Модифікація забарвлення за малорі для виявлення посмугованих м’язових волокон

Реферат: Спосіб гістологічної ідентифікації волокон посмугованої м'язової тканини шляхом модифікації забарвлення за Малорі включає забарвлення гістологічних зрізів свіжоприготовленою сумішшю, до складу якої входять такі компоненти: аніліновий синій, оранж G, щавлева кислота та дистильована вода. Здійснюють попередню передобробку депарафінованих гістологічних зрізів фіксованого у нейтральному формаліні досліджуваного матеріалу впродовж 1 год. при 57 °C у розчині Буена наступного складу: насичений розчин пікринової кислоти, нейтральний концентрований формалін, льодяна оцтова кислота; або фіксацію досліджуваного матеріалу в рідині Буена. UA 109954 U (12) UA 109954 U UA 109954 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до гістоморфологічних методів досліджень і може бути використана для диференціації посмугованих м'язових волокон від сполучнотканинних колагенових. Створення зазначеної моделі зумовлене тим, що на сьогоднішній день у морфології є мало методик, при використанні яких у достатній мірі можна було би віддиференціювати волокна посмугованої м'язової тканини від колагенових. При класичному забарвленні за Малорі без передобробки посмуговані м'язи набувають або нерівномірного забарвлення (ділянки жовтого кольору чергуються з ділянками світло-бузкового чи бузково-синього кольору), або забарвлюються рівномірно у світло-бузковий чи бузково-синій колір, або забарвлюються у синій колір, як і колагенові волокна (Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. 5-е изд., испр. и доп. - Л.: Медицина, 1969 423 с; Волкова О.В. Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий. 2-е изд. - М.: Медицина, 1982. - 304 с). В такому разі немає чіткого забарвлення посмугованих м'язів і немає чіткого диференціювання зі сполучнотканинними волокнами. Відомим є спосіб, при якому впродовж 20 хвилин здійснюють передобробку у 3 % розчині біхромату калію (Коржевский Д.Э. Основы гистологической техники / Д.Э. Коржевский, А.В. Гиляров. - СПб.: СпецЛит, 2000. - 95 с). Даний спосіб дозволяє виявити рівномірне забарвлення посмугованих м'язів, які набувають бузкового відтінку, проте він наближається до синього кольору колагенових волокон. В основу корисної моделі поставлено задачу створити спосіб гістологічної ідентифікації волокон посмугованої м'язової тканини шляхом попередньої передобробки в розчині Буена і цим самим забезпечити їх диференціацію з колагеновими волокнами сполучної тканини. Поставлена задача корисної моделі вирішується способом, при якому гістологічна ідентифікація волокон посмугованих м'язів здійснюється шляхом модифікації забарвлення за Малорі, що передбачає забарвлення гістологічних зрізів свіжоприготовленою сумішшю, до складу якої входять такі компоненти: аніліновий синій (0,5 г), оранж G (2,0 г), щавлева кислота (2,0 г) та дистильована вода (100,0 мл); при цьому, згідно корисної моделі, здійснюють попередню передобробку впродовж 1 год. при 57 °C у розчині Буена наступного складу: насичений розчин пікринової кислоти - 750,0 мл, нейтральний концентрований формалін - 250,0 мл, льодяна оцтова кислота - 50,0 мл. Отже, за рахунок виконання поставленої задачі можна чітко віддиференціювати посмуговані м'язові волокна від колагенових сполучнотканинних, а також одночасно вивчати структурні особливості посмугованої м'язової тканини в нормі, при різних патологічних станах і на фоні медикаментозної корекції. Спосіб гістологічної ідентифікації волокон посмугованої м'язової тканини шляхом модифікації забарвлення за Малорі здійснюють наступним чином. Для гістологічного дослідження матеріал фіксують у рідині Буена або нейтральному розчині формаліну. Тривалість фіксації у рідині Буена - 1-24 год. (іноді до трьох діб) при 20 °C. Після фіксації шматочки відмивають від надлишку пікринової кислоти у 70 % спирті впродовж 3-4 днів, періодично замінюючи спирт. За цей період часу пікринова кислота, що міститься у досліджуваних шматочках, ще буде забарвлювати спирт. Проте, цього часу (3-4 доби) достатньо для адекватного промивання та подальшої якісної обробки шматочків. Досліджуваний матеріал у подальшому слід зберігати у 70 % спирті. При фіксації у нейтральному формаліні після депарафінування проводять додаткову передобробку у розчині Буена при температурі 56 °C (у термостаті) впродовж 1 год., охолоджують при кімнатній температурі, промивають проточною водою у кількох змінах (до зникнення жовтого забарвлення води), промивають у дистильованій воді 1-2 хв. За Малорі гістологічні зрізи забарвлюють у 0,5 % розчині кислого фуксину в розведенні дистильованою водою 1:10 впродовж 3-х хвилин. Швидко споліскують у воді. Переносять у 1 % водний розчин фосфорно-молібденової кислоти впродовж 5 хвилин для кращої фіксації фуксину. Знову швидко ополіскують у воді та забарвлюють зрізи впродовж 2 хв у попередньо свіжоприготовленій суміші (аніліновий синій 0,5 г, оранж G 2,0 г, щавлева кислота 2,0 г, дистильована вода 100,0 мл), яку нагрівають до кипіння, охолоджують і двічі фільтрують. Промивають двічі у воді впродовж 1 хвилини, диференціюють у спирті під контролем мікроскопа до виразного виявлення волокон (зазвичай 3 хв), зневоднюють у спирті, просвітляють у ксилолі та заключають у бальзам, накривають покривними скельцями. Згідно результатів даного способу забарвлення, м'язові волокна набувають жовтого кольору, колагенові волокна - темно-синього; еластичні волокна, фібрин, фібриноїд, глія червоного; ретикулярні волокна, хрящ, гіалін, амілоїд, слиз - блакитного; цитоплазма клітин, еритроцити - жовтого, оранжевого; мієлін - жовтого. 1 UA 109954 U Корисна модель забезпечує диференційовану візуалізацію посмугованих м'язів і сполучнотканинних колагенових волокон. структурних елементів ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб гістологічної ідентифікації волокон посмугованої м'язової тканини шляхом модифікації забарвлення за Малорі, що включає забарвлення гістологічних зрізів свіжоприготовленою сумішшю, до складу якої входять такі компоненти: аніліновий синій (0,5 г), оранж G (2,0 г), щавлева кислота (2,0 г) та дистильована вода (100,0 мл), який відрізняється тим, що здійснюють попередню передобробку депарафінованих гістологічних зрізів фіксованого у нейтральному формаліні досліджуваного матеріалу впродовж 1 год. при 57 °C у розчині Буена наступного складу: насичений розчин пікринової кислоти - 750,0 мл, нейтральний концентрований формалін - 250,0 мл, льодяна оцтова кислота - 50,0 мл; або фіксацію досліджуваного матеріалу в рідині Буена. 15 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2