Спосіб визначення тяжкості захворювання на грип

Спосіб визначення тяжкості захворювання на грип, що включає відбір проби венозної крові, виділення сироватки, дослідження концентрації маркера та оцінку перебігу захворювання, який відрізняється тим, що як маркер крові досліджують астроцит-специфічний кальцій-зв'язуючий білок S100, а під час оцінки визначають легкий або середньо-тяжкий ступінь перебігу, якщо концентрація S-100 в сироватці сягає 0,085±0,004 або 0,091±0,005 мкг/мл, відповідно. (19) (21) u201101030 (22) 31.01.2011 (24) 25.10.2011 (46) 25.10.2011, Бюл.№ 20, 2011 р. (72) ТКАЧЕНКО ВАЛЕНТИНА ДМИТРІВНА, МАВРУТЕНКОВ ВІКТОР ВОЛОДИМИРОВИЧ, УШАКОВА ГАЛИНА ОЛЕКСАНДРІВНА, МАВРУТЕНКОВА ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА (73) ТКАЧЕНКО ВАЛЕНТИНА ДМИТРІВНА, МАВРУТЕНКОВ ВІКТОР ВОЛОДИМИРОВИЧ, УШАКОВА ГАЛИНА ОЛЕКСАНДРІВНА, МАВРУТЕНКОВА ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА 3 відбір проби венозної крові, виділення сироватки, дослідження концентрації маркера та оцінку перебігу захворювання, відповідно до корисної моделі, як маркер крові досліджують астроцит специфічний кальцій-зв'язуючий білок S-100, а під час оцінки визначають легкий або середньо-тяжкий ступінь перебігу, якщо концентрація S-100 в сироватці сягає 0,085±0,004 або 0,091±0,005 мкг/мл, відповідно. Причинно-наслідковий зв'язок сукупності істотних ознак заявленої корисної моделі зі збільшенням точності діагностування полягає в наступному. Проведені заявником дослідження інформують про те, що залучений астроцит специфічний кальцій-зв'язуючий білок S-100 як маркер крові має 100% специфічність та 45% інформативність, що, поряд з можливістю отримання дискретних проміжків його концентрації в сироватці та диференціювання останніх допускає збільшення точності у 1,8-2,5 рази, відносно попередніх аналогів. Дослідження вмісту протеїну S-100 у сироватці крові за умов інфікування на грип розширює клінічні уявлення щодо механізмів інфекційного процесу, які виникають внаслідок зараження цими патогенами, саме у імунокомпетентних хворих без ознак попереднього ураження ЦНС. Це зумовлене тим, що у людини під час розвитку важкого інфекційного процесу відбувається ураження компонентів ЦНС, саме за рахунок прямої цитотоксичної дії вірусів грипу й ГРВІ на астрогліальні клітини, що є притаманним для цих інфекційних агентів. Визначуваний протеїн S-100 є специфічним маркером астроцитів, його вміст починає зростати у сироватці крові лише за умов ушкодження астроцитів та зниження проникності гемато-енцефалічного бар'єру [5]. Запропонований спосіб здійснюється за стандартних умовах, не має протипоказань та вікових або тендерних обмежень. Тому сукупність запропонованих відмітних ознак заявленої корисної моделі при вирішенні поставленої задачі і досягненні технічного результату є суттєвою, характеризує затребуваний обсяг її правового захисту "новим" і поширюється на усі випадки її багаторазової реалізації. Відомості, які підтверджують можливість здійснення способу визначення тяжкості захворювання на грип, з можливістю перевершення заявленого технічного результату полягають в наступному. Для здійснення корисної моделі залучають: спектрофотометр планшетного типу ІФА ("Antos 2010", Фінляндія), плоскі планшети для ІФА ("Nunc", Данія), кролячі моноспецифічні поліклональні антитіла проти S-100 ("Sigma", США), антитіла проти IgG кроля, мічені пероксидазою хрону ("Sigma", США), білок S-100 ("Sigma", США), забуферений фізіологічний розчин, твін-20 ("Sigma", США), ортофенілендіамін (Sigma, США), цитрат, Н2О2, НСl-2М. Суть. Відбирають пробу венозної крові, виділяють сироватку, досліджують в ній астроцит специфічний кальцій-зв'язуючий білок S-100 під час захворювання, а під час оцінки визначають легкий або середньо-тяжкий ступінь перебігу, якщо концентрація S-100 в сироватці сягає 0,085±0,004 63754 4 або 0,091±0,005 мкг/мл, відповідно. За цих умов збільшують точність у 1,8-2,5 рази, відносно попередніх аналогів. Кількість астроцит специфічного білка S-100 у сироватці крові визначають шляхом твердофазного імуноферментного аналізу [6], на основі специфічної взаємодії антигену з антитілом. Кількість білка знаходять згідно зі стандартними умовами конкурентного імуноферментного аналізу, з використанням моноспецифічних поліклональних антитіл проти 8-100, стандартного чистого білка та антитіл проти IgG кролів, мічених пероксидазою хрону. Концентрацію S-100 у сироватці знаходять таким чином: сорбція до полістиролу в лунках плоского планшету для ІФА чистого S-100, розведеного на фосфатному буфері (50 мМ, рН 7,0) до кінцевої концентрації 0,4 мкг/100 мкл, протягом 18 год. при +4°C; промивання лунок забуференим фізіологічним розчином (ЗФР) з додаванням твіну20-0,05%, рН 7,4-3 рази по 5 хв., по 200 мкл в лунку; блокування вільних місць зв'язування на полістиролі 1% розчином бичачого сироваткового альбуміну (БСА) на ЗФР по 200 мкл в лунку, протягом 1 год. при +37°C; одночасно проводять преінкубацію у пробірках антитіл до S-100 (кінцеве розведення 1:1000) та антигену з дослідних зразків сироватки крові (100 мкл), впродовж години при +37°C; паралельно проводять преінкубацію для стандартних розчинів з відомою концентрацією S100 (1; 0,5; 0,25; 0, 125; 0,062; 0,031; 0,015 мкг/мл); по закінченню блокування лунки відмивають ЗФР, з додаванням твіну-20-0,05%, рН 7,4, 3 рази по 10 хв. Надалі в лунку вносять преінкубовану суміш та проводять інкубацію протягом 18 год. при +4°C, промивають ЗФР з твіном-20, 3 рази по 5 хв.; інкубують з вторинними антитілами проти IgG кролів (розведення 1:2000), міченими пероксидазою хрону, по 100 мкл в лунці, протягом 1,5 год. при +37°C. Промивають ЗФР з твіном-20, 3 рази по 5 хв. Фарбують розчином ортофенілендіаміну -0,05%, що містить Н2О2-0,015% й цитрат 0,2% рН 5,5 (до розвинення стабільного жовтого кольору). Зупиняють реакцію розчином НСl-2 М, вимірюють оптичну щільність на спектрофотометрі при довжині хвилі 492 нм (для ІФА "Antos" 2010). Вміст протеїну S-100 у сироватці крові розраховують згідно з калібрувальним графіком, побудованим за значеннями показників оптичної щільності для стандартних розчинів з відомою концентрацією чистого S-100. Приклад. Історія хвороби № 197. Пацієнт Н-ов К. А., 28 років, перебував на шпитальному лікуванні з 12.01.10 по 22.01.10 в МПК № 21 ім. проф. О. Г. Попкової м. Дніпропетровська з направленим діагнозом: ГРВІ, тяжкий перебіг. Двостороння бронхопневмонія? Скарги при надходження до шпиталю на: слабкість, озноб, лихоманку, першіння в горлі, утруднення носового дихання, сухий кашель. З анамнезу захворювання відомо, що захворів гостро 11.01.2010, коли вперше заявилися вище перераховані скарги та симптоми. Самостійно приймав жарознижуючі препарати, але стан не покращився і хворий звернувся в поліклініку за 5 63754 місцем проживання. Після огляду в поліклініці пацієнт був направлений до шпиталю в МПК № 21 ім. проф. О. Г. Попкової. З анамнезу життя пацієнта відомо, що на диспансерному обліку з приводу будь-яких хронічних захворювань не перебував. Вживання алкоголю або наркотичних сполук категорично заперечує. Алергічних реакцій на фармакологічні препарати або харчі немає. Дані епідеміологічного анамнезу: протягом тижня перебуває в контакті з хворими на ГРВІ за місцем роботи. Пацієнт з постійного місця проживання протягом останнього місяця не виїжджав. Від грипу не щеплювався. Загальний стан хворого при надходженні в шпиталь середнього ступеня тяжкості за рахунок загальної інтоксикації та помірних ознак дихальної недостатності. Свідомість відповідно до шкали Глазго (Glasgow) 15 балів. Шкіра звичайного забарвлення, висипка відсутня. Відмічається яскравість та гіперемія склер. Температура тіла в аксілярній області після вживання нестероїдних протизапальних засобів 38,7°C. Периферичні лімфатичні вузли не збільшені. При огляді ротоглотки відмічається яскрава гіперемія та зернистість задньої стінки горла. Відмічаються серозно-слизові виділення з носових ходів. Функціональні ознаки розладів дихання у покої відсутні. Відмічається малопродуктивний кашель та охриплість голосу. Ознак ціанозу немає. Сатурація крові за даними пульсоксиметрії складає 96%. Частота дихання - 24 рази на хвилину. Перкуторний звук над легенями вкорочений в нижніх відділах з обох сторін. Рухливість легеневого краю не обмежена. При аускультації дихання жорстке, послаблене з обох сторін, більше з правої сторони. Зліва прослуховуються вологі хрипи, які не змінюють своєї локалізації після кашлю. Межі серця за даними перкусії не розширені. Тони серця за даними аускультації ритмі 6 чні, гучні, частота серцевих скорочень - 92 удари на хвилину. Симптом капілярного наповнення ногтьового ложа