Спосіб моделювання ревматоїдного артриту

Реферат: Спосіб моделювання ревматоїдного артриту включає підшкірне введення речовин антигенів альбуміну і повного ад'юванту Фрейнда. Додатково одноразово підшкірно вводять колаген II типу в кількості 0,3-1,0 мг/кг маси тіла тварини. UA 114862 U (54) СПОСІБ МОДЕЛЮВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ UA 114862 U UA 114862 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до медицини, а саме ревматології, і може бути використана для моделювання ревматоїдного артриту. Відомий спосіб моделювання ревматоїдного артриту у тварин шляхом підшкірного введення повного ад'юванту Фрейнда (ПАФ) і подальшого одногодинного щоденного іммобілізаційного стресу з 14-ї по 28-у добу [1]. Недоліком відомого способу є те, що після одноразового введення ПАФ в організмі розвивається неспецифічний аутоімунний процес, який не сприяє розвитку аутоімунного ревматоїдного артриту, а іммобілізаційне стресування лише згладжує прояви гострої фази захворювання. Найближчим до способу, що заявляється, є спосіб моделювання експериментального ревматоїдного артриту шляхом підшкірного введення, як антигенів, овальбуміну й ПАФ в дві зони в ділянці колінного суглоба і внутрішньовенного введення папаїну, а через 12 діб повторного внутрішньосуглобового введення овальбуміну з фізіологічним розчином [2]. Недоліком відомого способу є те, що розвиток аутоімунного процесу відбувається за рахунок неспецифічного антигена, а використовування папаїну не дозволяє відділити аутоімунне пошкодження від ферментного. Ще одним недоліком можна вважати важкоздійснюване внутрішньосуглобове введення овальбуміну з фізіологічним розчином в дозі 5 мг/мл. В основу корисної моделі поставлено задачу створення способу моделювання ревматоїдного артриту, який відтворює аутоімунне запалення суглобів з ознаками ревматоїдного артриту, з підвищеною надійністю моделювання при використовуванні тварин різних видів та ліній, зі скороченням часу експерименту. Поставлена задача вирішується тим, що в способі моделювання ревматоїдного артриту, який включає одноразове введення бичачого сироваткового альбуміну (БСА) і повного ад'юванту Фрейнда (ПАФ), згідно з корисною моделлю, додатково одноразово підшкірно вводять колаген II типу в кількості 0,3-1,0 мг/кг маси тіла тварини. Спосіб реалізують таким чином. Експериментальній тварині за допомогою одноразових шприців об'ємом 2 мл, підшкірно, по черзі, роздільно в різні ділянки тіла, одноразово або дворазово (з перервою 7 днів) вводили колаген II типу в дозах від 0,3 мг/кг до 1,0 мг/кг маси тіла тварини, одноразово бичачий сироватковий альбумін (БСА) в дозі 0,4 мг/кг маси тіла тварини і повний ад'ювант Фрейнда (ПАФ) в дозі 0,1 мг/кг маси тіла тварини. Формування проявів ревматоїдного артриту залежно від дози колагену, що вводиться, спостерігається з 15-ї по 30-у добу експерименту у 100 % експериментальних тварин. Приклад Чотирьом підгрупам статевозрілих самців і самиць білих щурів здійснювали підшкірну ін'єкцію БСА в дозі 0,4 мг/кг маси тіла в область шиї, ПАФ в дозі 0,1 мг/кг маси тіла в область кореня хвоста і колагену II типу під шкіру стегна в наступних дозуваннях: 1 підгрупа - 0,1 мг/кг маси тіла одноразово, II підгрупа - 0,3 мг/кг маси тіла одноразово, III підгрупа - 1,0 мг/кг маси тіла одноразово, IV підгрупа - 0,3 мг/кг маси тіла дворазово з інтервалом 7 днів. Тестування показників реактивності імунної системи (лейкоцитарна формула периферичної крові) і поведінки грумінгу реєстрували через 30 днів після початку імунізації. Грумінг - елемент зоосоціальної поведінки тварин, що характеризує стан комфортності і є послідовністю моторних актів, спрямованих на самоочищення поверхні тіла (чесання, лизання, умивання, обтрушування). Зміни грумінгу спостерігаються як при посиленні стану тривожності тварини, так й при порушенні моторної функції, пов'язаної з больовим синдромом, викликаним аутоімунним ревматоїдним запаленням суглобів. Дані, що характеризують стан імунної системи, наведені в таблиці 1. Таблиця 1 Основні показники периферичної крові щурів до та після формування моделі ревматоїдного артриту Показники крові Групи тварин Лімфоцити, Моноцити, Паличкоядерні, Сегментоядерні, Еозинофіли, % % % % % Інтактні (n=20) 61,0±0,6 3,0±0,1 3,0±0,5 29,0±0,6 4,0±0,2 І (n=20) 58,7±0,9 2,0±0,1 3,0±0,1 32,7±0,8 2,0±0,1* II (n=20) 75,1±0,4* 3,2±0,2 3,1±0,3 17,2±0,7* 1,9±0,3* III (n=20) 88,0±0,2* 3,0±0,1 1,0±0,1* 8,0±0,5* 0,0±0,0* 1 Лейкоцити, Г/л 12,5±0,5 13,1±0,7 21,7±0,6* 38,0±0,5* UA 114862 U Таблиця 1 Основні показники периферичної крові щурів до та після формування моделі ревматоїдного артриту Показники крові Групи тварин Лімфоцити, Моноцити, Паличкоядерні, Сегментоядерні, Еозинофіли, Лейкоцити, % % % % % Г/л IV (n=20) 82,4±0,5* 2,6±0,1 1,0±0,1* 14,1±0,4* 1,1±0,2* 36,6±0,3* Примітка: * - р≤0,05 при порівнянні з інтактними тваринами. 5 10 З таблиці 1 видно, що при ін'єкції колагену II типу у дозі 0,1 мг/кг маси тіла (І підгрупа) лейкоцитарна формула не зазнавала змін в порівнянні з інтактною групою. У решті підгруп в організмі починався специфічний аутоімунний процес. Про це свідчить вірогідне підвищення рівня лімфоцитів і, як наслідок, вірогідне збільшення лейкоцитів. Крім цього спостерігалося зниження кількості паличкоядерних й сегментоядерних клітин. Дані дослідження грумінгової активності наведені в таблиці 2. Як видно з таблиці 2, в І підгрупі щурів грумінгова активність помітно не відрізнялася від фізіологічної норми. В підгрупі щурів, яким вводили 0,3 мг/кг маси тіла колаген II типу, знижувалися такі показники як лизання, чесання й час грумінга. В III та IV підгрупах кількість усіх елементарних грумінгових актів й час грумінгу значно знижувались. Таблиця 2 Основні грумінгові показники у щурів до та після формування моделі ревматоїдного артриту Групи тварин Інтактні (n=20) І (n=20) II (n=20) III (n=20) IV (n=20) Вмивання, е.г.а. 9,2±0,3 10,5±0,6 8,1±0,4 4,5±0,2* 5,6±0,5* Лизання, е.г.а. 7,5±0,2 8,3±0,3 5,6±0,4* 3,8±0,1* 3,5±0,3* Показники грумінга Чесання, Обтрушування, е.г.а. е.г.а. 6,8±0,2 5,0±0,2 6,9±0,5 4,4±0,7 5,3±0,7* 4,0±0,3 5,8±0,1 2,3±0,1* 4,2±0,3* 2,6±0,4* Час, с 160,3±13,1 178,9±12,4 118,8±11,9* 76,3±8,4* 68,5±9,2* Примітка: е.г.а. - елементарний грумінговий акт, *- р≤0,05 при порівнянні з інтактними тваринами. 15 20 25 Переваги способу, що заявляється: підвищення надійності моделювання ревматоїдного артриту у тварин різних видів і ліній практично до 100 %, скорочення часу формування моделі, мінімізація тривалості неспецифічного запалення, яке маскує формування ревматоїдного артриту. Джерела інформації: 1. Пат. RU, № 2305238, G09B 23/28. Способ моделирования ревматоидного артрита / Ярославская государственная медицинская академия. - Заявка № 2005136004/14 от 21.11.2005, Опубл. 27.08.2007, Бюл. № 24. 2. Пат. RU, № 2351021, G09B 23/28. Способ моделирования экспериментального ревматоидного артрита / Федеральное государственное учереждение "Саратовский научноисследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального агенства по высокотехнологичной медицинской помощи". - Заявка № 2007148301/14 от 24.12.2007, Опубл. 27.03.2009, Бюл. № 9. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Спосіб моделювання ревматоїдного артриту, що включає підшкірне введення речовин антигенів альбуміну і повного ад'юванту Фрейнда, який відрізняється тим, що додатково одноразово підшкірно вводять колаген II типу в кількості 0,3-1,0 мг/кг маси тіла тварини. 2 UA 114862 U Комп’ютерна верстка Т. Вахричева Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3