Препарат для лікування та профілактики атерогенних дисліпопротеїнемій та синдрому гіперкоагуляції

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства лечения и профилактики атерогенных дислипопротеинемий и состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови (синдром гиперкоагуляции). Наиболее близким к предлагаемому решению по достигаемому результату является препарат для лечения и профилактики атерогенных дислипопротеинемий и состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови, содержащий комплекс ЭПК и ДГК, комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот C12C22, а также токоферол. Описанное вещество носит название "МАКСЕПА". Комплекс ЭПК и ДГК в нем содержит 21,5...35вес.%, а токоферола - 1вес.%. В МАКСЕПЕ, кроме того, имеются комплексы других жирных кислот: ненасыщенных C18, моно-ди-, три-тетроеновых C20, C22, C16, насыщенных C14, C18, C20 - веществ присутствие которых в МАКСЕПЕ, как в лечебном и профилактическом средстве, не требуется, но удаление которых из смеси чрезвычайно затруднительно технологически. Приведенная смесь используется для лечения и профилактики дислипидемических состояний и синдрома геперкоагуляции. Однако смесь недостаточно эффективна при лечении и профилактике дислипопротеинемий и нарушений свертывающей способности крови, из-за невозможности быстрого достижения оптимальных концентраций ЭПК и ДГК в крови. Это происходит вследствие дозозависимого эффекта вещества, в связи с чем недостаточно высокая концентрация ЭПК и ДГК в препарате либо не вызывает запуска каскада биосинтеза вазодилатирующих простагландинов и лейкотриенов с низкой тромбогенной активностью, либо требует длительного приема вещества (до года) и в достаточно больших дозах (до 92г/день), что приводит к потреблению 570 - 1130Кдж/день - т.е. 11кг жировой ткани в год. В основу изобретения поставлена задача создания такого препарата для лечения атерогенных дислипопротеинемий и состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови, который позволил бы сократить сроки лечения, повысить эффективность лечебно-профилактического действия состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови и снизить количество случаев появлений побочных эффектов. Поставленная задача решается путем достижения в крови такой концентраций ЭПК и ДГК, при которой становится возможным запуск конкурентного взаимодействия с арахидоновой кислотой и заменой ее в каскаде биосинтеза простагландинов, преимущественно, вазодилатирующих классов и лейкотриенов с низкой тромбогенной активностью, что обеспечит достижение терапевтического эффекта в течение 12...18 дней. Предлагаемый препарат, как и известный, содержит комплекс эйкозопентаеновой и докозогексаеновой (ЭПК и ДГК) кислот, комплекс насыщенных в ненасыщенных жирных кислот C12-C22 и токоферол а, согласно изобретению, указанные вещества находятся в смеси в следующем соотношении, вес.%: комплекса ЭПК и ДГК 42,8...93 токоферола 1,0 комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот C12-C22 остальное. Содержание в комплексе ЭПК и ДГК распределено примерно поровну. Так, в препарате ЭПК составляет 27...42вес.%, а ДГК - 23...56вес.%. Экспериментально установлено оптимальное количество комплекса ЭПК и ДГК в препарате. Так, при содержании комплекса ЭПК и ДГК в препарате менее 42,8% его эффективность в качестве лечебного и профилактического средства для воздействия на уровень атерогенных липопротеинемий и синдром гиперкоагуляции оказывается недостаточной - положительный эффект наступает при длительном (до года) употреблении препарата, сопровождается появлением таких побочных эффектов как диспепсические расстройства, обострения хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, что обусловлено недостаточной заменой арахидоновой кислоты в фосфолипидах клеточных мембран на ЭПК и ДГК. Увеличение содержания комплекса ЭПК и ДГК свыше 93вес.% не имеет смысла ввиду достаточного клинического эффекта при указанных концентрациях и значительными технологическими трудностями и экономическими затратами при более высокой степени очистки. Для получения препарата использовали липиды из измельченных цельных объектов полученных разными способами: механическим, вытапливанием при температуре не ниже 45°C, замораживанием или экстрацией органическими растворителями. В колбу, снабженную обратным холодильником, загружают едкий натр 506,7г, жира 700,0г, водноспиртового раствора едкого кали (250г едкого кали, 250мл воды, 250г этанола) и при перемешивании доводят температуру смеси до 80°C на водяной бане. Гидролиз проводят при указанной температуре в течение 1чпри перемешивании. Избыток спирта отгоняют, остальную массу охлаждают до 30°C, нейтрализуют 50% раствором серной кислоты и подкисляют тем же раствором до pH 1,0. Затем температуру увеличивают до образования прозрачного слоя жирных кислот (примерно до 80°C), которые отделяют от водного слоя в количестве 499,1г. К указанному количеству жирных кислот добавляют двойной объем этанола, смесь этанола (90мл) концентрированной серной кислоты (90мл). Этерификацию осуществляют при 80°C в течение 2,5 часов при перемешивании. Избыток спирта отгоняют в вакууме 0,3 0,6ати, этиловые эфиры жирных кислот экстрагируют петролейным эфиром, отмывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия до нейтральной реакции, высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель в вакууме. Содержание этиловых эфиров жирных кислот определяли методом капилярной газовой хроматографии. После чего в смесь вводили 1% (вес.%) токоферола в качестве антиоксиданта. В соответствии с описанным технологическим процессом было получено несколько образцов препарата, содержащих различные концентрации комплекса ЭПК и ДГК; при этом содержание других ненасыщенных жирных кислот соответственно уменьшалось, насыщенные ликвидировались по мере повышения концентрации ненасыщенных жирных кислот, количество токоферола во всех смесях было идентичным. Пример 1: содержание этерифицированной ЭПК - 7,1%, ДГК - 4,8%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: эфиров насыщенных жирных кислот - 18,1%, эфиров остальных ненасыщенных жирных кислот - 69%, токоферола - 1%. Количество комплекса ЭПК и ДГК - 11,9%. Пример 2: содержание этерифицированной ЭПК - 19,7%, ДГК - 15,3%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: насыщенных жирных кислот - 11,8%, остальных жирных ненасыщенных кислот 52,2%; токоферола - 1%. Количество комплекса ЭПК и ДГК - 35%. Пример 3: содержание ЭПК - 23,7%, ДГК - 19,1%, насыщенных жирных кислот - 2,4%, ненасыщенных жирных кислот - 46,2%, токоферола - 1%. Комплекса ЭПК и ДГК - 42,8%. Пример 4: содержание ЭПК - 26%, ДГК - 27,9%, насыщенные жирные кислоты отсутствуют, остальные ненасыщенные жирные кислоты - 45,1%. Комплекса ЭПК и ДГК - 53,9%. Пример 5: содержание ЭПК - 35,0%, ДГК - 58,0%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: насыщенные жирные кислоты отсутствуют, остальные ненасыщенные жирные кислоты - 5,1%, токоферол - 1%. Комплекса ЭПК и ДГК - 93,0%. Для изучения действия препарата, воздействующего на уровень атерогенных липопротеинемий в свертывающую систему крови и выбора состава с оптимальной концентрацией комплекса ЭПК и ДГК была проведена серия экспериментов. С этой целью было использовано 48 кроликов - самцов шиншилла с исходной массой тела 1,4 ± 0,3кг. Всем животным в течение 96 дней вводили перорально холестерин из расчета 0,25г/кг массы тела. Все животные содержались в одинаковых условиях и на идентичной диете. Через 96 дней атерогенной диеты все 48 животных были разделены на 6 групп по 8 кроликов в каждой с сопоставимой массой тела животных во всех группах - 2,84 - 3,10кг. 1 - я группа представляла собою контроль за уровнем спонтанной регрессии холестеринамии, остальным пяти группам кроликов прибавлялось введение одинаковой дозы смесей жирных кислот, содержащих различные концентрации комплекса ЭПК и ДГК. Так, смесь №1 была применена во второй группе, смесь №1 - в третьей, смесь №3 в четвертой, смесь №4 - в пятой, и смесь №5 - шестой группе. В период лечения кролики всех групп находились на идентичной традиционной диете. Исследуемые параметры определяли перед началом введения и через 2 недели после начала введения изучаемого препарата. Изучали в сыворотке крови, взятой из ушной вены, содержание общего холестерина (ХС), фосфолипидов (ФЛ), липопротеиды низкой плотности, (ЛППД), липопротеины высокой плотности (ЛПВП). Также определяли время свертываемости и кровотечения по Бюрккеру (ВС) количество тромбоцитов (Тр) в мазке, окрашенном по Романовскому (по соотношению с эритроцитами) агрегацию тромбоцитов (АТр). Результаты исследований сведены в таблицу. Как видно из представленной таблицы, все показали, исходно во всех группах были сопоставимы, и изменились в контрольной группе в динамике лишь по уровню регрессии холестерина (аналогичная депрессия этого показателя отмечалась и в ряде других групп (в четвертой группе (ЭПК + ДГК - 42,8вес.%) отмечались также достоверные по сравнению с исходным уровнем изменения количества фосфолипидов, и липопротеинов низкой плотности. И лишь в группах, принимающих лечение препаратом с комплексом (суммарным количеством) ЭПК и ДГК более 42,8вес.%, определялись достоверные сдвиги не только по сравнению с исходным уровнем изучаемых показателей, но и по сравнению с уровнем регрессии их а контроле. Немаловажна также появляющаяся в 5 - й, группе тенденция и достоверное повышение в 6 - й группе содержания липопротеинов высокой плотности, препятствующих развитию атеросклеротического процесса. Таким образом, в результате использования препарата с комплексом ЭПК и ДГК более 42,8вес.%, отмечается достоверное и быстрое (в течение двух недель) снижение атерогенных факторов (холестерина, фосфолипидов, липопротеинов низкой плотности), повышение уровня антиатеросклеротических веществ (липопротеинов высокой свертываемости, уменьшение количества тромбоцитов, уровня тромбагрегации). Было проведено изучение острой и хронической токсичности нового лекарственного препарата, нормализующего свертываемость крови и липидный обмен. В результате испытания препарата при остром воздействии в дозах 1; 1,5; 2; 4; 5; 6г на кг массы животных, при субхроническом - 0,1; 0,5; 2г/кг, при хроническом воздействии (до 4 - х месяцев) 0,04; 0,08; 0,5; 0,8г/кг на белых мышах, крысах, морских свинках, кроликах и кошках, было выявлено, что препарат малотоксичен, летальная доза не была достигнута даже при использовании доз в 40 - 60 раз превышающих предполагаемую терапевтическую. Кумулятивными свойствами препарат не обладает.