Спосіб комплексної мікробно-тканинної імунізації

1. Спосіб комплексної мікробно-тканинної імунізації, який включає застосування клітин тварин, який відрізняється тим, що в підшкірній жировій клітковині, переважно в нижній частині передньої черевної стінки, індукують мікровогнище запалення шляхом введення гомогенату тканини паренхіматозного органа, ксеногенної підшлункової залози або яєчка тварини. 2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що вводять гомогенат тканини підшлункової залози собаки або свині. 3. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що вводять гомогенат тканини яєчка статевозрілого сам U 2 (13) 1 3 18199 4 ність застосування способу пов'язану з необхіднісвводять гомогенат тканини яєчка статевозрілого тю застосування клітин мишачої меланоми. Іншім собаки чоловічої статі. недоліком способу, який також обмежує його заВ конкретних варіантах застосування способу стосування є завузька сфера впливу, яка розпогомогенат вводять у дозі 0,5мол. всюджується тільки на дисиміновану меланому В конкретних варіантах застосування способу шкіри, та рак нирки. курс лікувального впливу становить від одного до Відомий спосіб імунізації [див. заявку 18 місяців, при цьому повторно гомогенат вводять W02004053072, МПК А61К39/00; C12N5/06; через шість місяців після першої ін'єкції, а третє А61К39/00; C12N5/06; дата публікації 2004-06-24] введення через дванадцять місяців після повторщо включає введення індивідууму з пухлиною поного введення. пуляції дендритних клітин, що піддані частковому При лікуванні хронічних захворювань дітей у дозріванню in vitro, при чому дендритні клітини віці до 10 років гомогенат вводять у дозі 0,3мол. одержують із шкіри, селезінки, кісткового мозку, У випадку застосування консервованих засотімусу, лімфатичних вузлів, пуповинної крові або бів тканини паренхіматозного органу після отрипериферичної крові здорового індивідууму, HLAмання промивають стерильнім фізіологічним розсумісного з індивідуумом, якого лікуватимуть. чином з антибіотиком, заморожують в До недоліків способу слід віднести складність програмному заморожувані зі швидкістю 1отримання дендритних клітин від здорового інди2°С/хвил., зберігають при температурі - 9-10°С до відуума, HLA-сумісного з індивідуумом, якого ліку6 місяців, а перед гомогенізацією розморожують. ватимуть, необхідність їх часткового дозрівання, В конкретних варіантах застосування в способі необхідність їх доставляння безпосередньо в ложе консервованих засобів гомогенат перед введенпухлини після її видалення, або безпосередньо в ням нагрівають до 37°С. пухлину. Людина і вказані види тварин є по відношенню Відомий спосіб імунізації [див. патент Росії один до одного дискордантними видами. Це озна2267326, МПК А61В5/145; А61К35/12; А61К38/20; чає, що в сироватці крові людини в обов'язковому А61Р35/00; А61В5/145; А61К35/12; А61К38/20; порядку присутні природні антитіла, здатні виклиА61Р35/00; (ІРС1-7): А61К38/20; А61В5/145; кати гостре відторгнення трансплантованих ксеноА61К35/12; А61Р35/00, дата публікації 2006.01.10] генних клітин. Велика частина цих антитіл (яка в якому в якості вакцини застосовують 107 клітин становить приблизно 1% сироваткових імуноглоаутологічного пухлинного лізату і вводять підшкірбулінів) розпізнають на ксеногенних клітинах альне паравертебрально в 3 крапки на відстані 3см фа - галактозильний епитоп (клітини людини не один від одної. Введення здійснюють кожні 3 тижекспресують цей епитоп через відсутність в них ні, причому першу і другу вакцинації комбінують з ферменту альфа-1.3-галактозилтрансферази). введенням 470мг беталейкина в передню черевну На основі наявних експериментальних даних стінку. можна вважати, що попадання ксеногенних клітин До недоліків способу слід віднести обмежев організм людини включає роботу наступний імуність застосування способу пов'язану з необхідніснний механізм. тю застосування клітин аутологічного пухлинного 1. Сироваткові антигалактозильни антитіла і лізату. Іншим недоліком способу, який також обкомплемент покривають поверхню ксеногенних межує його застосування є завузька сфера впливу, клітин та індукують процес їх руйнування. яка розповсюджується тільки на дисиміновану ме2. Через взаємодії з Fc-рецепторами і рецепланому шкіри, та рак нирки. торами до компонентів комплементу антигенний Завданням розробки є створення способу матеріал потрапляє в макрофаги і дендритичні комплексної мікробно-тканинної імунізації в якому клітини, завдяки застосуванню нових речовин для імуніза3. Макрофаги і дендритичні клітини презентиції, дій по її здійсненню режимів та параметрів її рують антигенні детермінанти в комплексі з продуздійснення забезпечується різнобічний біостимуктами ГКГ II і І класу Т-хелперам (CD4+) і попередлюючий вплив на організм і організм отримує виникам цитолитичних Т-лімфоцитов (CD8+), ражений імунний захист не тільки від анаеробної відповідно. Взаємодія експресуючих і антиген аутофлори, але й від різних факторів патогенності, презентуючих клітинах костимуляториих молекул з які в безлічі утворяться в штучно створеному мікро відповідними Т - клітинним і мембранними лиганвогнищі внаслідок чого забезпечується лікування дами, а також продуковані цими клітинами імуноста профілактика широкого кола захворювань. тимуляторні цитокіни (ІЛ-12, фактор некрозу пухДля вирішення цього завдання спосіб комплелини (ФНП) -альфа, ІЛ-4 і ін.) здійснюють ксної мікробно-тканинної імунізації передбачає ефективну до стимуляції антиген специфічних застосування клітин тварин. СD4+ - Т-лімфоцитов. Новим в способі є те, що в підшкірній жировій 4. Т-хелпери, активовані ОАГ і ксеноантигенаклітковині, переважно в нижній частині передньої ми, за допомогою продукції цитокінів (ІФ-гамма, ІЛчеревної стінки, індукують мікровогнище запален2 і ІЛ-15 і др) стимулюють функціональну активня шляхом введення гомогената тканини паренхіність клітин, що володіють неспецифічною протиматозного органу, ксеногенної підшлункової залопухлинною активністю (макрофаги, кістковомозкові зи, або яєчка тварини. цитостатичні еффектори, природні цитотоксичні і В конкретних варіантах застосування способу киллерні клітини). Активація цих клітин призводить вводять гомогенат тканини підшлункової залози до гальмування пухлинного зростання і асоціюєтьсобаки або свині. ся з посиленням експресії на клітинах пухлини В окремих варіантах застосування способу продуктів ГКГ. 5 18199 6 5. Пухлинноспецифічні (CD8+) цитолитичні Ткість бурого гною. Гній виділяється протягом 2-3 лімфоцити, а також їх попередники, розпізнають днів, після чого місце ін'єкції гоїться. експресовані на поверхні пухлинних клітин комЗагальна й місцева реакція, виникають у всіх плекси, що складаються з ОАГ і продуктів ГКГ 1 випадках і протікають однотипно, відрізняючись класу, і після контактної і цитокінової костимуляції лише по ступені виразності залежно від імунного з боку активованих Т-хелперів і професійних антистатусу організму. Ефективність лікування залеген-презентируючих клітин вступають у фазу актижить від виду хвороби, її тривалості й віку хворого. вного зростання. Видужання може наступити поступово й при одно6. Висока активність Т-клітинних цитолитичних кратному введенні препарату, але частіше після клонів, направлена проти широкого спектру ОАГ, повторного введення (через 6 місяців) або навіть приводить до елімінації пухлини з організму. після третього введення (через 12 місяців після Спосіб ілюструється прикладами клінічних виповторного). пробувань. Результати клінічних випробувань Позитивні наслідки при лікуванні різних захвопредставлені в Таблицях 1 та 2. рювань є результатом значного підвищення загаВ межах клінічних випробувань, що проводильної резистентності організму й, головним чином, лися із застосуванням способу мікровогнище завід придбання специфічного імунітету на еццогенпалення створювали шляхом підшкірного введенну мікрофлору й насамперед на анаеробних її ня гомогената тканини ксеногенної підшлункової представників - бактериодів і клостридій. Вони є залози або яєчка в кількості 0, 2-2- 0,5мол. Перепостійними мешканцями шлунково-кишкового траважно введення здійснювали у нижню частину кту, їм властиві складні перетворення й взаємини передньої черевної стінки. зі слизистим шаром, виявлена міграція мікробів не Тканини паренхіматозного органу після отритільки в просвіті кишки, але й у клітках епітелію, у мання промивли стерильнім фізіологічним розчилейкоцитах кишкової стінки. Треба думати, що ном з антибіотиком, заморожували в програмному імунітет до кишкової флори в організмі не тільки заморожувані зі швидкістю 1-2°С/хвил., зберігали виробляється у звичайних умовах (кишковий бапри температурі - 9-10°С до 6 місяців, після розр'єр), але може бути отриманий тільки парентериморожування його гомогенизували механічним ально за наявності мікробно-тканинного біофактошляхом у гомогенізаторі й витримували протягом ру, яким є нативна тканина підшлункової залози. двох годин в термостаті при температурі 37°С. Не Пропонований спосіб комплексної мікробновиключається можливість збереження гемогената тканнинної імунізації перспективний у лікуванні й в лиофілізованому виді. профілактиці багатьох захворювань завдяки сильПроникнення аутоанаеробної флори до місця ному й різнобічному біостимулируючому впливу на введення препарату, дає підстави думати, здійсорганізм і завдяки придбанню організмом вираженюється гематогенне нейтрофилами, або мікрофаного імунного захисту не тільки від анаеробної гами кишкової стінки, у яких утримуються анаероаутофлори, але й від різних факторів патогенності, бні бактерії або їхні похідні (елементарні тільця). які у великій кількості утворяться в штучно створеПісля введення гомогената розвиваються загальному мікровогнищі. на й місцева реакції. Завдяки зазначеним особливостям застосуПочаток загальної реакції організму на ствовання способу показало значну ефективність у рене мікровогнище відбувається звичайно через 4комплексному підході до лікування таких захворю6 годин після введення препарату. вань як перитоніт, панкреатит, гостра кишкова неРеакція проявляється у вигляді підвищення прохідність, дуоденостаз, туберкульоз. температури тіла, що буває переважно в межах Лікування або профілактика таких захворювід 38°С до 39°С. Нерідко підвищення температувань проводилася на собаках, кроликах, пацюках, ри супроводжується ознобом. Тривалість темпекішках, морських свинках і телятах. ратурної реакції частіше від 1,5 до 3,5 годин. Після Матеріалом для готування препарату викорисзагальної реакції стає помітніше місцева реакція товувався гомогенат, підшлункової залози собаки навколо ділянки введення препарату у вигляді або свині і яєчка статевозрілого собаки чоловічої гіперемії й поступового збільшення інфільтрату. статі. По мірі збільшення місцевої реакції помітно знижуЗначна ефективність даного способу при лікується загальна. Іноді, при хронічних запальних ванні захворювань людини отримана при різних процесах, загальна реакція продовжується через кишкових захворюваннях запального характеру: нетривале загострення основного захворювання. органів шлунково-кишкового тракту ( гастроПри пропонованому способі мікробне - ткадуоденіти, холицито-панкреатити, гепатити, ентенинної імунізації вогнище запалення в місці ввероколіти та ін.), органів дихання, органів мочевивідення препарату триває 6-8 днів, проходячи стадії дної системи. Отриманий також позитивний ефект дозрівання й розкриття. У спокої (лежачи, сидячи, при коллагенезах, онкологічних і ендокринних закоштуючи) він не болісний, біль відчувається при хворюваннях. здавлюванні (згинання, розгинання тулуба) або Оптимальна доза препарату становить поштовху в області вогнища. Пацієнти через добу0,5мол. При подальшому збільшенні дози клінічдві можуть виконувати звичайну роботу, за винятний ефект не наростає. Для дітей до 10 років опком важкої фізичної роботи. Відносно слабка хвотимальна доза становить 0,3мол. При наявності робливість інфільтрату пояснюється частково лосупутніх захворювань алергійної етнології розракалізацією його, тобто відсутністю напруженості хунок дози препарату повинен бути заснований на тканин у м'якій стінці живота. Після дозрівання даних вихідної имунограми. Введення препарату інфільтрат розкривається, виділяючи велику кільпротипоказане при термальному стані хворого 7 18199 8 (гостра сердцевосудинна, дихальна, ниркова неЛікувальні властивості препарату відновлюдостатність). ються після його зігрівання до температури 37,0°С Строк придатності препарату при зберіганні в протягом 10 хвилин. замороженому стані (температура - 10°С) дорівЗапропонований спосіб був широко перевіренює шести місяцям. Термін придатності до застоний в клінічній практиці й отримав позитивний ресування препарату, що зберігається при темперазультат (див. табл. 2). турі 0°С - 24 години. Таблиця 1 № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Діагноз Хронічний гастрит, хронічний гепатохолецистит Хронічний панкреатит Виразкова хвороба дванадцятипалої кишки Хронічний ентероколіт Хронічний бронхіт Бронхіальна астма Хронічний пієлонефрит Хронічний простатит Хронічний ендометрит Ревматоїдний поліартрит Системна червона волчанка Цукровий діабет Розсіяний склероз Псоріаз Фіброміома матки Поліпоз шлунку Дифузійна мастопатія Меланобластома стегна з метастазами в пахові вузли Лімфогранулематоз Меланома плеча Рак кардиального відділу шлунка П.І.Б. рік народження Грачов Георгій Васильович 1954р.н. Подковиркин Віктор Павлович 1949р.н. Янкович Алена Геннадіївна 1974р.н. Горщиків Андрій Анатолійович 1972р.н. Кам'янець Ростислав Олегович 1986р.н. Коряки Микола Георгійович 1925р.н. Лук'янов Василь Іванович 1966р.н. Строчу Василь Іванович 1946р.н. Волощина Галина Петрівна 1949р.н. Кальченко Лідія Галивовна 1936р.н. Мортунич Тетяна Василівна 1973р.н. Патаєв Низами Самедович 1948р.н. Подгурська Ніна Іванівна 1956р.н. Яровий Віталій Григорович 1975р.н. Чех Наталя Сергіївна 1939р.н. Чурашкин Микола Сергійович 1939р.н. Вершиніна Світлана Єгорівна 1941р.н. Алексеев Олександр Володимирович 1974р.н. Ковтуцкая Світлана Олександрівна 1950р.н. Лисицкая Тетяна Пилипівна 1955р.н. Тодоров В'ячеслав Олександрович 1941р.н. Курс лікування 4 вакцинації 4 вакцинації 3 вакцинації 3 вакцинації 3 вакцинації 3 вакцинації 2 вакцинації 2 вакцинації 3 вакцинації 2 вакцинації 3 вакцинації 2 вакцинації 5 вакцинацій 3 вакцинації 2 вакцинації 2 вакцинації 4 вакцинації Стійка ремісія Видужання Стійка ремісія Видужання Видужання Видужання Видужання Видужання Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Видужання Видужання Стійка ремісія 5 вакцинацій 4 вакцинації 3 вакцинації 3 вакцинації Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Стійка ремісія Результат Таблиця 2 Нозологичні одиниці Загальна кількість хворих Хронічні запальні захворювання ХВЗ шлунково-кишкового тракту (гастрит, дуоденіт, коліт, тифліт, сигмоидит, 230 проктит, парапроктит.) Виразкова хвороба шлунка дванадцятипалої кишки. ХВЗ печінки, підшлункової залози, жовчного міхура, (гепатит, холецистит, холантит, панкреатит) ХВЗ центральної й периферичної нервової системи (енцефаломіеліт, неврити, радикуліт, енцифалит, арахноидит) 45 164 32 ХВЗ пазух черепа (фронтит, гайморит) 40 ХВЗ органів зору, слуху (отит, конъюнктевит, евстахиит) 5 ХВЗ органів носоглотки (танзиллит, ларингіт, риніт, форингит) схильність кОРЗ 167 ХВЗ органів подиху (трахеїт, бронхіт, хронічна пневмонія) 62 ХВЗ бруньок (пієлонефрит, гломерулонефрит), сечового міхура (цистит) і сечовивідних шляхів, мочекаменная хвороба. 52 ХВЗ полових органів у чоловіків (простатит, орхит) 55 ХВЗ полових органів у жінок (аднексит, параметрит, ендометрит, безплідність) 130 Дерматит і гнойничковие захворювання шкіри (екзема вугруватість, фурункульоз, бешихове запалення) ХВЗ опорно-рухової системи (мнозит, артрити різні етиологии, остеимелит, остеохондроз) Алергичні захворювання Бронхіальна астма, бронхіт з астматичним компонентом, побутова й лікарська алергія 41 41 143 Позитивний Відсутність результат % ефекту % 168 73,0% 36 80,0% 118 71,9% 24 66,6% 20 50% 5 100% 123 73,6% 50 80,6% 40 76,9% 38 69,1% 63 48,8% 31 75,6% 31 75,6% 120 83,9% Відомості про результати лікування не надійшли 3 1,3% 1 2,2% 5 3,0% 59 ------ 8 25% 8 ------ ------ 4 2,3% 1 1,6% 1 1,9% 8 41 40 11 11 ------ 17 7 5,3% 3 7,3% 3 7,3% 60 3 2,1% 7 7 20 9 18199 10 Продовження таблиці 2 Злоякісні пухлини 191 11560,2% Са (Sa) після оперативного лікування без химико-и променевої терапії 83 53 63,8% 26 13,6% 7 8,4% Доброякісні пухлини Аденома передміхурової залози, липоматоз, поліпи, фиброматоз молочних залоз мастопатія, фіброміома матки, синовиома, остеохондрома. Системні захворювання 140 91 65,0% 7 5,0% 42 Коллагенези, атеросклероз розсіяний склероз 71 54 76,0% 6 8,4% 9 180 11362,7% 14 7,7% 53 28 2278,5% 1 3,5% 5 Иноперабельний Ca(Sa) різних органів і систем, лейкози лимфогранулематоз 50 23 Захворювання шкіри Псоріаз, нейродерміт, себорея Ендокринологічні захворювання Цукровий діабет Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601