношенні 0,57:1,0:1,0:0,35, після чого вимірювали З метою виготовлення вакцини інактивованої концентрацію мікробних тіл в одержаній бактеріаасоційованої проти респіраторних захворювань льній масі, суспензію бактерій доводили фосфат 5 52026 6 но-буферним розчином до густоти P.vulgaris (№ 5) у дозі 4 ЛД50 в 0,5 см3. За піддос12,0млрд.м.к./см3. До корпускулярних антигенів лідними тваринами вели спостереження протягом додавали при постійному перемішуванні дисти10 діб, обліковуючи випадки загибелі тварин. Вакльований гліцерин в розчині 0,9% натрію хлориду цина інактивована асоційована проти респіратор(20% від об'єму антигену). Конструювання вакцини них захворювань телят, забезпечувала захист 3 проводили з таким розрахунком, щоб в 1,0см го100,0 % щеплених мишей (при 100,0 % летальностового імунологічного біопрепарату містилося ті у мишей контрольних груп). 10˙109 мікробних клітин. Імуногенну активність вакцини потрібно також Приклад 4. Контроль вакцини. досліджувати додатково на цільових видах тварин Стерильність і повноту інактивації вакцини ін(телятах). активованої асоційованої проти респіраторних Антигенність серії вакцини перевіряли на 40 захворювань телят, спричинених умовно патогенбілих мишах: 20-ти піддослідним тваринам вакциною мікрофлорою визначали за ДСТУ 4483. Вакну вводили підшкірно дворазово з інтервалом 14 цина була стерильною. діб у дозі 0,5см3. Інших 20 мишей, які залишили, не Нешкідливість вакцини визначали за ГСТУ вакцинували. Через 14 діб після другого введення 46.024-2002. Виготовлений препарат був нешкідвакцини у мишей відбирали кров і проводили посливим. тановку реакції аглютинації з антигеном (об'єднані Залишкову кількість перекису водню в вакцині інактивовані суспензії бактерій без додавання визначали перманганатметричним способом, конад'юванту). Серію вакцини вважали антигенною, центрація якого в готовому препараті не перевиякщо у щеплених тварин виявляли рівень антитіл щувала 0,1%. в титрі не нижчі 4,5 log2. Залишкову кількість формальдегіду в вакцині Реактогенну властивість серії вакцини перевівизначали за кількістю формальдегіду в досліджуряли на 20 телятах віком 0-2 місяців. Піддослідним ваній пробі, концентрація якого в готовому препатваринам вакцину вводили підшкірно (в області раті не перевищувала 0,1%. шиї) у дозі 2,0см3. Протягом трьох днів враховуваІмуногенність серії вакцини перевіряли на 80 ли температурну реакцію, загальний стан та місбілих мишах. Вакцину вводили 40-м мишам підшцеву реакцію у піддослідних тварин. Наявність кірно дворазово з інтервалом 14 діб у дозі 0,5см3. підвищення температури в момент огляду від Інших 40 мишей (контрольна група), які залиши40,0° до 40,5°С розцінювали як слабку, підйом лись, не вакцинували. температури від 40,6° до 41,1°С - середню, від Через 14 діб після другого введення вакцини 41,2°С і вище - сильну загальну реакцію. Гіперемія всіх щеплених мишей розділяли на 4 групи по 10 шкіри без інфільтрату на місці введення і запальголів у кожній групі, тварин відповідно заражали ний інфільтрат діаметром до 2,0см розцінювали як внутрішньочеревно добовими бульйонними кульслабку, інфільтрат діаметром від 2,1 до 5,0 см інтурами контрольних штамів E.coli серовару О8 терпретували як середню, інфільтрат більше ніж (№11), P.multocida серовару D (№ 3), S.pneumonia 5,1 см в діаметрі або наявність лімфаденіту і лім(№ 22) та P.vulgaris (№ 5) у дозі 4 ЛД50 в 0,5 см3. фангіту вважали за сильну місцеву реакцію. Серію Не щеплених мишей (контрольні) також роздівакцини вважали малореактогеною, якщо середні ляли на 4 групи по 10 тварин в кожній і заражали температурні реакції були знайдені не більш ніж в інтраперітоніально культурами контрольних шта7,0 % або тільки середні температурні й місцеві мів, а саме: E. coli серовару О8 (№ 11), P.multocida реакції виявлялися не більше ніж в 12,0 % випадсеровару D (№ 3), S.pneumonia (№ 22) та ків. Прояву сильних реакцій не повинно бути. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601