Спосіб створення стійких проти альтернаріозу вихідних селекційних форм томата

Спосіб створення стійких проти альтернаріозу вихідних селекційних форм томата, що включає вирощування рослин in vitro на рівні культури тка 3 на вважати об'єктивними без подальшої перевірки рівня їх стійкості на рівні рослин, що вегетують в польових умовах. Метою пропонуємого способу є створення стійких проти альтернаріозу вихідних селекційних форм томата шляхом дворазового добору стійких генотипів в культурі ізольованих тканин in vitro та одноразового - в умовах інфекційного фону, створеного у весняних плівкових теплицях. Спосіб, що пропонується, здійснюється наступним чином: 1. Насіння томату вихідних форм вводять у стерильну культуру та культивують на безгормональному середовищі до одержання проростків. Культивування проводять при освітленні 2000 лк та температурі 23-25°С. 2. Сім'ядольні листки 7-10-денних проростків висаджують на індукційне селективне живильне середовище МС з гормональними добавками ІОцК (2 мг/л) і БАЛ (5 мг/л). В якості селективного агенту добору стійких генотипів до цього середовища додають 40-відсотковий культуральний фільтрат A. solani. Культивування проводять з 16-годинним фотоперіодом та інтенсивністю освітлення 2000 лк, за температурою від 23°С до 25°С протягом 3045 діб. 3. Органогенні експлантати томату культивують протягом 1 місяця на безгормональному середовищі МС, після чого повторно висаджують на селективне середовище підготовлене відповідно п.2. 4. Життєздатні регенеранти, які пройшли дворазовий добір на селективному середовищі, відокремлюють і висаджують по одному у пробірки з рідким безгормональним середовищем та половинним набором мінеральних складових за прописом МС для дорощування, укорінення і розмноження, у разі необхідності, мікроживцюванням in vitro. 5. Пробіркові рослини висотою 50-70 мм з добре розвиненою кореневою системою адаптують 62592 4 до нестерильних умов згідно «Методики» [6]. 6. Дібрані в умовах in vitro та адаптовані до нестерильних умов рослини висаджують у весняну плівкову теплицю для подальшої інокуляції міцеліально-споровою суспензією Alternaria solani Sorauer в період цвітіння - початку плодоношення. Розвиток хвороби регулюють поливами, які проводять у вечірні часи. Облік ураження альтернаріозом проводять через 7 днів після інокуляції, повторюючи через кожні 10 днів за шкалою: 0 - ураження відсутнє; 0,1 - уражено до 5 % поверхні рослин; 1,0 - уражено до 25 % поверхні рослин; 2,0 - уражено до 50 % поверхні рослин; 3,0 - уражено від 50 до 75 % поверхні рослин; 4,0 - уражено від 75 до 100 % поверхні рослин. Із зразків, бал ураження рослин яких не перевищує 2,0, проводять індивідуальні добори насіння для подальшого використання в селекційногенетичних дослідженнях. Приклад. В таблиці наведено дані щодо виявлення ефективності отримання стійкого проти альтернаріозу вихідного селекційного матеріалу томата шляхом цілеспрямованого багаторазового індивідуального добору стійких генотипів в культурах in vitro та in vivo. Добір стійких проти A. solani генотипів проводили з мікроклону сприйнятливого зразка МК - 1/5 андрогенного походження покоління Р2 який мав ряд цінних господарських ознак (вміст біохімічних речовин, форма плоду, ранньостиглість), за наступними варіантами: - добір експлантатів в культурі тканин in vitro на фоні селективної дії фіто токсинів A. Solani; - добір експлантатів в культурі тканин із подальшим добором стійких рослин-регенератнів на фоні селективної дії A. Solani (варіант 2); - добір у весняній плівковій теплиці пробіркових рослин після інокуляції міцеліально-споровою суспензією Alternaria solani Sorauer в період цвітіння - початку плодоношення (варіант 3). Контроль без добору Варіант 1 Варіант 2 В Шифр проШифр проШифр проШифр проІнтенсивність Бал ураІнтенсивність Бал ураІнтенсивність Бал ураІнт біркової біркової біркової біркової ураження, % ження ураження, % ження ураження, % ження ур рослини рослини рослини рослини 4п188 63,7 3 4п188 42,2 2 4п188 31,2 2 4п188 4п191 79,2 4 4п191 52,2 3 4п191 31,0 2 4п191 4п193 83,9 4 4п193 50,0 3 4п193 33,8 2 4п193 Пропонуємий спосіб завдяки своїй швидкості і об'єктивності дозволяє за рік провести добори альтернаріозостійкого вихідного матеріалу. Крім того, цей спосіб дозволяє зберігати цінний селекційний матеріал, отримувати з нього насіння і відповідно, сприяє прискоренню процесу добору альтернаріозостійких генотипів томатів в культурах in vitro та in vivo. Результати досліджень свідчать про те, що при запропонованому способі за рахунок застосування багатоступінчастого добору імунних форм як в умовах in vitro так і в умовах жорсткого природного інфекційного фону можна за 1 рік дослі джень виділити імунні форми і одержати з них насіння. Список посилань: 1. Пат. 18079 Україна, МПК А01Н 1/04. Спосіб селекції злакових культур на стійкість до збудників хвороб / Клачковська О.А., Ігнатова C.O., Замбриборщ І.С., Усиченко Н.О.; заявник та патентовласник Селекційно-генетичний ін-т УААН. № 93006640; заявл. 03.06.93; опубл. 31.10.97, Бюл. № 5. 2. Глеба Ю.Ю. Клеточная инженерия растений. / Ю.Ю. Глеба, К.М. Сытник. - К.: Наукова думка, 1984. - 160 с. 5 3. Родева В., Станчева Й. Използване на токсични метаболити от фитопатогени в in vitro ceлекцията за устойчивост при растенията / В. Родева, Й. Станчева // Растениевъдни науки. София (Болгария): Национален центр за аграрии науки. - 2003. - Т. 40. - с. 204-209. 4. Патент 27861 Україна, МПК А01Н 1/04. спосіб оцінки і добору генотипів томата на стійкість проти альтернаріозу/ Черненко К.М., Черненко В.Л.; заявник та патентовласник Інститут овочівництва і баштанництва УААН. - № 20041109484; Комп’ютерна верстка А. Крулевський 62592 6 заявл. 19.11.2004; опубл. 26. 11.2007, Бюл. №. 5. Бавол Л.В., Дубровна О.В., Лялько І.І. Цитогенетичний та молекулярно-генетичний аналіз клітинних ліній м'якої пшениці, стійких до культурального фільтрату G.graminis var. Tritici /V Міжнародна конференція «Геном рослин». - Одеса, 2008. - с. 45-48. 9. Мірошниченко В.П., Сергієнко О.Ф., Івченко Т.В. та ін. Методика досліджень в культурі ізольованих тканин овочевих рослин. - Мерефа, 2004. 26 с. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601