Спосіб діагностики форми чоловічої неплідності

Спосіб діагностики форми чоловічої неплідності, який включає морфологічне дослідження біоптату яєчка, який відрізняється тим, що проводять попереднє цитологічне дослідження клітинного осаду біоптату та при наявності в препараті хоча б одного сперматозоїду і підтвердженні наявності їх в тестикулярній тканині при наступному електронномікроскопічному дослідженні цього ж біоптату діагностують екскреторно-обтураційну неплідність, в той час як при відсутності сперматозоїдів і в цитологічному і в електронномікроскопічному препаратах діагностують секреторну форму чоловічої неплідності. (19) (21) 2004021078 (22) 13.02.2004 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Базалицька Світлана Василівна, Романенко Аліна Михайлівна, Бойко Микола Іванович, Забарко Лариса Борисівна, Нуріманов Каміль Раїсович (73) ІНСТИТУТ УРОЛОГІЇ АКАДЕМІЇ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ (56) Андрусишина И.Н. Морфофункциональные изменения сперматогенеза при воздействии свинца на самцов белых крыс. -Современные вопросы токсикологии., №2. 1999. Sherman J. Silber, Larry Johnson. Are spermatid injection of any clinical value? - Human reproduction., Vol. 13, №3, 1998. - pp. 509-523. 3 76171 4 включає морфологічне дослідження біоптату яєчють та проводять статистичну обробку даних. ка, згідно з винаходом, проводять попереднє циОдержані дані морфологічних досліджень потологічне дослідження клітинного осаду біоптату яснюють ілюстративними матеріалами. та при наявності в препараті хоча б одного сперНа Фіг.1 представлені сім'яні канальці нормаматозоїду і підтвердженні наявності їх в тестикульного діаметру із поодинокими зрілими спермалярній тканині при наступному електроннотозоїдами при екскреторно-обтураційній неплідномікроскопічному дослідженні цього ж біоптату діагсті. Набряк інтерстицію, незначне потовщення ностують екскреторно-обтураційну неплідність, в стінок судин. Скупчення клітин Лейдіга. Напівтонтой час як при відсутності сперматозоїдів і в цитокий зріз. Забарвлення толуїдиновим синім - піронілогічному, і в електронно мікроскопічному препаном. X 300. ратах діагностують секреторну форму чоловічої На Фіг.2 - вакуолізація апікальних ділянок цинеплідності. топлазми сустентоцитів, відростки яких не повнісСпосіб діагностики форми чоловічої непліднотю накривають зрілі елементи сперматогенного сті виконують таким чином: у хворого із азоосперепітелію. Електроннограма. X 8000. мією проводять інцизійну біопсію яєчка із забором На Фіг.3 - сім'яні канальці зменшеного діаметру з блоком сперматогенезу на рівні сперматоцитів біоптату розміром 1 3мм3 та фіксацією в електпри секреторній неплідності. Деформація та поторонномікроскопічному фіксаторі (суміш забуферевщення стінок сім'яних канальців, склероз інтерсного 10% розчину глютаральдегіду і 2% розчину тицію. Напівтонкий зріз. Забарвлення толуїдинопараформу на 4% сахарозі з рН7,2-7,4) протягом вим синім - піроніном. X 300. 5-10 хвилин після чого тканину біоптату яєчка пеНа Фіг.4 - сім'яний каналець із значним поруреносять у свіжу порцію електронномікроскопічношенням сперматогенезу: в базальній частині цитого фіксатора. плазми значні скупчення ліпідів, різке розширення В залишеному фіксаторі проводять цитологічцистерн гладкої ендоплазматичної сітки. Електне дослідження клітинного осаду з біоптату яєчка. роннограма. X 8000. Для цього фіксатор центрифугують протягом 10 На Фіг.5 - сім'яні канальці з руйнуванням міжкхвилин при швидкості 10000об./хв. З клітинного літинних контактів та відривом сперматогенного осаду виготовляють цитологічні препарати, які епітелію від базальної мембрани. Набряк інтерсфіксують в метанолі і фарбують за Паппенгеймом тицію. Фіксація в формаліні. Забарвлення гематок(фарбники Май-Грюнвальда-Романовськогосилін-еозином. X 300. Гімза). Препарати досліджують в світловому мікЦитологічне дослідження роскопі під імерсійним об'єктивом ( 90). При цитологічному дослідженні клітинного Для електронномікроскопічного дослідження осаду біоптату яєчка хворих із екскреторнозафіксовану тканину біоптату яєчка проводять за обтураційною неплідністю у полі зору мікроскопа загальновизнаною методикою Паладе і заливають виявляють, переважно, поодинокі змінені і незмів епоксидні смоли (епон - аралдит М). З отриманих нені сперматозоїди, рідше визначають 2-4 спермаелектронномікроскопічних блоків на ультрамікротозоїди в полі зору мікроскопа. томі виготовляють напівтонкі зрізи товщиною 1мкм У пацієнтів із блоком сперматогенезу, які і фарбують метиленовим синім-піроніном та висклали групу секреторної неплідності при цитоловчають у світловому мікроскопі. Напівтонкі зрізи гічному дослідженні клітинного осаду біоптату яєчвикористовують, як для загального огляду і оцінки ка, зрілі сперматозоїди не виявлялись. Попереднє біоптату яєчка, так і для прицільного вибору місця цитологічне заключения про збереженість або виготовлення ультратонких зрізів. Після чого вигоблок сперматогенезу підтверджено наступним товляють ультратонкі зрізи товщиною 0,06-0,1мкм, електронномік-роскопічним дослідженням у 48 які контрастують уранілацетатом та цитратом свиспостереженнях із 52, що складає 92,3%. нцю за Рейнольдсом і вивчають в електронному Електронномікроскопічне дослідження мікроскопі. При попередньому дослідженні напівтонких Спосіб діагностики форми чоловічої непліднозрізів з електронномікроскопічних блоків, які дості був використаний у відділі сексопатології та зволяють зробити загальний огляд і оцінку стану андрології Інституту урології АМН України при дотестикулярної тканини, визначають кількість попеслідженні біопсійного матеріалу та лікуванні 52 речно зрізаних сім'яних канальців в біоптаті, їх хворих із азооспермією. За останню вважають діаметр та товщину стінок. За допомогою напівтовідсутність сперматозоїдів в еякуляті, що виявлянких зрізів ви-значають також стан сперматогенноють багаторазовими дослідженнями. При визнаго епітелію, інтерстиційної сполучної тканини, кліченні заключного діагнозу у хворих враховують тин Лейдіга та судин (Фіг.1). Інтерстиційний дані морфологічного дослідження біоптату яєчка компонент визначається набряком інтерстиційної та результати гормональних досліджень. Вирішасполучної тканини, ділянками склерозу інтерстицію льним діагностичним показником вважають рета, іноді - слабкою дифузною лімфоїдноклітинною зультати морфологічного дослідження. Хворих інфільтрацією. Судинний компонент характеризуподілено на 2 групи: 1 група - 33 хворих з діагноється потовщенням стінок судин, їх склерозом та зом екскреторно-обтураційна неплідність, в тому ділянками геморагій. Ендокринний компонент вичислі один пацієнт із агенезією сім'явиносної проявляється гіперплазією клітин Лейдіга, іноді з надтоки, середній вік хворих становив 33,6 років. 2 мірним накопиченням продуктів їх секреторної група - 19 пацієнтів з діагнозом секреторна неплідіяльності. дність, середній вік - 29,5 років. При екскреторно-обтураційній неплідності в Результати цитологічного, електронномікроспросвітах сім'яних канальців, як правило, визнакопічного та гістологічного досліджень співставля 5 76171 6 чають лише поодинокі зрілі сперматозоїди, що Приклад 1 відповідає збереженому сперматогенезу, або, часХворий Д., і.х. №549 та №1039, 33 років, безтіше - збереженому сперматогенезу з ознаками плідний шлюб протягом 3 років. В спермограмі: пригнічення. (Фіг.1). В таких канальцях на ультраклітин сперматогенезу та сперматозоїдів не виявструктурному рівні в ділянках цитоплазми клітин лено, еритроцити відсутні, лейкоцити 1-2 в полі Сертолі, що прилягають до зрілих сперматид, спозору, фруктоза 13ммоль/л. При лабораторних достерігають розширені цистерни гладкої ендоплазслідженнях урогенітальної інфекції не виявлено. матичної сітки, включення ліпідів, часто визначаГормональні дослідження: ФСГ, ЛГ, пролактин ють помірну вакуолізацію апікальних ділянок тестостерон - в нормі. Виконана інцизійна біопсія цитоплазми, а відростки сустентоцитів не повністю правого яєчка. Біопсійний матеріал досліджений накривають зрілі елементи сперматогенного епізгідно запропонованого способу. Цитологічне достелію (Фіг.2). лідження, виконане протягом 1 години після забоПри секреторній неплідності спостерігають ру матеріалу: в клітинному осаді виявлені зрілі деформацію і потовщення стінок сім'яних канальсперматозоїди. Результати електронномікроскопіців із зменшенням їх діаметру. Зрілі сперматозоїди чного дослідження підтвердили дані про збережев просвітах канальців при секреторній неплідності ність сперматогенезу: сперматогенез збережений відсутні, визначають блок сперматогенезу на рівні із ознаками пригнічення, інтерстиційний компонент сперматогонін, сперматоцитів, або незрілих чи у вигляді розширення інтерстицію та слабкої дизрілих сперматид. При цьому, клітини сперматофузної лімфоїдноклітинної інфільтрації. Встановгенного епітелію і клітини Сертолі, як правило з лено діагноз екскреторно-обтураційної неплідносознаками дистрофічних змін (Фіг.3). ті. Прогноз відновлення фертильності В сім'яних канальцях із значним порушенням сприятливий. Виконана операція епідідімовазоасперматогенезув базальній частині сустентоцитів настомозу 14.03.02. Через три місяці в спермограспостерігаються гранули ліпідів, які досягають мі виявлені сперматозоїди 1 106-1,5 106/мл. значних розмірів і утворюють великі жирові вакуоПриклад 2 лі, а цитоплазма цих сустентоцитів характеризуХворий У., і.х. №2217, 22 років, безплідний ється різким розширенням цистерн гладкої ендопшлюб протягом З років. В спермограмі: клітин спелазматичної сітки (Фіг.4). рматогенезу та сперматозоїдів не виявлено; еритГістологічне дослідження роцити відсутні, лейкоцити 0-1 в полі зору, фруктоПри гістологічному дослідженні в просвітах сіза 14ммоль/л. При лабораторних дослідженнях м'яних канальців, як правило, спостерігають хаоурогенітальної інфекції не виявлено. Гормональні тично розташовані клітини сперматогенного епітедослідження: ФСГ, ЛГ, пролактин тестостерон - в лію із зруйнованими міжклітинними контактами, нормі. Виконана інцизійна біопсія правого яєчка. часто відірвані від базальної мембрани сім'яного Біопсійний матеріал досліджений згідно запропоканальця. Компоненти інтерстиційної сполучної нованого способу. Цитологічне дослідження, викотканини, при цьому, характеризуються набряком, нане протягом 1 години після забору матеріалу: в іноді із деструктивними змінами (Фіг.5). клітинному осаді зрілі сперматозоїди не виявлені. Гістологічне заключения про збереженість або Встановлений діагноз секреторної неплідності блок сперматогенезу підтверджено електронноміПрогноз відновлення фертильності несприятликроскопічно у 48 випадках із 52, що становить вий. Подальше електронномікроскопічне дослі92,3%. Інтерстиційний компонент виявлено у 8 дження підтвердило результати цитологічного дохворих із 48, що складає 17%. Судинний компослідження про наявність блоку сперматогенезу: нент визначено у 5 пацієнтів із 42, що становить блок сперматогенезу на рівні сперматоцитів II по1,9%. Ендокринний компонент визначено у 10 парядку, судинний компонент (стінки судин потовщецієнтів із 25, що складає 40%. ні та вогнищево склерозовані), інтерстиційний Інформативність гістологічного дослідження компонент у вигляді набряку інтерстицію з незначпро наявність чи відсутність блоку сперматогенезу ними геморагіями та слабкою дифузною лімфоїдбула такою як і інформативність цитологічного ноклітинною інфільтрацією. Призначено лікування: дослідження, і становила 93,2%. Відносно стану пенток-сифілін по 800мг протягом місяця; магнітовсіх інших компонентів тканини яєчка: інтерстицію, терапія (10-15 сеансів через день), аєвіт 1 капсула судин, клітин Лейдіга, інформативність гістологічна день протягом місяця. ного дослідження була досить низькою. Таким чином, запропонований спосіб дозвоТаким чином, електронномікроскопічне досліляє, з одного боку, шляхом цітологічного дослідження є провідним для оцінки якісних змін струкдження осаду з мінімальної кількості біопсійного тури тканини яєчка при чоловічій неплідності. Обматеріалу швидко отримувати попередній резульсяг та достовірність інформації, яку дає тат про стан сперматогенезу, з іншого боку - проелектронна мікроскопія про стан сперматогенезу, ведення електронно мікроскопічного дослідження інтерстиційної сполучної тканини, в тому числі клісамого біоптату дає найбільш повну інформацію тин Лейдіга, та судин в поєднанні з мінімальною про стан всіх компонентів тестикулярної тканини, кількістю матеріалу, необхідного для дослідження, що може бути використано при виборі методів робить цей метод найбільш доцільним і важливим, лікування чоловічої неплідності. як для хворого, так і для лікаря морфологічним Спосіб діагностики форми чоловічої непліднодослідженням тестикулярної тканини. сті, що включає попереднє цитологічне дослідженНаводимо приклади практичного застосування ня клітинного осаду та наступне електронномікрозапропонованого способу. скопічне дослідження біоптату яєчка з виготовленням напівтонких і ультратонких зрізів 7 76171 8 рекомендується як оптимальний для діагностичної reliable diagnostic modalities? // Br. J. Urol. - 1997. практики. N.79. - P.445-448 Джерела інформації, прийняті до уваги при ек2. Rosenliind В., Kvist U., Ploen L., Rozell B.L., спертизі: Sjoblom P., Hillensjo T. A comparison between open 1. Odobas О., Urgas S., Aydin S., Yilmas Y., and percutaneous needle biopsies in men with Atilla Μ.Κ. Assessment of testicular cytology by fineazoospermia //Hum. Reprod. - 1998. -N.13. -P.1266needle aspiration and the imprint technique: are they 1271 (прототип). Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601