Спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози шляхом модифікації забарвлення аніліновим синім-оранж g
Номер патенту: 106527
Опубліковано: 25.04.2016
Автори: Попадинець Оксана Григорівна, Багрій Микола Миколайович, Іванців Ольга Романівна, Попович Юрій Іларіонович, Жураківська Оксана Ярославівна
Формула / Реферат
Спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози, що включає модифікацію забарвлення аніліновим синім-оранж G, який передбачає забарвлення гістологічних зрізів розчином наступного складу: 2 г оранж G + 0,5 г анілінового синього + 100 мл дистильованої води, який відрізняється тим, що попередньо гістологічні зрізи забарвлюються сумішшю анілін-кислотного фуксину протягом 8 хвилин (5 % водний розчин аніліну - 10 мл + кислотного фуксину 1,5 г, збовтують і фільтрують через широкопористий фільтр).
Текст
Реферат: Спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози включає модифікацію забарвлення аніліновим синім-оранж G, який передбачає забарвлення гістологічних зрізів розчином наступного складу: 2 г оранж G + 0,5 г анілінового синього + 100 мл дистильованої води. Попередньо гістологічні зрізи забарвлюються сумішшю анілін-кислотного фуксину впродовж 8 хвилин (5 % водний розчин аніліну - 10 мл + кислотного фуксину 1,5 г, збовтують і фільтрують через широкопористий фільтр). UA 106527 U (12) UA 106527 U UA 106527 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме гістологічних методів дослідження, і може бути застосована для візуалізації ендокринної та екзокринної частин підшлункової залози в людини і тварин з метою вивчення структурної організації паренхіми підшлункової залози та виявлення її морфо-функціональних змін при різних патологічних станах. Створення даної моделі зумовлене тим, що на даний час у патогістології є недостатньо методик, які дозволяють чітко ідентифікувати інсуліноцити та глюкагоноцити панкреатичних острівців для верифікації діагнозу. При даному способі забарвлення острівці підшлункової залози виявляються без попереднього протравлювання, що є перевагою даної модифікації, забезпечує зниження часу проведення забарвлення. Відомий спосіб забарвлення гістологічних препаратів за Малорі, при якому зрізи доводяться до води, залишки ртуті розчиняють йодом, а останнього позбавляються етанолом (Горальський Л.П., Хомич В.Т., Кононський О.І. Основи гістологічної техніки і морфофункціональні методи досліджень у нормі та при патології / За ред. Л.П. Горальського. - Житомир: Полісся, 2005. - С. 288) Недоліком даної методики є використання ртуті при гістологічних дослідженнях. Найбільш близьким за технічною суттю та результатами, що досягаються, є спосіб забарвлення гладких міоцитів судинної стінки у модифікації методу Малорі, який передбачає забарвлення гістологічних зрізів свіжоприготовленою сумішшю: аніліновий синій (0,5 г) + оранж G (2,0 г) + щавлева кислота (2,0 г) + дистильована вода (100,0 мл). При використанні цього методу, попередньо зрізи забарвлюють у 0,5 % розчині кислого фуксину в розведенні дистильованою водою 1:5 впродовж 3 хвилин (Спосіб гістологічної ідентифікації гладких міоцитів судинної стінки шляхом модифікації забарвлення за Малорі, Деклараційний патент України на корисну модель № 99053 Україна, G01N 33/00, Бюл. № 9, 2014 p.). Недоліком даного способу є те, що він не забезпечує якісної диференціації інсуліноцитів та глюкагоноцитів панкреатичних острівців. Ми отримуємо оранжево-червоне забарвлення як гранул А-клітин, так і В-клітин, що унеможливлює їх ідентифікацію. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози шляхом модифікації забарвлення аніліновим синім-оранж G. На Фіг. 1 - забарвлення аніліновим синім-оранж G острівця Лангерганса щура при експериментальному цукровому діабеті. Зб.: 400. 1 - панкреатичний ацинус, 2 - ділянка некрозу у панкреатичному острівці, 3 - еритроцити у просвіті гемокапіляра, 4 - поодинокі базофільні інсуліноцити (В-клітини), 5 - переважання ацидофільних глюкагоноцитів (А-клітин), 6 - ядра у базальній зоні екзокриноцитів, 7 - гранули зимогену в апікальній зоні екзокриноцитів. На Фіг. 2 - забарвлення аніліновим синім-оранж G панкреатичного острівця щура на фоні медикаментозної корекції експериментального цукрового діабету. Зб.: 400. 1 - ацидофільні глюкагоноцити (А-клітини), 2 - базофільні інсуліноцити (В-клітини), 3 дефінітивні ендокриноцити (Д-клітини), 4 - кровоносні капіляри острівця з еритроцитами у просвіті, 5 - панкреатичні ацинуси, 6 - зимогенні секреторні гранули в апікальній зоні екзокриноцита, 7 - ядра екзокриноцитів у базальній зоні, 8 - міжчасточкова сполучна тканина. Поставлена задача вирішується тим, що ідентифікація інсуліноцитів та глюкагоноцитів панкреатичного острівця здійснюється шляхом забарвлення сумішшю анілін-кислотного фуксину впродовж 8 хвилин (5 % водний розчин аніліну - 10 мл + кислотного фуксину 1,5 г, збовтують і фільтрують через широкопористий фільтр). Позитивний ефект корисної моделі обумовлений і тим, що приготовлений розчин аніліновий синій-оранж G не потрібно доводити до кипіння. Спосіб здійснюють наступним чином: Матеріалом для дослідження служить підшлункова залоза тварин чи людини. Гістологічний матеріал фіксують у нейтральному 10 % формаліні впродовж 24 год. Виготовляють парафінові блоки. На мікротомі виготовляють гістологічні зрізи товщиною 4-5 мкм, зрізи наносять на предметні скельця. Депарафінізацію здійснюють у ксилолі, дегідратацію у спиртах низхідної концентрації. Після цього фільтрувальним папером видаляють залишки води навколо зрізів і проводять забарвлення сумішшю анілін-кислотного фуксину впродовж 8 хвилин (5 % водний розчин аніліну -10 мл + кислотного фуксину 1,5 г, збовтують і фільтрують через широкопористий фільтр, спершу на зрізи наносять товстий шар розчину, нагрівають над малим полум'ям, дають охолонути і продовжують забарвлення). Швидко промивають у водопровідній воді (попередньо прокип'яченій і охолодженій). Зрізи поміщають у 1 % розчин фосфорно-молібденової кислоти на 10 хвилин. Потім підсушують на повітрі, з наступним забарвленням зрізів сумішшю аніліновий синій-оранж G впродовж 1 години (2 г оранж G+0,5 г анілінового синього + 100 мл дистильованої води, розчин не доводимо до кипіння). Знову підсушують на повітрі і 1 UA 106527 U 5 10 диференціюють у 96 % спирті - до тих пір, поки від зрізу не почнуть відділятися густо забарвлені хмаринки (15-12 сек). Зневоднюють у спиртах, просвітлюють карболом, заключають в полістиролі і накривають покривним скельцем. При цьому, гранули глюкагоноцитів на гістологічних зрізах набувають оранжево-червоного забарвлення, гранули інсуліноцитів - блакитного, цитоплазма екзокриноцитів - голуба, зимогенні гранули екзокриноцитів - оранжево-червоні, еритроцити в просвіті гемомікросудин - червоні. Таким чином, запропонована модель гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози шляхом модифікації забарвлення аніліновим синім-оранж G дозволяє в суттєвій мірі диференціювати інсуліноцити і глюкагоноцити панкреатичного острівця без використання дороговартісних імуногістохімічних методів забарвлення. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози, що включає модифікацію забарвлення аніліновим синім-оранж G, який передбачає забарвлення гістологічних зрізів розчином наступного складу: 2 г оранж G + 0,5 г анілінового синього + 100 мл дистильованої води, який відрізняється тим, що попередньо гістологічні зрізи забарвлюються сумішшю анілінкислотного фуксину протягом 8 хвилин (5 % водний розчин аніліну - 10 мл + кислотного фуксину 1,5 г, збовтують і фільтрують через широкопористий фільтр). Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for histological identification of insulae of pancreas by modification of aniline blue orange g staining
Автори англійськоюIvantsiv Olha Romanivna, Bahrii Mykola Mykolaiovych, Popovych Yurii Ilarionovych, Popadynets Oksana Hryhorivna, Zhurakivska Oksana Yaroslavivna
Назва патенту російськоюСпособ гистологической идентификации островков поджелудочной железы путем модификации окрашивания анилиновым синим оранж g
Автори російськоюИванцив Ольга Романовна, Багрий Николай Николаевич, Попович Юрий Илларионович, Попадинец Оксана Григорьевна, Журакивска Оксана Ярославовна
МПК / Мітки
МПК: G01N 33/50, G01N 1/30, A61B 1/00
Мітки: забарвлення, залози, модифікації, гістологічної, синім-оранж, аніліновим, ідентифікації, підшлункової, спосіб, шляхом, острівців
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/4-106527-sposib-gistologichno-identifikaci-ostrivciv-pidshlunkovo-zalozi-shlyakhom-modifikaci-zabarvlennya-anilinovim-sinim-oranzh-g.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб гістологічної ідентифікації острівців підшлункової залози шляхом модифікації забарвлення аніліновим синім-оранж g</a>
Попередній патент: Змішувач-кормороздавач для свиноферм
Наступний патент: Спосіб градуювання імпульсних цифрових фазометрів
Випадковий патент: Пристрій для очищення поверхонь від налиплих або намерзлих сипких матеріалів