Спосіб розділення ембріонів

Спосіб розділення ембріонів, при здійсненні якого використовують камеру з рідиною та розміщену в ній зубчату або пилчасту електродну сітки, при цьому при застосуванні клітинного діелектрофорезу клітини розділяють на живі та мертві і 3 довищі, а інших клітин - меншою. В залежності від поляризації при взаємодії з полем виникає результуюча сила, яка штовхає більш поляризовані клітини в сторону більшої напруженості поля, а менш поляризовані клітини притягуються до іншого електрода [3, 4]. Однак, застосування найближчого аналога пов'язане з неможливістю використання наведених сіток в зв'язку з малими розмірами комірок у цих сітках, де шаг сітки дорівнює х=1-100 мкм. Наприклад, розміри ембріонів великої рогатої худоби, мають діаметр 140÷220 мкм, в залежності від стадії розвитку, що не відповідає наведеним розмірам шагу комірок сітки. Розділення клітин на якісні та неякісні відбувається за рахунок промивання сітки після дії електромагнітного поля, що потребує достатньо тривалого часу, а також не дає змоги повного розділення клітин, оскільки вони дуже близько розташовані одна до одної в разі використання таких сіток. В основу корисної моделі поставлено задачу створення способу підвищення якості розділення ембріонів на якісні та неякісні шляхом використання камери спеціальної конструкції з застосуванням замість сітки одного плоского і одного голчастого електродів, та вимивання ембріонів після дії діелектрофорезу по різних каналах, вздовж двох електродів, де розташовуються різні по якості ембріони, що не дає змоги для їх змішування за рахунок перегородки і отримання з одного каналу якісних, а з іншого -неякісних ембріонів. Такого технічного рішення можна досягти, якщо у спосіб розділення клітин з застосуванням сітки з зубчатими або пилчастими електродними сітками і використанням подачі різних потенціалів на електроди, та промиванням сітки, згідно з корисною моделлю, застосовано камеру з культуральною рідиною, в якій підтримується температура для забезпечення життєздатності ембріонів, яка має два типи електродів плоский і голчастий, що розташовані в ній по різні боки вздовж всієї довжини стінки камери, а розподіл на якісні та неякісні відбувається під дією електромагнітного поля, яке виникає між цими електродами, процес отримання якісних ембріонів здійснюється після відключення живлення шляхом створення тиску в каналі, який утворюється за рахунок скляної перегородки, розміщеної посередині камери між електродами. Сутність корисної моделі пояснюється кресленням, де показано: Фіг. 1 - пристрій для реалізації послідовності способу; Фіг. 2 - зовнішній вигляд камери з накритою кришкою для створення тиску в каналах. Пристрій для реалізації послідовності операцій способу складається із скляної камери 1, камера встановлена на термостолику 2, з внутрішньої сторони, вздовж протилежних стінок камери, розміщені електроди: з однієї - голчастий 3, з протилежної - плоский 4, до яких від блока живлення 5 підведена напруга: «-» та «+», відповідно. Камера 1 накривається скляною кришкою 6, з перегородкою 7 посередині вздовж всієї кришки на глибину камери, що розділяє її два канали 8 і 9. В кришці 6 є два отвори 10, 11 по різні боки від перегородки 7, 61780 4 та на протилежних від трубок 13, та 14 кінцях кришки 6, в ці отвори послідовно встановлено шприц 12 з культуральною рідиною, на виході з каналів 8, 9 знаходяться трубки 13, 14, з кранами 15, 16, які вставлені в стакан 17 з культуральною рідиною, та стакан 18 для збору неякісних ембріонів. Спосіб реалізовано наступним чином. Отримані від донора ембріони (наприклад, великої рогатої худоби) розміщуються в скляній камері 1 з культуральною рідиною, в якій за допомогою термостолика 2 підтримується температура така, як у тілі тварин, для забезпечення їх життєздатності (+38°С). На електроди 3, 4 подається напруга відповідного знаку від блока живлення 5. Під дією електромагнітного поля виникає клітинний діелектрофорез і ембріони, які знаходяться в камері, переміщуються до відповідних електродів: неякісні - до електрода 3, якісні - до електрода 4. Після розподілу ембріонів вздовж електродів, камера 1 накривається кришкою 6, з перегородкою 7, таким чином за її допомогою створюються два канали 8, 9. Далі напруга з блока живлення 5 відключається, після чого в отвори 10, 11 послідовно вставляється шприц 12 наповнений культуральною рідиною і відкриваються крани 15, 16, під дією тиску, створеного шприцом, ембріони через трубки 13, 14, які підключені до каналів 9 та 8, відповідно, потрапляють в стакани 17, 18: якісні - до стакана 17 з культуральною рідиною, неякісні - до стакана 18 для відбраковування. Позитивним технічним результатом є те, що спосіб дозволяє зменшити можливість отримання неякісних ембріонів разом з якісними, створити простішу конструкцію камери для реалізації діелектрофорезу та скоротити час для розділення клітин шляхом швидкого вимивання якісних ембріонів під дією тиску. Запропонований спосіб забезпечує просту конструкцію камери, високий відсоток розподілу ембріонів на якісні та неякісні, без додаткового механічного втручання, за рахунок створення тиску в каналах якісні ембріони в короткий термін часу готові для подальшого використання в біотехнологічному процесі трансплантації ембріонів для підсадки тваринам-реципієнтам. Джерела інформації: 1. Кауффельд П, Тамм Н., Шихов И.Я. и др. Оценка качества эмбрионов крупного рогатого скота. - М.: Агропромиздат, 1990. - 56 с. 2. Пат. 51322А Україна, МПК А 61 Д 19/02. Спосіб визначення життєздатності ембріонів / Зубець М.В., Мегель Ю.Є., Рибалка А.І.; замовник та власник Харк. держ. техн. ун-т сільськ. госп. - № 2002021454; заявл. 21.02.2002; опубл. 15.11.2002. Бюл. № 11. 3. Делахей П. Двойной слой и кинетика электронных процессов / Пер. с англ.; под ред. акад. А.Н. Фрумкина. - М., Наука, 1967. - 351 с. 4. Н. Li, Y.Zheng, D. Akin, R. Bashir. Characterizion and Modeleng of a Microfluidenc Dielectrophoresis Filter for Biological Species // Journal of microelectromechanical sustem. - Vol. 14, № 1. - 2005. - P. 103-112. 5 Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 61780 6 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601