Біологічно активний засіб, який має адаптогенну властивість

Биологически активное средство из зеленой массы озимой пшеницы, обладающее адаптогенным свойством. (19) (21) 97052534 (22) 30.05.1997 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Левіцький Анатолій Павлович, Вовчук Сергій Володимирович, Макаренко Ольга Анатолівна, Соловйова Віра Петрівна 28513 торфот и состав адаптогенного средства, получаемого из зеленой массы озимой пшеницы. Результаты приведены в табл. 1 и 2. Как видно из таблиц, предлагаемое средство по содержанию свободных аминокислот, сахаров, фосфора и значительно превосходит экстракты алоэ, плаценты и торфот. Указанные различия объясняют то, что предлагаемое средство обладает более высоким физиолого-фармакологическим эффектом. Получение препарата иллюстрируют следующие примеры. Пример 1. Получение порошка зеленой массы озимой пшеницы Зеленую массу пшеницы мягкой озимой (Triticum aestivum), выращенную без применения гербицидов, ядохимикатов и с ограниченным применением азотной подкормки, скашивают до стадии колошения. Скошенную массу инспектируют, удаляют почерневшие листья и сорные растения и 5 кг отобранной массы промывают 3 раза водопроводной водой. После стекания массу раскладывают на решетчатый стеллаж и консервируют по методу академика В.П. Филатова. Для этого массу помещают в холодильную камеру и выдерживают при +4°С в течение 5-7 суток. После этого массу высушивают в горячем потоке воздуха. Засушенную массу измельчают до заданных размеров. Получают 1,2 кг порошка зеленой массы озимой пшеницы, пригодного для использования. Пример 2. Получение водного экстракта (инъекционного раствора) из зеленой массы озимой пшеницы В реактор, снабженный паровой рубашкой, подают дистиллированную воду и загружают листья озимой пшеницы, помещенные в марлевый мешок. Условия выращивания пшеницы указаны в примере 1. Соотношение воды и зеленой массы равно 20:1 соответственно. Содержание емкости доводят до кипения и кипятят в течение 5 минут при постоянном перемешивании. Затем в руба шку подают холодную воду. Охлажденный раствор фильтруют через марлю и бязь и добавляют натрий хлористый из расчета 8 г на 1 л концентрата. Концентрат фильтруют через нутч-фильтр и вакуумметрическим давлением возвращают в реактор. Нутч-фильтр заправляют бязью, картоном и шелком на выходе. Полученный концентрат разбавляют водой до окисляемости 1700 мг О2 в л, перемешивают и доводят содержание натрия хлорида до 0,85 мас.%. Содержание натрия хлорида может быть в пределах требований Фармакопейной статьи ФС 42-У. Экстракт передают в сборник для разлива. Производят наполнение ампул и их стерилизацию, испытание на стерильность проводят в соответствии с Государственной фармакопеей СССР XI, т. 2, стр. 187. Инъекционный водный раствор готов к употреблению. Пример 3. Получение водно-спиртового экстракта из зеленой массы озимой пшеницы Листья и стебли озимой пшеницы, выращенные в условиях, указанных в примере 1, инспектируют , а затем измельчают на кусочки размером свыше 1,60 мм. Измельченное сырье заливают 60%-ным раствором этилового спирта. Соотношение сырья и водно-спиртового раствора равно 1:9. Смесь выдерживают в течение 40 час. в плотно закрытой емкости. После выдержки экстракт сливают, а измельченную массу повторно заливают 50%-ным раствором этилового спирта. Количество водноспиртового раствора берут равным количеству экстракта, полученного от первого слива. Смесь выдерживают в течение 40 час. Затем экстракт сливают и отжимают сырье. Первый и второй экстракты объединяют и выдерживают 24 часа, дважды фильтруют. Получают водно-спиртовый экстракт с крепостью не менее 55% об. в интервале 0,74-0,76%. Полученный водно-спиртовый экстракт готов к употреблению. Пример 4. Получение таблеток, содержащих высушенную зеленую массу озимой пшеницы В смеситель загружают предварительно просеянные и взвешенные 40 кг порошка листьев озимой пшеницы, 10 кг сахара молочного, 9 кг сахарной пудры. Смесь перемешивают в течение 15 мин., после чего ее увлажняют путем добавления 10%-ного крахмального клейстера в количестве 5 кг и повторно перемешивают в течение 10 мин. до получения равномерно увлажненной массы. Влажную массу перегружают в бункер гранулятора, собирают на противни и передают на сушку. Массу суша т 6-8 часов при 2-х кратном перемешивании, затем охлаждают в естественных условиях и подают на гранулирование. Диаметр сетки гранулятора устанавливается равным 2 мм. Полученный сухой гранулят опудривают стеаратом кальция в количестве 500 г и подают на таблетирование. Таблетирование осуществляют на таблет-прессе РТМ-41 М п уансонами диаметром 12 мм. Получают таблетки средней массой 0,60,03 г. Изготовленные таблетки обеспыливают в вытяжном шкафу. Получают таблетки содержащие: сухой порошок листьев озимой пшеницы 0,400 г сахар молочный 0,100 г сахарная пудра 0,090 г крахмал картофельный 0,005 г кальция стеарат 0,005 г 0,6 г. Биологическую активность предлагаемого средства определяли с помощью 3-х тестов. 1. Дрожжевой тест (см. Методические рекомендации по экспериментальному изучению биостимуляторов из натурального (природного) сырья. Министерство здравоохранения Украины, Фармакологический комитет Украины, Киев, 1996 г., с. 5). 2. Паробиотический тест (см. Методические рекомендации по экспериментальному изучению биостимуляторов из натурального (природного) сырья. Министерство здравоохранения Украины, Фармакологический комитет Украины, Киев, 1996 г., с. 6). 3. Кислородное голодание (см. Методические рекомендации по экспериментальному изучению биостимуляторов из натурального (природного) 2 28513 сырья. Министерство здравоохранения Украины, Фармакологический комитет Украины, Киев, 1996 г., с. 8). Пример 5. Изучение биологической активности водного экстракта из зеленой массы озимой пшеницы, полученного по примеру 2 и водного экстракта алоэ по дрожжевому тесту. Для этого взяли сладкое основное сусло, отфильтровали и довели водой до 11%. Затем кипятили в течение 15-20 мин., отфильтровали и разлили в колбы. Взяли 3 г сухого агар-агара и растворили в 100 мл сусла, закипятили до полноты растворения агар-агара, отфильтровали и разлили в пробирки по 5 мл. Пробирки с агар-агаром простерилизовали в течение 3-х дней по 30 мин и поместили в холодильник. Взяли одну пробирку с агар-агаром и поместили в нее 2 петли дрожжевой культуры Saccharomyces cerevisiae штамм № 47 и термостатировали в течение 3-х дней при 27±1°С. После этого приготовили дрожжевую суспензию и испытывали биологическую активность. Для этого в стерильные пробирки заливали по 1 мл физиологического раствора (контроль) водного экстракта алоэ (прототип) и водного экстракта зеленой массы озимой пшеницы. Затем в каждую пробирку наливали по 5 мл раствора Ридера и по 2 мл дрожжевой суспензии с экстинкцией, равной 0,05. Все пробирки (контрольные, опытные, и с алоэ) поместили в термостат при 27±1°С на 18 часов и контролировали экстинкцию, доводя ее до 0,1. После этого все пробирки погрузили в кипящую баню на 10 мин. После кипячения пробирки охладили до комнатной температуры и измерили оптическую плотность. Результаты указаны в табл. 3. Как видно из таблицы, биологическая активность водного экстракта зеленой массы озимой пшеницы в 3 раза выше активности водного экстракта. Пример 6. Изучение биологической активности с помощью парабиотического теста Для этого отобрали 3 группы лягушек травяных по 8 животных в каждой группе. Исследование проводили на парных портняжных мышцах. В качестве альтерирующего агента использовали 1%ный р-р хлорида калия. Характер возбудимости проверяли при напряжении 2,4 вольта. В тестируемую мышцу вводили раствор хлорида калия. После наступления парабиоза мышцы животных контрольной группы погружали в раствор Рингера, мышцы животных второй группы погружали в раствор экстракта алоэ, а мышцы животных третьей группы - в раствор водного экстракта зеленой массы озимой пшеницы. Фиксировали время восстановления сократительной способности мышц. Результаты указаны в табл. 4. Как видно из табл. 4, время выхода из состояния парабиоза на 1 мин меньше при контакте мышцы лягушки с раствором предлагаемого средства по сравнению с экстрактом алоэ. Это свидетельствует о большей активности предлагаемого биологически активного средства. Пример 7. Изучение биологической активности предлагаемого средства путем моделирования кислородного голодания При этом использовали 2 модели: 1) введение нитрита натрия; 2) введение нитропруссида натрия. Для этого взяли 160 белых мышей и разделили на 2 группы по 80 животных в каждой группе. Каждую группу животных разделили на 4 подгруппы по 20 животных в каждой подгруппе: - контроль (введение животным физиологического раствора); - введение водной суспензии таблеток алоэ; - введение водной суспензии таблеток на основе экстракта зеленой массы озимой пшеницы; - введение водной суспензии порошка зеленой массы озимой пшеницы. В первой группе животным контрольной подгруппы интрагастрально вводили по 0,2 мл физиологического раствора, животным второй подгруппы - по 0,2 мл водной суспензии алоэ, животным третьей подгруппы - по 0,5 г/кг массы водной суспензии таблеток, животным четвертой подгруппы по 0,1 г/кг массы водной суспензии порошка зеленой массы озимой пшеницы. Через 3 часа животным всех подгрупп подкожно вводили нитрит натрия в дозе 0,45 мг/кг массы животного. Животным второй группы вводили такое же количество тех же адаптогенов, что и в первой группе, а через 3 часа подкожно вводили нитропруссид натрия в дозе 20 мг/кг массы животного. Об эффективности действия адаптогенных средств судили по продолжительности жизни белых мышей после введения нитрита натрия и нитропруссида натрия. Результаты указаны в табл. 5. Как видно из табл. 5, продолжительность жизни животных, которым вводили интрагастрально водную суспензию таблеток на основе экстракта зеленой массы озимой пшеницы на 50% больше по сравнению с водной суспензией таблеток алоэ (при введении нитрита натрия). Продолжительность жизни животных, которым вводили водную суспензию порошка зеленой массы озимой пшеницы почти вдвое дольше по сравнению с водной суспензией таблеток алоэ (при введении нитрита натрия). При введении нитропруссида натрия разница не столь велика, однако, закономерность, состоящая в более высокой биологической активности предлагаемого средства, сохраняется. Предлагаемое биологически активное средство в виде водного экстракта зеленой массы озимой пшеницы прошло клиническое испытание на кафедре туберкулеза Одесского государственного медицинского университета. Клинико-рентген-лабораторным и специальным методам исследования подверглось в динамике 65 больных туберкулезом легких. 15 человек служили в качестве контроля. У 47 больных была инфильтративная, у 12 - диссеминированная и у 6 - очаговая форма туберкулеза легких. Мужчин было 56 (86,15%), женщин - 9 (13,8%). У всех больных туберкулезный процесс в легких был в фазе распада. 39 человек (60%) оказались бактериовыделителями. Все наблюдаемые больные при поступлении в клинику подверглись клиническому, лабораторному и рентгенологическому исследованию легких. После этого назначалась антибактериальная комбинированная химиотерапия (изониазид + стреп 3 28513 томицин + рифампицин), десенсибилизирующий комплекс (димедрол, супрастин, 10%-ный раствор хлористого кальция, преднизолон по семидневной схеме). Через полтора месяца проводился полный комплекс диагностических мероприятий перед назначением водного экстракта зеленой массы озимой пшеницы. Представляемый препарат назначали ежедневно, подкожно по 1 мл в количестве 20-25 инъекций на курс лечения. После окончания курса проводили комплексное обследование исследуемого контингента. Отмечено значительное улучшение рентгенологической картины наблюдаемых больных: у 52,3% полости распада уменьшились, у 21,5% полностью закрылись. Микобактерии туберкулеза перестали выделяться у 87% бактериовыделителей. Показатели иммунологического состояния до стигли нормы. Лечение туберкулеза без курса предлагаемого адаптогенного средства (контрольная группа больных) по выше перечисленным показателям было менее выразительно. Таким образом, применение инъекционного препарата в клинике туберкулеза легких эффективно и оправдано. Предлагаемому адаптогенному средству присвоено название "Биотрит". 28 ноября 1996 г. на расширенном заседании Президиума Фармакологического комитета Министерства здравоохранения Украины препарат "Биотрит" рекомендован для медицинского применения. На основании экстрактов и порошка зеленой массы озимой пшеницы заявителем изготовлены и апробируются различные лечебно-профилактические препараты, а также зубные пасты, эликсир, полоскания, лечебные кремы. Таблица 1 Химический состав предлагаемого биологически активного средства и известных адаптогенов Наименование адаптогена Экстракт алоэ Экстракт плаценты Торфот Экстракт зеленой массы озимой пшеницы Свободные аминокис- Свободный Сахара (%) пролин лоты (мг/мл) (мг/мл) 0,10 0,04 следы Азот (%) Калий (мкг/мл) Натрий Мкг/мл Фосфор мкг/мл следы 68,2 233,0 35,0 0,89 104,5 185,0 26,5 0,02 0,70 0,06 следы 1,0 240,0 следы 0,002 0,09 следы 0,42 93,9 2,0 145,0 0,14 3,25 1,08 Таблица 2 Сравнительная характеристика аминокислотного состава предлагаемого биологически активного вещества и известных адаптогенов (мкг/мл) Аминокислоты Лизин Гистидин Аммиак Аргинин Аспарагиновая кислота Треонин Серин Глутаминовая кислота Пролин Глицин Аланин Валин Метионин Изолейцин Лейцин Тирозин Фенилаланин Сумма аминокислот Экстракт алоэ Экстракт плаценты 2,0 0,6 18,4 1,6 5,3 1,4 2,0 9,1 3,2 2,4 2,9 3,5 1,4 1,5 2,3 0,7 1,4 41,3 40,3 11,6 26,8 35,1 75,1 31,6 37,3 161,8 46,2 90,0 48,8 31,6 7,8 14,1 43,9 9,8 22,0 707,3 4 Экстракт зеленой массы озимой пшеницы 107,8 57,0 128,8 84,3 1257,8 66,0 144,0 147,0 54,3 51,0 107,0 130,8 15,0 71,8 59,8 25,5 70,3 2578,8 28513 Таблица 3 Сравнительный уровень биологической активности экстракта алоэ и экстракта зеленой массы озимой пшеницы № п/п 1 2 3 Адаптогенное средство Контроль Экстракт алоэ Экстракт зеленой массы озимой пшеницы Биологическая активность: дрожжевой тест, % 100 380,0 1170,0 Таблица 4 Сравнительный уровень биологической ак тивнос ти экстрак та алоэ и водного экстракта зеленой массы озимой пш еницы на парабиотическом тес те № п/п 1 2 3 Адаптогенное средство Контроль Экстракт алоэ Водный экстракт зеленой массы озимой пшеницы Время выхода из состояния парабиоза (мин). 14,6±1,2 8,4±0,5 7,4±0,7 Таблица 5 Сравнительный уровень биологической активности различных адаптогенных средств на тесте кислородного голодания № 1 2 3 4 Наименование адаптогенного средства Контроль (физ. раствор) Водная суспензия таблеток алоэ Водная суспензия таблеток на основе экстракта зеленой массы озимой пшеницы Водная суспензия порошка зеленой массы озимой пшеницы Продолжительность жизни после введения (мин) Нитрита натрия нитропруссида натрия 3,5±0,3 10,9±0,87 4,9±0,15 12,9±0,56 Р