Спосіб оцінки ступеня тяжкості діабетичної ретинопатії

Спосіб оцінки ступеня тяжкості діабетичної ретинопатії, що включає дослідження крові, який відрізняється тим, що в сироватці крові визначають концентрацію циркулюючих імунних комплексів великого, середнього та малого розміру на спектрофотометрі при довжині хвилі 450 нм, отримані результати виражають в умовних одиницях за формулою: 3 ції проліферативних процесів в сітківці ока [8, 9, 10]. Відомо, що найбільшу пошкоджуючу дію виявляють патогенні ЦІК середнього (середньомолекулярні з константою седиментації 11-19 S) та малого (дрібно-молекулярні з константою седиментації < 11 S) розміру, які утворюються при надлишку антигену та характеризуються тривалою циркуляцією та високою комплементактивуючою здатністю [11]. Існуючі на даний час способи діагностики не можуть повною мірою достовірно оцінити ступінь тяжкості діабетичної ретинопатії та її стадію. Найбільш близьким до способу, що заявляється, вибраний як прототип, є спосіб, що включає дослідження крові шляхом визначення кількості патогенних ЦІК [10]. Проте даний спосіб не дозволяє оцінити стадію діабетичної ретинопатії, оскільки в даному прототипі визначення концентрації ЦІК проводилась без урахування стадії діабетичної ретинопатії, а також розміру патогенних та фізіологічних ЦІК. З огляду на вищезазначене очевидно, що вирішення проблеми оцінки ступеня тяжкості діабетичної ретинопатії є надзвичайно актуальним. Задача, яку вирішує корисна модель, що заявляється, полягає у створенні ефективного способу оцінки ступеня тяжкості діабетичної ретинопатії, який би дозволив чітко диференціювати її стадію, був точним, інформативним, більш простим у виконанні, швидким у плані проведення дослідження, не потребував значних коштів на реактиви та дозволив отримати достовірні дані, які б сприяли адекватній та достовірній оцінці ступеня тяжкості патології. Технічний результат, що досягається корисною моделлю у запропонованому способі, на відміну від прототипу, полягає у дослідженні в сироватці крові кількості циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) різного молекулярного розміру із визначенням вмісту найбільш патогенних ЦІК середнього та малого розміру, які мають патогенетичне значення в перебігу діабетичної ретинопатії. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі, що включає дослідження крові, згідно з корисною моделлю, в сироватці крові визначають концентрацію циркулюючих імунних комплексів великого, середнього та малого розміру на спектрофотометрі при довжині хвилі 450 нм, отримані результати виражають в умовних одиницях за формулою: 65807 4 ЦІК=(Е1-Е0)×1000, де ЦІК - циркулюючі імунні комплекси; Е1 - дослід, одиниць екстинкції; Е0 - контроль, одиниць екстинкції, і при зниженні концентрації ЦІК великого розміру до 16,53±0,36 ум.од. та збільшенні кількості ЦІК середнього розміру до 91,56±1,37 ум.од. та малого розміру до 49,15±0,82 ум.од. діагностують проліферативну діабетичну ретинопатію; при зниженні концентрації ЦІК великого розміру до 27,08±0,47 ум.од. та збільшенні кількості ЦІК середнього розміру до 73,42±1,25 ум.од. та малого розміру до 31,86±0,64 ум.од. діагностують препроліферативну діабетичну ретинопатію; при зниженні концентрації ЦІК великого розміру до 36,14±0,82 ум.од. та збільшенні кількості ЦІК середнього розміру до 57,31±1,14 ум.од. та малого розміру до 18,70±0,49 ум.од. діагностують непроліферативну діабетичну ретинопатію. Відмінною особливістю способу, що заявляється, є використання як маркера ступеня тяжкості перебігу діабетичної ретинопатії концентрації циркулюючих імунних комплексів з різною молекулярною масою, які мають патогенетичне значення в перебігу захворювання, дисбаланс яких в сторону переваги патогенних середньо- та дрібномолекулярних при дефіциті фізіологічних великомолекулярних призводить до наростання тяжкості перебігу діабетичної ретинопатії. За відомими літературними даними такий спосіб оцінки ступеня тяжкості діабетичної ретинопатії невідомий. Спосіб здійснюється наступним чином: Для проведення дослідження у хворого беруть кров (венозну або капілярну) в кількості 2 мл. Кров центрифугують при 1500 об./хв протягом 10 хвилин і після цього - знімають сироватку крові. Досліджувану сироватку розливають в 1, 2, 3 та 4 пробірки, як зображено на схемі. Для дослідження готують боратний буфер з рН=8,4; для чого до 55 мл 1,24 % розчину борної кислоти додають 45 мл 1,9 % розчину бури і доводять об'єм до 1 л. На основі боратного буфера готують 2,5 %, 3,75 % та 7,0 % розчини поліетиленгліколю (ПЕГ) - 6000. За допомогою 2,5 % розчину ПЕГ визначають концентрацію великомолекулярних ЦІК, 3,75 % - середньомолекулярних, 7,0 % - дрібномолекулярних. Після приготування розчинів їх послідовно додають до сироватки крові в кількості, як зображено на схемі [12]. Схема постановки: І пробірка II пробірка III пробірка IV пробірка Контроль Дослідні 0,1 мл сироватки + 0,1 мл сироватки + 0,2 мл 0,1 мл сироватки + 0,2 мл 0,1 мл сироватки + 0,2 мл 2,9 мл боратного бу- боратного буфера + 2,7 мл боратного буфера + 2,7 мл боратного буфера + 2,7 мл фера ПЕГ 2,5 % розчину ПЕГ 3,75 % розчину ПЕГ 7,0 % розчину Після внесення до пробірок всіх інгредієнтів вміст перемішати. Проби інкубуємо 1 годину при кімнатній температурі, після чого проводимо визначення концентрації ЦІК на спектрофотометрі 3 при довжині хвилі 450 нм у кюветі 1×1 см за оптичною густиною відповідних зразків. Отриманий на спектрофотометрі результат відповідає концентрації ЦІК в одиницях екстинкції, а після його множення на тисячу - отримували кількість ЦІК в умовних одиницях в 100 мл сироватки крові за формулою: ЦІК=(Е1-Е0)×1000, 5 де Е1 - дослід, Е0 - контроль. Конкретні приклади виконання. Приклад 1 Хвора Л., 51 р. Перебувала на стаціонарному лікуванні з діагнозом: Діабетична ангіоретинопатія, непроліферативна стадія. Хворіє на цукровий діабет II типу протягом 5 років. При офтальмологічному обстеженні у хворої визначалося: патологічні зміни сітківки ока та її судин, які проявлялися наявністю легкого розширення вен та звуженням артерій - А:В - 1:3, наявністю мікроаневризм судинної стінки та поодинокими м'якими та твердими ексудатами. В імунограмі рівень циркулюючих імунних комплексів становив: середнього розміру - 58,1 ум.од., малого - 17,8 ум.од., великого розміру - 35,9 ум.од. Приклад 2 Хвора Α., 62 p. Перебувала на стаціонарному лікуванні з діагнозом: Діабетична ангіоретинопатія, препроліферативна стадія. Хворіє на цукровий діабет II типу протягом 8 років, має супутню есенціальну гіпертензію. При офтальмологічному обстеженні у хворої визначалося: диск зорового нерва блідо-рожевий, з чіткими контурами, вени сітківки розширені, нерівномірні, чоткоподібні, спостерігається венозна петля, м'які та тверді ексудати. Наявні точкові геморагії та візуалізуються ішемічні зони сітківки. В імунограмі рівень циркулюючих імунних комплексів становив: середнього розміру - 71,5 ум.од., 65807 6 малого - 30,2 ум.од., великого розміру - 26,7 ум. од. Приклад 3 Хвора Б., 75 р. Перебувала на стаціонарному лікуванні з діагнозом: Діабетична ангіоретинопатія, проліферативна стадія. Хворіє на цукровий діабет II типу протягом 20 років, має супутню есенціальну гіпертензію. При офтальмологічному обстеженні у хворої визначалося: мікроаневризми судин всіх квадрантів сітківки, інтраретинальні точкові та штрихоподібні геморагії. Вени сітківки розширені, повнокровні, нерівномірного калібру, четкоподібні. Артерії - звужені, склерозовані. Також спостерігаються новоутворені судини, розрив сітківки правого ока, утворення фіброзних шварт лівого ока. В імунограмі рівень циркулюючих імунних комплексів становив: середнього розміру - 89,6 ум.од., малого - 47,1 ум.од., великого розміру - 15,9 ум.од. Статистична обробка отриманих результатів виконана на персональному комп'ютері з використанням пакета прикладних програм Microsoft ХР "Ехеl". По запропонованому способу було обстежено 91 хворого на діабетичну ретинопатію і отримані результати виявили високу інформативність запропонованого способу в порівнянні зі способомпрототипом (табл.). Контрольну групу склали 30 здорових осіб, співставлюваних за віком та статтю. Таблиця Концентрація ЦІК у хворих на діабетичну ретинопатію в залежності від стадії захворювання (М + m, n=91) Досліджува ні Непроліферативна ста- Препроліферативна ста- Проліферативна стапараметри дія ДРП дія ДРП дія ДРП ЦІК великого ро36,14±0,82* ** 27,08±0,47* ** 16,53±0,36* ** зміру, ум.од ЦІК середнього 57,31±1,14* ** 73,42±1,25* ** 91,56±1,37* ** розміру, ум.од ЦІК малого роз18,70±0,49* ** 31,86±0,64* ** 49,15±0,82* ** міру, ум.од Контрольна група 51,45±1,37 34,79±1,18 11,23±0,46 Примітка: * - р