Спосіб забарвлення гістологічних зрізів вилочкової залози

Спосіб забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів вилочкової залози шляхом використання фарбувальної суміші, який відрізняється тим, що органоспецифічні тільця Гасаля чітко забарвлюються фарбувальною сумішшю "Ф2С + НФ + СС" на спиртовому розчині з концентрацією в межах 0,9-1,1% Винахід відноситься до медицини, а саме до патологічної анатомії В анатомічній зоні переднього середостіння знаходяться вилочкова залоза, перікард, трахея, листки плеври, судини, нерви, лімфатичні вузли Вади їх розвитку та пухлинні новоутворення спричиняють значні діагностичні труднощі щодо встановлення первинної локалізації патологічного процесу в тому чи іншому органі (тканині) переднього середостіння Веріфікація патологічного процесу у вилочковій залозі є остаточною, якщо в ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратах реєструються тільця Гасаля, які є органоспецифічними структурами тільки для тимуса Відомо, ЩО серед способів ГІСТОЛОГІЧНОГО аналізу вилочкової залози, використовуються гематоКСИЛІНОВІ розчини за рецептурами Бемера, Делафільда, Караці, Ерліха, які головним чином, фарбують паренхіматозні клітини тимуса і погано забарвлюють тільця Гасаля, що є недоліком гематоксилінового фарбування Використання додаткового реактива - еозіна, як найбільш поширеного в патологічній анатомії способа забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів під назвою "гематоксилін-еозін", теж не дає змоги чітко виявляти тільця Гасаля, які приймають бліді кольори [1,2] Інші недоліки забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів вилочкової залози гематоксиліновими розчинами пов'язані з тривалим їх приготуванням (від декількох днів до місяця) з перевіркою тінкторіальних властивостей перед безпосереднім використанням у зв'язку зі схильністю гематоксиліну Бемера, Делафільда до "перефарбування", а гематоксиліну Караці, Ерліха - до "недофарбування" тканини вилочкової залози [2] Таким чином, вищевказані аналоги щодо способів забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів вилочкової залози мають загальний суттєвий недолік, який полягає в відсутності чіткого та стабільного фарбування органоспецифічних тілець Гасаля Прототипом поданої заявки є спосіб забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів за Ван Гізоном [О В Волкова, Ю Ю Елецкий Основы гистологии с гистологической техникой -2-е изд -М Медицина, 1982 - с 364] з використанням складної суміші з гематоксиліну Вейгерта, хлориду заліза, хлористоводневою кислоти, до якої потім додається друга суміш з пікрінової кислоти та кислого фуксину При цьому, головним чином фарбується строма вилочкової залози, з клітинних елементів якої походять тільця Гасаля, які забарвлюються у ВІДТІНКИ коричневого (брунатного) кольору Недоліками прототипу вважаються - трудомісткість технологічної процедури фарбування з використанням 5 ХІМІЧНИХ речовин, - короткочастний строк зберігання "робочого" розчину (не більше 3-4 днів) з часу створення фарбувальної суміші, - відсутність можливості постійного (архівного) зберігання ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратів у зв'язку зі знебарвленням В основу винаходу поставлено задачу створення способу забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів вилочкової залози шляхом елективного (вибіркового) забарвлення тканини тимуса барвником "Ф2С + НФ + СС", що дозволяє встановити локалізацію патологічного процесу в вилочковій залозі при спрощенні технологічної процедури із тривалим зберіганням ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратів без знебарвлення со Ю 53440 Поставлена задача виконується та]ким чином Бюпсійний матеріал (пунктат) з патологічного осередка переднього середостіння хворої людини фіксується та обробляється за правилами загальноприйнятої технологічної процедури з виготовленням ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів, які забарвлюються 1% розчином фарбувальної суміші "Ф2ОНФ+СС" на 70% спирті Доцільно, щоб концентрація варіювала в межах 0,9-1,1% При використанні концентрації суміші менш 0,9% ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи вилочкової залози мають дуже блідий колір і тільця Гасаля майже не фарбуються, а при концентрації більш 1,2% ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи тимуса перенасичуються фарбувальною сумішшю, що також не дає змоги диференціювати тільця Гасаля Фарбник "Ф2С" використовується в легкій промисловості, зокрема для забарвлення текстильних виробів, і в заявляемому способі застосовується за новим призначенням [4] NIIC2H4OH NHCH, Фарбник "Ф2С " є пігментною речовиною, яка погано розчиняється у рідинах, тому для поліпшення його розчинності в суміші з ним використовуються два диспергатора "НФ" (натрієва сіль продукта конденсації нафталш-2-сульфокислоти з формальдегідом) і "СС" (продукт конденсації крезолів з формальдегідом і сульфітом натрію) Офіцінальна суміш фарбника з двома диспергаторами "Ф2С + НФ + СС" має вигляд сухого дрібнозернистого порошку і за рецептурою вітчизняного виробника ВІДПОВІДНО складає таку кількісну пропорцію 40/60 Приклад конкретного використання заявляемого способу При обстеженні хворого К в Інституті онкології АМН України (історія хвороби №138/1998) на комп'ютерному томографі була знайдена поширена конгломератна тінь переднього середостіння з неправильними контурами, яка була кваліфікована як пухлина без встановлення первинної локалізації пухлинного процесу 3 метою уточнюючої діагностики виконана пункційна біопсія патологічного осередка Після загальноприйнятої процедури фіксації та обробки бюптата, на депарафінованих зрізах виконано забарвлення фарбувальною сумішшю "Ф2С+НФ+СС" за заявляємим способом, а також для подвійного контролю - забарвлення гематоксілін-еозіном і пікрофуксином за Ван Гізоном При забарвленні ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів гематоксілш-еозіном і пікрофуксином за Ван Гізоном тільця Гасаля тимуса мають нечітке, бліде зображення (Фіг 1,2), що не дозволяє точно вказати на приналежність бюптату до вилочкової залози За заявляємим способом, при використанні фарбувальної суміші "Ф2С+НФ+СС" в межах 0,91,1%, розчиненої на 70% спирті, тільця Гасаля тимуса чітко забарвлюються у фіолетовий (фіалковий) колір (ФігЗ) При використанні 0,8% або 1,2% концентрації фарбувальної суміші "Ф2С+НФ+СС", розчиненої на 70% спирті, тільця Гасаля недофарбовуються або перефарбовуються Таким чином, завдяки використанню фарбувальної суміші за заявляємим способом в концентрації від 0,9 до 1,1% при забарвленні ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів з пунктату переднього середостіння, матеріал остаточно веріфікується при СВІТЛОВІЙ мікроскопи як тканина вилочкової залози Хірургічне видалення пухлини переднього середостіння з подальшим морфологічним дослідженням операційного матеріалу підтвердило пухлинне ураження вилочкової залози (тимома) Спосіб виконано на бюпсійному і операційному матеріалі вилочкової залози у 68 хворих при різноманітній її патології (тератоми, кісти, ЗЛОЯКІСНІ новоутворення) Узагальнюючи результати апробації представлені втабл Таблиця Порівняльна оцінка забарвлення тілець Гасаля вилочкової залози в залежності від способу фарбування її ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів Група досліджень 1 2 3 КІЛЬКІСТЬ досліджень 68 68 68 Спосіб забарвлення Гематоксилін-еозін (контроль) Пікрофуксин за Ван Пзом (контроль) "Ф2С+НФ+СС" (заявляємий спосіб) Точність способів визначалась за формулою СП/СП+ПН х 100%, де СП - КІЛЬКІСТЬ справжньопозитивних результатів, ПН - КІЛЬКІСТЬ помилковонегативних результатів Таким чином, заявляємий спосіб контрастного забарвлення тілець Гасаля дає об'єктивну змогу точно веріфікувати приналежність тканини бюптату до вилочкової залози Перелік ілюстраційних матеріалів до винаходу Фіг 1 Нечітке, бліде зображення тілець Гасаля (вказано стрілками) Бюптат вилочкової залози хворого К Забарвлення гематоксилін-еозіном Точність способу 79,4% 86,7% 98,5% 36x120 Фіг 2 Нечітке, бліде зображення тілець Гасаля (вказано стрілками) Бюптат вилочкової залози хворого К Забарвлення пікрофуксином за Ван Гізоном 36x200 Фіг 3 Чітке зображення тілець Гасаля, забарвлених у фіолетовий (фіалковий) колір (вказано стрілками) Бюптат вилочкової залози хворого К Забарвлення фарбувальною сумішшю "Ф2С+НФ+СС" 36x200 Джерела інформації 1 Г А Меркулов Курс патологогистологичес кой техники -М Медицина, 1969 - с 422 2 І D Bancroft, A Stevens Theory and Practice Histological Techniques -Livingston - N-Y -1982 662p З О В Волкова, Ю К Елецкий Основы гисто 53440 6 логии с гистологической техникой - 2-е изд -М Медицина, 1982-3 с 64 (прототип) 4 Б Н Мельников, Г И Виноградова Применение красителей -М Химия, 1986 - с 239 Фи 2. Фіг 1 Фіг ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24