Комбінована фармацевтична композиція та методи лікування захворювань сечостатевої системи

Реферат: Винахід стосується лікарського засобу, до складу якого входять: а) антитіла до простатоспецифічного антигену в активованій потенційованій формі, отриманій шляхом повторюваних послідовних розведень і багаторазових струшувань кожного розведення за гомеопатичною технологією, та б) антитіл до ендотеліальної NO-синтази в активованій потенційованій формі, отриманій шляхом повторюваних послідовних розведень і багаторазових струшувань кожного розведення за гомеопатичною технологією. Крім того, винахід стосується способів лікування доброякісної гіперплазії передміхурової залози та еректильних дисфункцій. UA 107837 C2 (12) UA 107837 C2 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ Даний винахід відноситься до комбінованих лікарських засобів та методів лікування захворювань сечостатевої системи. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Винахід відноситься до медичної галузі і може бути використаний для лікування захворювань сечостатевої системи, у тому числі хвороб передміхурової залози, доброякісної гіперплазії передміхурової залози І і II ступенів, гострого та хронічного простатиту та еректильних дисфункцій буд-якого іншого походження. Оксид азоту (NO) - це газоподібна молекула, котра є сигналізатором різних біологічних процесів. Ендотелізльний NO є ключовою молекулою в регуляції судинного тонусу, тому, її зв'язок з різного роду судинними захворюваннями вже є давно визнаним фактом. NO гальмує багато процесів, котрі відомі своєю участю у формуванні атеросклеротичної бляшки, в тому числі адгезію моноцитів, тромбоцитів агрегації і проліферації гладко м'язових судинних клітин. Іншою важливою роллю ендотеліального NO є захист стінок судин від окисного стресу, викликаного власними продуктами метаболізму і продуктами окислення ліпідів і ліпопротеїнів. Ендотеліальні дисфункції формуються вже на дуже ранніх стадіях атеросклерозу. Тому, ймовірніше за все, що саме дефіцит локального NO є основною причиною прискорення розвитку атеросклерозу у людини. На додаток до своєї ролі в судинному ендотелії, наявність NO продемонструвала свою здатність модулювати метаболізм ліпопротеїнів. Випадки негативної кореляції були зафіксовані між плазмовими концентраціями продуктів метаболізму NO та плазмою загалом та рівнями холестерину Ліпопротеїнів Низької Щільності [ЛПНЩ], в той час коли ліпопротеїни високої щільності [ЛПВЩ] покращують функцію судин у гіперхолестеринемічних (з підвищеним вмістом холестерину у крові) суб'єктів дослідження. Втрата NO має значний вплив на розвиток хвороби. Цукровий діабет, пов'язаний з високим рівнем захворюваності і смертності, насамперед, спричиняється швидким розвитком атеросклерозу. Крім того, звіти показують, що діабетики мають порушену функцію легень. Було висловлено припущення, що резистентність до інсуліну призводить до запалення дихальних шляхів. Хабіб (Habib) та співавт., "Вимірювання окису азоту у крові та легенях, чи існує зв'язок?» журнал з Фізіології 2007р.; З (1). Оксид азоту синтезується в ендотелії з L-аргініну за допомогою синтази окису азоту (NOсинтаза). NO-синтаза зустрічається у різних ізоформах, у тому числі у структурній формі (cNOs) та індукованій формі (iNOs). Структурна форма представлена у звичайних ендотеліальних клітинах, нейронах та деяких інших тканинах. Простатоспецифічний антиген (ПСА) - це антиген виявлений в 1970-х та представлений в урологічній практиці близько 15 років тому назад. Незважаючи на те, що дане поняття широко використовується в якості найбільш чутливого маркера, доступного на сьогоднішній день, для скринінгу, діагностики і моніторингу розвитку раку простати у людей, а також реакції на лікування, відкриття останніх десятиліть однозначно довели, що оригінальний антиген ПСА вже не є простатоспецифічним, тим самим, вони пролили світло на багатофункціональну поведінку серинової протеази. Родина генів залозистого каллікреїну складається з трьох генів, локалізованих на хромосомі 19q13,3-q13,4; локус гену КЛК-3 кодує позаклітинні серинові протеази ПСА, який також був названий людським залозистим калікреїном З(лКЗ). У простаті, експресія ПСА локалізується у диференційованих, секреторних стовпчастих клітинах залозистого епітелію. З точки зору біохімії, саме 33 кДа одноланцюгового глікопротеїну з хімотрипсин-подібною активністю, потребує пост-трансляційної обробки для досягнення його повної протеолітичної дії. Незважаючи на те, що ПСА виробляється у епітеліальних клітинах простати у відносно величезних кількостях і його регуляція знаходиться під контролем андрогенів і прогестинів, у нас все ще не достатньо достовірних даних про те чому така експресія цієї молекули є настільки насиченою і яку роль вона грає у фізіології передміхурової залози. На сьогоднішній день, однією з найбільш розповсюджених і загальноприйнятих функцій ПСА є його здатність перетравлювати семіногеліни та фібронектин, котрі присутні у великих концентраціях у спермоплазмі (котра виділяється з сім'яних пухирців), зріджуючи, таким чином, згусток сперми одразу ж після еякуляції. Фізіологічні наслідки розщеплення семіногелінів не відомі, однак дуже добре відомо, що цей процес сприяє підвищенню рухливості сперматозоїдів. Інші дослідники стверджують, що ПСА здатні вивільняти кінін-подібну речовину, яка стимулює скорочення гладких м'язів шляхом перетравлення глікопротеїну присутнього у рідині сім'яних пухирців. Деякі дослідники зображують ПСА в якості інгібітора росту клітин, протиракової/антиангіогенної молекули, або в якості індуктора апоптозу. ПСА має розглядатися 1 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 як "поборювач раку" на тканинному рівні та як "цінний месенжер" (індикатор) на рівні системної циркуляції, що дозволяє використовувати його чи-то для виявлення, чи-то для моніторингу раку. Кілька інших доповідей запропонували ПСА роль протеази білку, що зв'язує інсуліноподібний фактор росту -З (ІФРЗБ-3) через його протеолітичну дію, тим самим, вивільняючи біологічно активний інсуліноподібний фактор росту І (ІФР-І), що попередньо був зв'язаний ІФРЗБ -3. ІФР-І це відомих мітоген багатьох типів клітин, а також фактор ризику розвитку простатиту та раку молочної залози. Було зроблено припущення, що ПСА може активувати латентний трансформуючий фактор росту-ІІ або може розщеплювати рідний паратиреоїдному гормону пептид. (Ε. Π. Діамандіс (Diamandis ЕР). Простатоспецифічний антиген: поборювач раку та цінний месенжер? Клінічні дослідження. Липень 2000 p., 46 (7):896-900). Лікування захворювань передміхурової залози на основі наднизьких доз антитіл до ПСА є досить відомою практикою в даній області (Патент США № 7,582,294). Тим не менш, подібний метод не гарантує достатню терапевтичну ефективність в лікуванні захворювань сечостатевої системи, що супроводжуються проблемами з ерекцією різного походження (Еректильні дисфункції). Лікувальна дія надзвичайно розбавленої (або ННД) форми антитіл потенційованих за гомеопатичною технологією (активована потенційована форма) була виявлена докторомом Олегом Івановичем Епштейном. Наприклад, Патент США № 7,582,294 представляє лікарський засіб для лікування доброякісної гіперплазії передміхурової залози, або простатиту шляхом введення гомеопатично активованої форми антитіл до ПСА. ННД антитіл до γ-інтерферону проявили свою дієвість у лікуванні і профілактиці захворювань вірусної етіології. Дивіться, Патент США № 7,572,441, що, у повному обсязі, зазначається у цій заявці у якості посилання. Даний винахід спрямований на вивчення комбінації лікарського засобу та способів її застосування при лікуванні захворювань сечостатевої системи, у тому числі доброякісної гіперплазії передміхурової залози І та II ступенів, гострого та хронічного простатиту і еректильних дисфункцій різного походження. Рішення даної проблеми представлене у вигляді комбінації лікарського засобу для лікування і профілактики захворювань сечостатевої системи, який містить активовану потенційовану форму антитіл до простатоспецифічного антигену (ПСА) та активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NO-синтази. СТИСЛИЙ ОПИС ВИНАХОДУ За одним аспектом винахід відноситься до комбінації лікарського засобу, котрий складається з а) активованої потенційованої форми антитіла до ПСА та б) активованої потенційованої форми антитіла до ендотеліальної NO-синтази. За своєю модифікацією, зазначена комбінація лікарського засобу, у подальшому, приймає форму твердого носія, у який імпрегнують зазначені активовані потенційовані форми антитіл до ПСА та ендотеліальної NOсинтази. За одним із варіантів, комбінація лікарського засобу представлена у формі таблеток. Передбачається, що до складу комбінації лікарського засобу входить зазначена активована потенційована форма антитіл до ПСА, представлена у формі суміші гомеопатичних розведень С12, СЗО та С200. Окремо зазначено, що ця суміш гомеопатичних розведень імпрегнується у твердий носій. Передбачається, що до складу комбінації лікарського засобу входить зазначена активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази, представлена у формі суміші гомеопатичних розведень С12, СЗО та С200. Окремо зазначено, що ця суміш гомеопатичних розведень імпрегнується у твердий носій. Активована потенційована форма антитіл до ПСА може бути моноклональним, поліклональним або природним антитілом. Особливо відзначено, що активована потенційована форма антитіл до ПСА є поліклональним антитілом. Активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази може бути моноклональним, поліклональним або природним антитілом. Особливо відзначено, що активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази є поліклональним антитілом Даний винахід представляє активовані потенційовані форми антитіл до антигену (-ів), опис послідовностей яких викладено у специфікації та посилання на які зазначені у Переліку патентних формул винаходу. У одному варіанті до складу комбінації лікарського засобу входить активована потенційована форма антитіл до ПСА, отримана шляхом здійснення послідовних сотенних розведень в поєднанні зі струшуванням кожного розведення. У іншому варіанті, до складу комбінації лікарського засобу входить активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази, отримана шляхом здійснення послідовних сотенних розведень в поєднанні зі струшуванням кожного розведення. Окремо розглядається струшування у вертикальному положенні. 2 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В іншому аспекті винахід відноситься до методу лікування захворювань сечостатевої система, за яким передбачається введення хворому а) активованої потенційованої форми антитіл до ПСА та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази у формі комбінованого лікарського засобу. За формою модифікації, комбінація лікарського засобу вводиться перорально у вигляді твердої лікарської форми, яка містить фармацевтично прийнятний носій і зазначену активовану потенційовану форму антитіл до ПСА, імпрегновану у твердий носі, та активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NО-синтази, також імпрегновану у твердий носій. За цим варіантом, зазначеною твердою формою для перорального застосування є таблетки. Варіанти та форми модифікацій надаються. Що стосується способів застосування даного винаходу, то комбінація лікарського засобу може застосовуватися у лікарських формах від 1 до 4, кожна з яких вводиться від одного до шести разів на день. Відповідно до способу застосування даного винаходу, режим прийому зазначеної комбінації лікарського засобу, виглядає наступним чином: По 1 таблетці 1 раз / добу; По 1 таблетці 2 рази / добу, По 1 таблетці 3 рази / добу; По 1 таблетці 4 рази / добу; По 1 таблетці 5 разів / добу; По 1 таблетці 6 разів / добу; 2 таблетки 1 раз / добу, 2 таблетки 2 рази / добу; 2 таблетки 3 рази / добу; 2 таблетки 4 рази / добу; 2 таблетки 5 разів / добу; 2 таблетки 6 разів / добу; 3 таблетки 1 раз / добу; 3 таблетки 2 рази / добу; 3 таблетки 3 рази / добу; 3 таблетки 4 рази / добу; 4 таблетки 1 раз / добу; 4 таблетки 2 рази / добу; 4 таблетки 3 рази / добу. Всі варіанти та модифікації складу винаходу можуть бути використані із зазначеним способом його застосування. Окремо розглядається одночасне застосування комбінації лікарського засобу з іншими активними інгредієнтами. За даним варіантом, схвалено використання активного інгредієнту для лікування захворювань сечостатевої системи. Розглядаються всі варіанти та модифікації. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Визначення винаходу базується на патентних формулах винаходу, перелік яких наведено у кінці цього документу. Виходячи з цих формул, нижче наведений глосарій містить відповідні визначення застосованих у формулах термінів. Термін "антитіло", у тому, значені, у якому він використовується у цьому документі, означає імуноглобулін, який специфічно прив'язується до, і таким чином визначається як зв'язаний з, певною просторовою і полярною організацією іншої молекули. Як зазначено у переліку, антитіла можуть включати в себе повний імуноглобулін або його фрагмент, можуть бути природними, поліклональними або моноклональними, та можуть включати в себе різні класи та ізотипи, такі як IgA, IgD, ІдЕ, lgG1, lgG2a, lgG2b та lgG3, ІдМ. Тоді як їх фрагменти можуть включати в себе Fab, Fv та F (ab')2, Fab' і т.і. Форма однини "антитіло", означає також форму множини цього терміну - "антитіла". Термін "активована потенційована форма" або "потенційована форма" відповідно, що використовуються у цьому документі по відношенню до антитіл означає продукт гомеопатичного потенціювання будь-якого базового розчину антитіл. "Гомеопатичне потенціювання" означає використання методугомеопатії задля наділення відповідної субстанції базового розчину терапевтичною дією гомеопатичного препарату. "Гомеопатичне потенціювання" може включати в себе, здійснення послідовних повторюваних розведень, поєднаних з зовнішніми методами обробки, такими, наприклад, як вертикальне (механічне) струшування. Іншими словами, відповідно до технології виготовлення гомеопатичних препаратів, базовий розчин антитіла піддають здійсненню послідовних повторюваних розведень та багаторазовому вертикальному 3 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіла, передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень 12 30 200 базового матричного розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (С12, С30 та С200) або використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного розчину (матричної 12 30 50 настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 разів відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (С12, С30 та С50). Приклади гомеопатичного потенціювання описані в патентах США № 7,572,441 та 7,582,294, котрі у повній формі та за визначеною цим документом метою, зазначаються у цій заявці у якості посилань. У той час, коли термін "активована потенційована форма" використовується у патентних формулах винаходу, термін "наднизькі дози (ННД)» використовується в прикладах. Термін "наднизькі дози" став професійним терміном в даній галузі шляхом дослідження та використання гомеопатично розведених та потенційованих форм речовини. Термін "наднизька доза" або "наднизькі дози" є взаємозамінними і, в першу чергу, є синонімами терміну "активована потенційована форма", що використовується у патентних формулах винаходу. Іншими словами, антитіло вважається таким, що представлено у "активованій потенційованій формі" або у "потенційованій формі" за умови наявності трьох факторів. Поперше, "активована потенційована" форма антитіла є продуктом процесу підготовки, прийнятого у сфері виготовлення гомеопатичних препаратів. По-друге, "активована потенційована" форма антитіла повинна мати біологічну активність, визначену методами, прийнятими у сучасній фармакології. І, по-третє, біологічна активність, продемонстрована "активованою потенційованою формою антитіла" не може бути обумовлена наявністю молекулярної форми антитіл у кінцевому продукті гомеопатичного процесу. Наприклад, активована потенційована форма антитіла може бути отримана шляхом піддавання базових, ізольованих антитіл в молекулярній формі низці послідовних розведень у поєднанні з зовнішніми впливом, таким як механічне струшування. При зменшенні концентрації, зовнішня обробка, може також супроводжуватися такими процесами, як, вплив ультразвукових, електромагнітних або інших фізичних факторів. В. Швабе (V. Schwabe) "Гомеопатичні препарати", М., 1967 р. Патенти США № 7,229,648 та № 4,311,897, котрі у повній формі та з визначеною цим документом метою, зазначаються у ньому у якості посилань, описують ті процеси, котрі є прийнятними методами гомеопатичного потенціювання в області виготовлення гомеопатичних препаратів. Результатом цієї процедури є рівномірне зменшення базової молекулярної форми антитіл у концентрації молекул. Процедура повторюється до тих пір поки не буде отримана бажана гомеопатична потенція. Для окремого виду антитіла, необхідні гомеопатичні потенції можна визначити шляхом піддавання проміжних розведень біологічним тестам за відповідною фармакологічною моделлю. "Гомеопатичне потенціювання" може включати в себе, здійснення послідовних повторюваних розведень, поєднаних з зовнішніми методами обробки, такими, наприклад, як (механічне) струшування. Іншими словами, відповідно до технології виготовлення гомеопатичних препаратів, базовий розчин антитіла піддають здійсненню послідовних повторюваних розведень та багаторазовому вертикальному струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіла, передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 10012, 10030 та 100200 раз відповідно, що еквівалентно гомеопатичним розведенням С12, С30 та С200 або використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 10012, 10030 та 10050 раз відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (С12, С30 та С50). Приклади отримання бажаної потенції також наведені у патентах США № 7,229,648 та 4,311,897, котрі у повній формі та з визначеною цим документом метою, зазначаються у ньому у якості посилань. Процедура, що застосовується по відношенню до "активованих потенційованих" форм антитіл та описується в цьому документі, більш детально представлена далі. Існувало дуже багато протиріч щодо лікування суб'єктів дослідження гомеопатичними препаратами. Хоча даний винахід і оснований на застосуванні прийнятих гомеопатичних процесів для отримання "активованих потенційованих" форм антитіл, з точки зору дії на суб'єктів дослідження, даний винахід посилається не лише на гомеопатію. Винахідником цього 4 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 способу застосування було несподівано виявлено і, у прийнятій фармакологічній моделі, в повній мірі продемонстровано, що розчинник, у кінцевому рахунку отриманий в результаті здійснення декількох послідовних розведень базової молекулярної форми антитіла, має чітко встановлену дію, котра жодним чином не пов'язана з наявністю слідів молекулярної форми антитіл у цільовому розведені. "Активована потенційована" форма антитіл, мова про яку іде у цьому документі, була перевірена на біологічну активність за допомогою прийнятних фармакологічних моделей, а саме експерименту у пробірці ("in vitro") або експерименту на живих організмах ("in vivo"), використовуючи придатну тваринницьку модель. Експерименти зазначені нижче демонструють біологічну активність за обраними моделями. Окрім цього, результати клінічних досліджень на людях, котрі також представлені у цьому документі нижче, також містять докази, що свідчать про те, що дія, що спостерігалася у тваринницькій моделі може бути легко перенесена на терапію, призначену для застосування у людей. Дослідження людського організму також свідчать про наявність "активованих-потеційованих форм", що описуються у цьому документі, для лікування зазначених вище захворювань та розладів, котрі у медичній практиці відносяться до патологічних станів людського організму. Крім того, заявлена "активована потенційована" форма антитіла включає тільки ті розчини або тверді лікарські засоби, біологічну активність котрих не можна пояснити наявністю молекулярної форми антитіла, що залишилася від базового розчину. Іншими словами, хоча і передбачається, що "активована потенційована" форма антитіл може містити сліди базової молекулярної форми антитіла, кваліфікований фахівець в цій області, з будь-якою долею вірогідності, не може записати виявлену у фармакологічних моделях біологічну активність на залишки молекулярної форми антитіл, оскільки концентрація молекулярної форми антитіл, що залишається після здійснення послідовних розведень, є вкрай низькою. Оскільки винахід не обмежений будь-якою конкретною теорією, біологічна активність "активованої потенційованої" форми антитіл даного винаходу, не можна віднести на рахунок базової молекулярної форми антитіла. Перевага надається "активованій потенційованій формі антитіла" у рідкій чи твердій формі, в котрих концентрація молекулярної форми антитіла нижча за ліміт виявлення при застосуванні прийнятних аналітичних методик таких, наприклад, як капілярний електрофорез та Високоефективна Рідинна Хроматографія (ВЕРХ). Особлива перевага надається "активованій потенційованій формі антитіла" у рідкій чи твердій формі, в котрих концентрація молекулярної форми антитіла нижча числа Авогадро. У фармакології молекулярних форм терапевтичних речовин, звичайною практикою є створення кривої "доза-реакція", у якій рівень фармакологічної відповіді відображається в залежності від концентрації препарату з активним компонентом, що вводиться суб'єкту дослідження або перевіряється in vitro. Мінімальний рівень препарату, котрий продукує будь-яку видиму реакцію, називається пороговою дозою. Особливо передбачено, що "активована потенційована" форма антитіл містить молекулярне антитіло, якщо таке передбачено, у концентрації, що нижча за порогову дозу, визначену для молекулярної форми антитіла для даної біологічної моделі. За одним аспектом винахід відноситься до комбінації лікарського засобу, котрий складається з а) активованої потенційованої форми антитіла до ПСА та б) активованої потенційованої форми антитіла до ендотеліальної NO-синтази. Як вже було сказано, кожен з компонентів зазначеного лікарського засобу індивідуально використовується у медичній практиці. Тим не менше, автори цієї патентної заявки несподівано виявили, що використання комбінації цих засобів чудово впливає на ефективність лікування захворювань сечостатевої система. Заявлена комбінація лікарського засобу, до складу якого входить суміш активованих потенційованих форм антитіл до ПАС та до ендотеліальної NO-синтази, забезпечує синергічний лікувальний ефект, що підтверджений застосуванням відповідних експериментальних моделей та проведеними клінічними дослідженнями, результатом яких стала покращена васкуляризація, покращений антипроліферативний ефект та підвищена протизапальна дія. Пропонований медичний засіб сприяє нормалізації функціонування передміхурової залози і нижніх відділів сечовивідних шляхів, поліпшенню динаміки сечовивідних шляхів, зменшенню еректильної дисфункції та нормалізації рівня ПСА. Пропонований продукт може бути використаний не тільки у традиційній терапії, але і для пацієнтів з доброякісною гіперплазією передміхурової залози, які перенесли хірургічне втручання, щоб зменшити розмір передміхурової залози, а також для того, щоб активувати регенеративний та репаративний процеси у таких хворих та знизити вірогідність появи ускладнень після операції. Крім того, пропоноване технічне рішення покращує якість життя пацієнтів з доброякісною гіперплазією передміхурової залози (ДГПЗ), простатитом та іншими захворюваннями передміхурової залози, знижує дизуричні розлади, стимулюючи вегетативні стабілізуючі процеси та покращує властивості генерації сперми. Цей технічний результат обумовлений ендотеліальними захисними властивостями активованої 5 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 високопотенційованої форми антитіла до ендотеліальної NO-синтази, який підвищує антипроліферативну та протизапальну дію активованої потенційованої форми антитіл до ПСА, що досягається впливом активованих потенційованих форм антитіл до ендотеліальної NOсинтази на трансдукцію внутрішньоклітинних сигналів під час їх одночасного і спільного використання у складі комплексного препарату. У той же час, пропонований винахід характеризується широким спектром терапевтичної дії і може бути використаний при лікуванні різних захворювань сечостатевої системи, що супроводжуються проблемами функціонування передміхурової залози і еректильними дисфункціями, а також у складі комплексної терапії. Даний лікарський засіб розширює арсенал препаратів, що використовуються для лікування і профілактики захворювань сечостатевої системи. В іншому аспекті винахід відноситься до методу лікування захворювань сечостатевої системи, за яким передбачається введення хворому а) активованої потенційованої форми антитіл до ПСА та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази у формі комбінованого лікарського засобу. В одному з варіантів, до захворювань сечостатевої системи входить порушення функціонування передміхурової залози, у тому числі доброякісні гіперплазії І та II ступенів, гострий та хронічний простатит і еректильні дисфункції різного походження. В одному з варіантів під захворюванням сечостатевої системи розглядають порушення функціонування передміхурової залози. За іншим варіантом цього аспекту винаходу під захворюванням сечостатевої системи розглядають доброякісну гіперплазію передміхурової залози. В іншому варіанті цього аспекту винаходу під доброякісною гіперплазією передміхурової залози розглядають доброякісну гіперплазію передміхурової залози II ступеня. В іншому варіанті цього аспекту винаходу під доброякісною гіперплазією передміхурової залози розглядають гострий або хронічний простатит. В іншому варіанті під захворюванням сечостатевої системи розглядають еректильні дисфункції різного походження. Що стосується способів застосування даного винаходу, то комбінація лікарського засобу може застосовуватися у лікарських формах від 1 до 4, кожна з яких вводиться від одного до шести разів на день. Відповідно до способу застосування даного винаходу, режим прийому зазначеної комбінації лікарського засобу, виглядає наступним чином: По 1 таблетці 1 раз / добу; По 1 таблетці 2 рази / добу, По 1 таблетці 3 рази / добу; По 1 таблетці 4 рази / добу; По 1 таблетці 5 разів / добу; По 1 таблетці 6 разів / добу; 2 таблетки 1 раз / добу, 2 таблетки 2 рази / добу; 2 таблетки 3 рази / добу; 2 таблетки 4 рази / добу; 2 таблетки 5 разів / добу; 2 таблетки 6 разів / добу; 3 таблетки 1 раз / добу; 3 таблетки 2 рази / добу; 3 таблетки 3 рази / добу; 3 таблетки 4 рази / добу; 4 таблетки 1 раз / добу; 4 таблетки 2 рази / добу; 4 таблетки 3 рази / добу. В цілях застосування лікарського засобу, що представлений цим винаходом, для лікування захворювань сечостатевої системи, концентрація у ньому активних компонентів представлена у співвідношенні 1:1. Основний спосіб приготування даного лікарського препарату виглядає наступним чином. Як передбачається даним винаходом, представлений лікарський засіб може бути як у твердій, так і у рідкій формі. Кожна з активованих потенційованих форм антитіл, що входять до складу лікарського засобу, готується на основі базової молекулярної форми антитіла із застосуванням прийнятих у гомеопатичній практиці процедур. Базові антитіла можуть бути моноклональними або поліклональними антитілами, отриманими за результатами знаних та 6 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 використовуваних процесів таких, наприклад, як ті, що описані в Імунотехнологіях, Г. Фрімель (G. Frimel), M., "Медицина" (Meditsyna), 1987 р., стор. 9-33; "Людські антитіла" "Моноклональні та рекомбіновані антитіла, 30 років потому" Е. Лаффлі (Laffly Ε.), Р. Содойер (Sodoyer R.) - 2005 p. - Том 14. - № 1-2, стор. 33-55, що зазначаються у цьому документі у якості посилань. Моноклональні антитіла можна отримати, наприклад, за допомогою технології гібридоми (моноклонування). Початкова стадія процесу включає імунізацію, що основана на принципах, що розвиваються вже під час виготовлення поліклональних антисироваток. На подальших етапах роботи здійснюється продукування гібридних клітин, що генерують клони антитіл однакової структури. їх індивідуальне виведення здійснюється з використанням тих же методів, що і у випадку підготовки поліклональної сироватки. Поліклональні антитіла можна отримати за допомогою активної імунізації тварин. Для цього, придатним для цього тваринам (наприклад, кролям) проводять серію ін'єкцій відповідного антигену, а, саме ПСА та ендотеліальної NO-синтази. Імунна система тварин генерує відповідні антитіла, які збираються у тварин відомим всім способом. Ця процедура дозволяє виготовити моноспецифічну сироватку багату антитілами. За бажанням, сироватку, що містить антитіла можна очистити, наприклад, за допомогою афінної хроматографії, фракціонування шляхом осаджування солей або іонно-обмінної хроматографії. В результаті, очищена, збагачена антитілами сироватка може бути використана в якості базового матеріалу для виготовлення активованої потенційованої форми антитіл. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компоненту передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного розчину антитіл розведених у 10012, 10030 та 100200 раз відповідно, що еквівалентно гомеопатичним розведенням С12, С30 та С200. Для підготовки твердої лікарської форми, твердий носій обробляється необхідним розведенням, отриманим за допомогою відповідного гомеопатичного процесу. Для отримання єдиного блоку лікарського засобу, що складається з комбінації винаходу, масу носія імпрегнують кожним окремим розведенням. Для підготовки бажаної комбінації лікарського засобу, підходять обидва способи імпрегнації. За обраною модифікацією, базовим матеріалом, що використовується для виготовлення активованої потенційованої форми, до складу якої входить комбінація даного винаходу, є поліклональні антитіла до ПСА та ендотеліальної NO-синтази, а саме - базовий (матричний) розчин концентрацією від 0,5 до 5,0 мг/мл, котра використовується для подальшого виготовлення активованих потенційованих форм. Для приготування лікарського засобу, переважно, використовуються поліклональні антитіла ПСА та ендотеліальної NO-синтази. Поліклональні антитіла ендотеліальної NO-синтази отримуються через використання ад'юванту у якості імуногенна (антигена) для імунізації кролів та цілісної молекули бичачої ендотеліальної NO-синтази наступної послідовності: 7 UA 107837 C2 8 UA 107837 C2 9 UA 107837 C2 10 UA 107837 C2 Поліклональні антитіла ендотеліальної NO-синтази можна отримати використовуючи цілісну молекулу людської ендотеліальної NO-синтази, за наступною послідовністю: 11 UA 107837 C2 12 UA 107837 C2 13 UA 107837 C2 14 UA 107837C2 Поліклональні антитіла ендотеліальної NO-синтази також можна отримати використовуючи фрагмент ендотеліальної NO-синтази, за однією з наступних послідовностей: 5 10 15 Прикладом процедури підготовки стартових поліклональних антитіл до синтази N0 може слугувати процедура описана далі. За 7-9 днів до забору крові, кролям проводять від 1 до Зх внутрішньовенних ін'єкцій потрібного антигену, щоб збільшити рівень поліклональних антитіл в системі кровообігу. При імунізації, беруться зразки крові для перевірки рівня антитіл. Як правило, максимальний рівень імунної реакції розчинного антигену досягається протягом 40-60 днів після першої ін'єкції антигену. По закінченні першого циклу імунізації, у кролів починається 30-денний реабілітаційний період, після якого проводиться повторна імунізація ще 1-3 внутрішньовенними ін'єкціями. Для отримання антисироватки, що містить потрібні антитіла, кров імунізованих кролів збирають та поміщають в 50 мл центрифужні пробірки. Згустки продукту, що утворюються на стінках пробірок видаляються дерев'яною лопаткою, і стрижень поміщають в згусток по центру пробірки. Потім, кров на одну ніч поміщають в холодильну камеру при температурі близько 4 °C. Наступного дня, згусток на лопатці видаляють, а рідину, що залишилася центрифугують 15 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 протягом 10 хвилин при 13000 обертів за хвилину. Надосадова рідина є цільовою антисироваткою. Отримана антисироватка, як правило, жовтого кольору. 20 % NaN3 (вагова концентрація) додається до антисироватки до кінцевої концентрації 0,02 % і, до використання, зберігається в замороженому стані при температурі -20° С або без NaN3 - при температурі -70° С Для сепарації цільових антитіл до синтази NO з антисироватки, використовується наступна послідовність твердофазної абсорбції: (а) 10 мл антисироватки кролів двічі розбавляють 0,15 Μ NaCI, після чого додають 6,26 г Na2SO4, перемішують і витримують протягом 12-16 годин при температурі 4° С; (б) Осад видаляється центрифугуванням, розводять в 10 мл фосфатного буферного розчину і діалізують у тому ж розчині протягом ночі при кімнатній температурі; (в) Після видалення осаду, розчин наноситься на стовпчик ДЕАЕ-целюлози збалансований фосфатним буферним розчином; (г) Фракція антитіла визначається шляхом вимірювання оптичної щільності елюату при 280 нм. Виділені неочищені антитіла очищають за допомогою афінної хроматографії додаючи отримані антитіла синтази N0, розташовані на нерозчинній матриці хроматографічного носія, з подальшим вивільненням концентрованими водними розчинами солей. Отриманий, в результаті, буферний розчин використовується в якості стартового розчину для процесу гомеопатичних розведень, який використовується для підготовки активованих потенційованих форм антитіл. Переважна концентрація стартового матричного розчину антиген-очищених поліклональних антитіл кролика до ендотеліальної NO-синтази становить 0,5-5,0 мг/мл, бажано 2,0-3,0 мг/мл. Поліклональні антитіла ПСА можна отримати за тією ж методологією, що описується для отримання поліклональних антитіл ендотеліальної NO-синтази через використання ад'юванту. У якості імуногенна (антигена) для імунізації кролів може бути використана цілісна молекула людського ПСА наступної послідовності: 16 UA 107837 C2 Полікпональні антитіла ПСА, також, можна отримати використовуючи фрагмент ПСА, за однією з наступних послідовностей: 17 UA 107837 C2 18 UA 107837 C2 5 10 Активовану потенційовану форму антитіл кожного компоненту комбінації можна отримати шляхом гомеопатичного потенціювання використовуючи базовий розчин. Як правило, застосовується метод пропорційного пониження концентрації, котрий передбачає серійне розведення 1 частини кожного попереднього розчину (починаючи з базового) в 9 частинах (для десяткового розведення), або в 99 частинах (для сотенного розведення), або в 999 частинах (для тисячних розведень) нейтрального розчинника, починаючи з концентрації базового розчину антитіл в розчиннику, переважно, водної чи водно-спиртової суміші, в об'ємі від 0,5 до приблизно 5,0 мг/мл, в поєднанні з зовнішнім впливом. Як правило, під зовнішнім впливом розуміють багаторазове вертикальне струшування (динамізацію) кожного розведення. Для кожного подальшого розведення до моменту досягнення необхідного рівня активності, або фактору розведення, 19 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 використовуються окремі контейнери. Цей метод є загальноприйнятим у гомеопатичній практиці. Для прикладу, дивіться, В. Швабе (V. Schwabe) "Гомеопатичні лікарські засоби", М., 1967 р., стор. 14-29, що зазначається у цьому документі у якості посилання. Наприклад, для приготування 12-сотенного розведення (позначається С12), одна частина базового матричного розчину антитіл ПСА концентрацією 3,0 мг/мл розбавляють в 99 частинах нейтрального водного або водно-спиртового розчину (переважно, 15 % етилового спирту), а потім багато разів (10 і більше) струшують у вертикальному положенні, щоб створити перше сотенне розведення (позначається як С1). Друге сотенне розведення (С2) отримують з 1-го сотенного розведення С1. Для підготовки 12-го сотенного розведення (С12) ця процедура повторюється 11 разів. Таким чином, 12-е сотенне розведення (С12) - це розчин отриманий у результаті 12 серійних розведень однієї частини базового матричного розчину антитіл концентрацією 3,0 мг/мл у 99 частинах нейтрального розчинника в різних контейнерах, що еквівалентний сотенному гомеопатичному розведенню С12. Аналогічні процедури з відповідними коефіцієнтом розбавлення проводяться для отримання необхідних розведень. Для перевірки активності проміжні розведення можна перевірити використовуючи будь-яку, необхідну вам, біологічну модель. Переважними активованим потенційованими формами для антитіл, що входять до складу комбінації винаходу, є суміш розведень С12, С30 та С200 для кожної активованої потенційованої форми. При використанні суміші різних гомеопатичних розведень (в основному сотенних) активної речовини у якості біологічно активних рідких компонентів, кожен компонент лікарського засобу (наприклад, С12, С30, С50 С200) готується окремо відповідно до вище згаданої процедури до моменту отримання від наступного до останнього розведення (наприклад, до моменту отримання С11, С29 та С199 відповідно), а потім по одній частині кожного компоненту додають до контейнерів, дотримуючись складу суміші, і змішують з необхідною кількістю розчинника (наприклад, з 97 частинами для сотенного розведення). Можна використовувати активну речовину як суміш різних гомеопатичних розведень, наприклад, десяткових та/або сотенних (D20, С30, С100 або С12, С30, С50 або С12, С30, С200 і т.д.), ефективність яких визначається експериментально, шляхом тестування розведення у відповідній біологічній моделі, наприклад, у тих моделях, котрі описані у розділі "Приклади" цього документу. В ході зниження потенціювання та концентрації, вертикальне струшування може бути замінено зовнішнім впливом ультразвуку, електромагнітних полів або будь-якого аналогічного зовнішнього чинника, прийнятного до використання у гомеопатичній практиці. Тверду лікарську форму лікарського засобу, представленого даним винаходом, можна приготувати, імпрегнуючи у твердий фармацевтично прийнятий носій суміш активованої потенційованої форми водного або водно-спиртового розчинів активних компонентів, котрі змішують у співвідношенні 1:1:1 та використовують у рідкій лікарській формі. Як альтернатива, носій може бути послідовно іпрегнований кожним необхідним розведенням. Як правило, лікарський засіб у твердій формі готується з гранул фармацевтично прийнятного носія, який попередньо був насичений водним або водно-спиртовим розведенням активованої потенційованої форми антитіл. Тверда лікарська форма може бути в будь-якій формі, відомої у фармацевтичній галузі, а саме, у формі таблеток, капсул, пастилок і т.д. У якості неактивних фармацевтичних інгредієнтів можна використовувати глюкозу, сахарозу, мальтозу, крохмаль, ізомальтозу, ізомальт та інші моно-оліго-і полісахариди, використовувані при виробництві фармацевтичних препаратів, а також технологічні суміші зазначених вище неактивних фармацевтичних інгредієнтів з іншими фармацевтично прийнятними наповнювачами, такими, наприклад, як ізомальт, кросповідон, цикламат натрію, натрію сахарин, безводна лимонна кислота і т.д., у тому числі мастильні матеріали, розпушувачі, сполучні речовини і барвники. Переважними носіями є лактоза та ізомальт. До складу фармацевтичної лікарської форми можуть додатково входити стандартні фармацевтичні наповнювачі такі, наприклад, як мікрокристалічна целюлоза і стеарат магнію. Приклад отримання стандартної твердої лікарської форми представлено нижче. Для підготовки твердої форми для перорального застосування, 100-300 мкм гранули лактози імпрегнують з водними або водно-спиртовими розчинами активованої потенційованої форми антитіл до ПСА та активованої потенційованої форми антитіл ендотеліальної NO-синтази у співвідношенні 1 кг розчину антитіл на 5 або 10 кг лактози (від 1:5 до 1:10). Щоб здійснити імпрегнування, гранули лактози піддають насиченню зрошенням в псевдозрідженій киплячій бані (наприклад, "Huttlin Pilotlab", виробництва компанії Huttlin GmbH) з наступним сушінням за допомогою нагрітого потоку повітря при температурі нижче 40 °C. Певна вирахувана кількість висушених гранул (від 10 до 20 UA 107837 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 34 вагових частин), насичених активованою потенційованою формою антитіл поміщають в змішувач і змішують з 25-45 ваговими частинами "ненасиченої" чистої лактози (використовується в цілях скорочення витрат, спрощення і прискорення технологічного процесу без зниження ефективності лікування), разом з 0,1-1 вагових частин стеарат магнію, і від 3 до 10 вагових частин мікрокристалічної целюлози. Отриману таблетовану масу рівномірно змішують та таблетують методом прямого напівсухого пресування (наприклад, під пресом для таблетування Корша - XL 400), щоб сформувати від 150 до 500 мг пігулки круглої форми, масою переважно 300 мг. Після таблетування, отримуємо 300 мг таблетки насичені водно-спиртовим розчином (3,0-6,0 мг/таблетка) у поєднанні з активованою потенційованою формою антитіл. Кожен компонент комбінації, що використовується для імпрегнування носія представлений у формі суміші сотенних гомеопатичних розведень, переважно, С12, СЗО та С200. Оскільки винахід не обмежується будь-якою конкретною теорією, вважається, що активована потенційована форма антитіл, описана у цьому документі, не містить молекулярної форми антитіл в кількості, достатній для біологічної активності, котра є характерною для такої молекулярної форми. Біологічна активність комбінованого препарату (комбінації лікарського засобу), представленого цим винаходом наочно продемонстрована в доданих до цього документу прикладах. Далі винахід ілюструється на прикладах. ПРИКЛАДИ Приклад 1. В ході експериментального дослідження проводилася оцінка ефективності поліклональних активованих потенційованих афіно очищених на основі антигена кролячих антитіл до простатоспецифічного антигену (Антит-ПСА) та ендотеліальної NO-синтази (Антит-eCNO) у наднизьких дозах (ННД), отриманих розведенням базового матричного розчину (2,5 мг/мл) у 12 30 200 100 , 100 , 100 раз, що еквівалентно суміші сотенних гомеопатичних розведень С12, С30, С200 (ННД Антит-ПСА + Антит-eCNO) на базі моделі доброякісної гіперплазії передміхурової залози (ДГПЗ) У Щурів. ДГПЗ є одним з найпоширеніших урологічних захворювань у чоловіків. Ризик його розвитку збільшується з віком: близько 10 % чоловіків старше 40 років мають ДГПЗ, а після 60 років їх число збільшується до 30-40 %. Доброякісна Гіпоплазія Простати може бути визначена як гіперплазія тканини передміхурової залози, що супроводжується проблемним сечовипусканням (у тому числі підвищеною частотою сечовипускання, несправжніми позивами, ніктурією, слабким або переривчастим потоком сечі, і відчуттям неповного випорожнення сечового міхура). Симптоми ДГПЗ істотно впливають на якість життя пацієнтів. Це прогресуюча хвороба, і без правильного лікування вона може призвести до таких серйозних ускладнень як гостра затримка сечі, порушення циклу сечовипускання, ниркова недостатністі. Однією з моделей ДГПЗ у гризунів є гормон-індуковане запалення передміхурової залози, що викликає її розширення. Щоб добитися цього, гризунам проводять процедуру гіперпролактинемії, вводячи сульпірид в розмірі 40 мг/кг протягом 60 днів внутрішньочеревно (В.Ф. Коппенолле (Coppenolle V.F.) та співав. Вплив гіперпролактинемії на ріст простати щурів: свідчення андрогенової залежності //Американський журнал з фізіології, ендокринології, метаболізму, 2001. 280: Випуски 120-129). Для дослідження ефективності ННД Антит-ПСА + Антит-eCNO на моделі доброякісної гіперплазії передміхурової залози (ДГПЗ) у щурів, було використано 30 щурів-самців лінії Вістар (віком -8 місяців, вагою - 600-650 г). Десять щурів були інтактними. Решті індукували гіперплазію передміхурової залози (вводили сульпірид внутрішньочеревно в кількості 40 мг/кг протягом 60 днів) і одночасно з сульпіридом, дистильовану воду, внутрішньошлунково (контрольна група, η = 10; 10 мл/кг) або ННД Антит-ПСА + Антит-eCNO (п = 10; 10 мл/кг). Через 60 днів, замірювали ваговий коефіцієнт передміхурової залози (тобто, співвідношення між вагою передміхурової залози і вагою гризуна), об'єм та щільність простати, стромальноепітеліальне співвідношення в простаті (значення, що представляє співвідношення між сполучною та видільною тканинами органу), а також концентрацію в крові рецепторів пролактину (непрямий показник гіперпролактинемії). В результаті ін'єкції сульпіриду, у щурів була виявлена гіперпролактинемія (рівень рецепторів пролактину, контролюючих концентрацію гормонів пролактостатину та росту, збільшився в контрольній групі на 83,3 % в порівнянні з інтактною групою), тим самим, викликаючи збільшення вагового коефіцієнту простати на 51,9 % (р 4 мл/с та ^ 15 мл/с та мінімальним обсягом залишкової сечі -125 мл, рівнем ПСА < 4 нг/мл. Необхідним критерієм включення була відсутність прийому наступних препаратів: фінастерид, дутастерид або інший експериментальний препарат за 6 місяців до включення в дослідження, а1-5 адренорецепторів і трав'яних ліків за 4 тижні до включення в дослідження, будь-яких інгібіторів фосфодіестерази 5го типу та інших препаратів, що використовуються для лікування еректильної дисфункції за 4 тижні до включення в дослідження. У дослідження не включали пацієнтів, при лікуванні яких застосовували інвазивні методи лікування ДГПЗ, а саме: трансуретральну резекцію передміхурової залози, термотерапію, трансуретральну голково абляцію, стент ангіопластика та інші методи лікування; пацієнтів із злоякісними онкологічними захворюваннями, гострими затримка сечовипускання, з каменями у сечовому міхурі, уретрою, хворобою Маріона, інфекціями сечостатевої системи у фазі активного запалення та іншими захворюваннями. Клінічна ефективність лікарського засобу оцінювалася за показниками поліпшення клінічних симптомів нижніх сечових шляхів, оцінюваними за допомогою анкети-шкали МШСПП (Міжнародної шкали симптомів порушення простати), на основі параметрів сечовипускання (максимальна і середня швидкість потоку сечі, обсяг сечовипускання, об'єм залишкової сечі) і об'єму передміхурової залози на основі даних трансуретрального ультразвукового дослідження (ТУЗД); також еректильна функція оцінювалася на основі даних, отриманих за результатами обробки анкет МІЕФ (Міжнародний індекс еректильної функції). Результати дослідження наведені в таблицях 2 і 3. Таблиця 2 ННД Антит-ПСА Сер. знач., через 12 тижнів Δ Сер. знач. Сер. знач. Сер. знач., через 12 тижнів Δ Сер. знач. 17,8 11,9 -5,9 16,0 10,5 -5,6 3,4 2,4 -1,0 3,4 2,3 -1,1 17,8 18,6 0,8 17,5 18,9 1,4 16/19 (84,2) 10,8 13,1 2,2 15/21 (71,4) 11,7 13,7 2,0 15/19 (78,9) 5,8 7,1 1,3 18/21 (85,7) 5,8 7,1 1,3 10/19 (52,6) 218,6 206,8 -11,8 15/21 (71,4) 203,7 252,0 48,3 15-19 (78,9) 23,6 19,4 -4,3 14/21 (66,6) 19,1 14,1 -5,0 18/19 (94,7) 55,9 48,9 -7,0 15/21 (71,4) 57,0 52,4 -4,6 1 n/N(%) Сер. знач. Показник МШСПП Показник якості життя Показник МІЕФ Макс. показник сечі, мл/с Сер. показник сечі, мл/с 0, (Обсяг сечовипускання, мл). 30, мл (Залишковий обсяг сечі) 3 ОП, см (Об'єм простити) ННД Антит-ПСА+ННД Антит-eCNO 19/19 (100,0) 19/19 (100,0) 2/19 (10,5) 1 n/N(%) 20/21 (95,2) 20/21 (95,2) 4/21 (19,0) 1 - (п) - чисельник, котрий позначає кількість пацієнтів, у яких спостерігалося поліпшення стану, (N) - знаменник, означає загальну кількість пацієнтів, включених у дослідження. 23 UA 107837 C2 Таблиця 3 Динаміка підшкали (SD) симптомів непрохідності та подразнення, та питання 7 анкети МШСПП. ННД Антит-ПСА M±SD Візит 1 M±SD Візит2 Симптоми непрохідності Симптоми подразнення 7-е питання 2 Непрохідність, % 2 Подразнення, % 2 7-е питання, % ННД Антит-ПСА+ННД Антит-eCNO M±SD Візит 1 M±SD Візит2 10,0±3,02# 6,5±2,81*** 8,2±2,96 6,0±3,39** 7,5±2,21& 5,3±1,90*** 7,8±2,16& 4,5±2,34*** 2,1±0,78 1,9±0,75 -33,4±26,85 -28,2±1730 -2,0±49,61## 2,3±0,90 1,4±0,98*** -25,2±34,50 -40,3±30,35 -37.7±39.23 * - р