Спосіб стимуляції імунітету у тварин

1. Спосіб стимуляції імунітету у тварин, що включає введення тварині вакцинного препарату, який відрізняється тим, що одночасно з введенням вакцинного препарату вводять бактеріальний ліпополісахарид "Альвеозан". 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що бактеріальний ліпополісахарид "Альвеозан" вводять з розрахунку 5-10 мкг на 1 кг живої ваги тварини. Корисна модель відноситься до ветеринарної імунології, зокрема до способів стимуляції поствакцинального імунітету тварин. Найближчим до способу, що заявляється, і вибраному нами як прототип, є спосіб створення імунітету у тварин за допомогою вакцин у вигляді профілактичних щеплень проти різних хвороб, [кн. Основі мікробіології, вірусології та імунології, В.А Люта, Г.І. Заговора, Київ, "Здоров'я", 2001, с 105]. Недоліком цього способу є слабка ефективність вироблення поствакцинального імунітету, обумовлена проведенням імунізації тварин на фоні зниження захисних сил імунної системи, викликаної стресовими чинниками, порушеннями білкового, мінерального обмінів, несприятливою екологічною обстановкою, недоліками годування і змісту. У основу корисної моделі поставлена задача створення способу стимуляції імунітету, в якому, шляхом введення одночасно з вакцинним препаратом проти певної хвороби неспецифічного стимулятора імунної системи одержаного з спороутворюючих грампозитивних бактерій аеробів, досягається підвищення вироблення поствакцинального імунітету. Поставлене завдання досягається тим, що в способі стимуляції імунітету у тварин, що містить введення тварині вакцинного препарату, згідно корисної моделі, одночасно з введенням вакцинного препарату вводять бактеріальний ліпополісахарид "Альвеозан". "Альвеозан" можуть вводити з розрахунку 5Юмкг на 1 кг живої ваги тварині. Використовуваний засіб Альвеозан для стимуляції поствакцинального імунітету одержують з бактерій - Bac.alvei BKM 724. Препарат не володіє алергенними, токсичними властивостями, але в той же час активізує біосинтез іммуноглобулінів і, особливо В-систему лімфоцитів, фагоцитарну активність нейтрофілів, збільшує титр інтерферону, підвищує активність лізоциму і бактерицидну активність сироватки крові. Мікроорганізм Bacillus alvei BKM 724 є одним із збудників європейського гнильця бджіл, унаслідок чого вірогідність контакту з організмом теплокровних практично виключена, імунна система тварин не схильна до сенсибілізації антигенами вказаного мікроорганізму і ліпополісахарид, одержаний з нього, володіє низькою реактогенністю. Ін'єкція тварин бактерійним ліпополісахаридом (Альвеозан) одночасно з вакциною дозволяє активізувати біосинтез специфічних антитіл, підвищує рівень і активність Т- і В системи лімфоцитів, фагоцитарну активність нейтрофілів гуморальних чинників неспецифічного захисту. Бактеріальний ліпополісахарид виділений і штаму грампозитивної бактерії Bacillus alvei BKM 724 одержують шляхом термогідролізу 1%-ним розчином гідроокису натрію при 97-100°С протягом 60 хвилин. Після центрифугування і видалення твердої фази з надосадкової рідини бактерійний ліпополісахарид осаджують етиловим спиртом або ацетоном з розрахунку 1:4 (на 1 частину розчину ліпополісахариду 4 частини спирту або ацетону) або зміною рН середовища до 3,0-4,0 за допомогою 1%-ного розчину соляної кислоти. Одержану суміш залишають при +2+4 на 24 години, після чого осад ліпополісахариду відділяють від розчину, відмивають етиловим ефіром і висушують. Приклад. Для активізації імунної відповіді після вакцинації проти сказу використаний препарат «Альвеозан». Досліди проводилися на безпородних щенятах на базі віварію Державної Сумської біологічної фабрики. Для цієї мети було сформовано 3 групи щенят у віці 3-4 місяці живою масою 5-6кг по 5-8 голів в групі. Вивчалася імунна відповідь організму щенят на введення інактивованої культуральної вакцини проти сказу зі штаму «Щелково-51» з одночасним введениям препарату «Альвеозан». Щенятам піддослідної групи №1 вводилася вакцина проти сказу в дозі 1мл двократно з інтервалом в 20 днів. Щенятам піддослідної групи №2 вводилася вакцина проти сказу двократно з інтервалом в 20 днів з одночасним введенням «Альвеозана» в дозі 7мкг/кг живої маси. Щенята З піддослідної групи були контрольними. Для дослідження у щеня і брали кров до імунізації, через 4, 11, 21, 28, 42 і 65 днів від початку імунізації. У крові визначали титр антитіл до вірусу сказу в РН. Крім того, за клінічним станом тварин проводилося спостереження. У табл. 1 представлені результати 10116 імунологічної перебудови організму тварин після введення ним препарату «Альвеозан» в різних дозах. Результати таблиці показують, що оптимальною дозою для ін'єкцій є 5-7мкг/кг маси, оскільки нижчі дози не викликають помітних змін в імунній системі, а вищі викликають таку ж у відповідь реакцію, як і доза 5мкг/кг маси. У табл. 2 представлені результати динаміки антирабічних антитіл після імунізації одночасно з імуностимулятором «Альвеозан». Представлені в таблиці дані свідчать про істотну активізацію поствакцинальних антитіл у щенят, імунізованих одночасно вакциною і імуностимулятором препаратом «Альвеозан». Титр антитіл у щенят, що одержували препарат «Альвеозан» з вакциною на 35 день був вищим на 11%, а на 60 день на 19,8% в порівнянні з щенятами, що одержали чисту вакцину. У контрольних не імунізованих щенят і у щенят, що не одержували препарат «Альвеозан» антитіла в сироватці крові відсутні. Використовування пропонованого способу має наступні переваги: підвищення вироблення поствакцинального імунітету. Таблиця 1 Імунологічна перебудова організму щенят при одноразовому введенні бактеріального ліполісахариду "Альвеозан" з Bacillus alvei BKM 724 Показники Дні досліджень Доза, мкг/кг Фагоцитоз Т-лімфоцити: 27,2±0,36 27,0±3,0 22,8±3,43 20,4±1,93 Кількість, тис/мкл 1,48±0,66 1,36±0,19 1,03+0,12 0,93±0,1 Початкові показники 3,05±0,4 24,0±2,36 68,4±10,0 76,2±5,0 71,2±8,0 70,6±3,5 8,05±2,19 12,8±2,15 15,7±3,96 20,3±2,95 Через 4 дні 56,6±3,88 6,9±0,98 Через 10 ДНІВ Через 14 днів Імуноглобуліни 15,8±0,86 18,2±2,14 20,6±3,0 25,0±1,93 Кількість, тис/мкл 0,78±0,25 0,95±0,24 0,93±0,09 0,96±0,11 31,6±3,55 16,02±2,85 24,03±5,51 31,0±4,82 0,1+0,12 18,0±1,28 0,75±0,1 19,3±1,83 37,0±1,07 31,0±1,93 33,6±1,29 30,0+3,0 1,9±0,19 1,19±0,11 2,31 ±0,56 1,63±0,13 28,6±0,86 24,6±2,36 28,4±1,07 27,0±1,72 0,47±0,15 0,96±0,13 1,95±0,46 1,51+0,26 38,27±3,44 22,75±5,74 29,28±4,37 23,26±6,77 25,6±2,31 1,55±0,2 23,8±1,78 1,44±0,31 27,2±4,74 1,22±0,13 22,0+0,85 1,6±0,16 22,8±1,07 1,13±0,14 24,6±0,64 1,36±0,18 24,4±1,5 0,9±0,11 0,85±0,11 0,96±0,12 1,03+0,14 33,4±4,01 15,31 ±2,52 24,6±6,87 23,4±5,27 Число, % 1 2 5 10 Контроль 1 2 5 10 Контроль 1 2 5 10 Контроль 1 2 5 10 Контроль В-лімфоцити Индекс % 60±4,29 60±3,43 61,6±4,29 57,6±2,57 2,76±0,4 2,82±0,2 2,64±0,22 3,05±0,43 51,2±7,72 % г/л 51,5±6,8 48,84±6,5 48,7±7,6 51,1 ±3,99 10,38±1,07 30,2±1,07 8,97±1,29 30,4±1,28 10,45±1,3 30,64+0,64 10,7±0,06 30,8±1,3 46,8±5,98 7,92±1,33 23,4±1,93 1,02±0,1 21,0±0,85 0,75±0,12 19,9±3,77 50,6±4,65 48,3±5,55 47,2±2,75 52,5±5,25 8,2±1,16 8,7±1,69 9,5±0,68 9,97±2,93 22,0±0,85 22,0±1,0 27,2±1,28 30,4±1,07 1,03±0,16 0,76±0,08 1,15±0,1 1,25±0,17 19,4±1,28 20,4±1,07 19,2±2,14 19,4+1,28 0,92±0,14 0,73±0,11 0,79±0,08 0,78±0,07 30,8±4,47 19,97±2,07 24,7±7,22 29,7±4,82 45,1 ±3,11 7,34±1,5 21,0±0,85 0,78±0,12 17,2±1,07 0,65±0,12 20,1 ±1,96 10116 Табл. 2 Динаміка титрів антитіл у щенят при вакцинації антирабічною вакциною Дні після імунізації До імунізації Через 4 дні Через 11 днів Через 21 день Через 28 днів Через 42 дня Через 65 днів Титр антитіл після введення Антирабічної вакцини + Антирабічної вакцини Альвеозан Альвеозан 0,8±0,4 0 1,2±0,4 2,6±0,21 3,610,21 0 4,2±0,43 0 3,2±0,43 4,4±0,21 0 5,4±0,21 5,0±0,43 4,4±0,21 0 5,4±0,43 5,6±0,43 0 5,4+0,21 0 4,6±0,21 Комп'ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Контроль (неімунізовані тварини) 0 0 0 0 0 0 0 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 4 2 , 01601