Лікарський засіб з кардіопротекторною, ангіопротекторною та імунокорегуючою активністю

Використання рекомбінантної Cu-Zn супероксиддисмутази як лікарського засобу з кардіопротекторною, ангіопротекторною та імунокорегуючою активністю При кардіологічних захворюваннях (ІХС, інфекційному ендокардиті) використовується і церулоплазмін люфілізований для ІН'ЄКЦІЙ [7] До недоліків препарату слід віднести те, що він застосовується тільки внутрішньовенно крапельно та одержують його з ВІДХОДІВ виробництва препаратів крові, що збільшує ризик алергічних та інфекційних ускладнень Cu-Zn - супероксиддисмутаза (СОД) є одним з найбільш активних антиоксидантних ферментів з анти рад и кальним механізмом дії Вона перетворює високо реакційноспрорможну форму активного кисню - супероксидний анюн-радикал в менш реакційноспроможний перекис водню, і цим перешкоджає генерації процесів ВРО [8] Є декілька джерел отримання СОД - з еритроцитів великої рогатої худоби (препарати пероксинорм, орготеш) та людини (препарат ерисод), а також методом генної інженери (препарат рексод) Препарати пероксинорм та орготеш використовуються як протизапальні та радюпротекторні засоби [9] Недоліком цих препаратів є висока алергічна спроможність, що послужило приводом для обмеження їх використання у медичній практиці (Інформаційне повідомлення ВОЗ №2 від 12 квітня 1994р) Крім того, вважаючи на ризик прюних інфекцій застосування препаратів крові тваринного походження обмежено Ерисод - препарат, отриманий з еритроцитів людини використовується як антиглаукоматозний [10] та гепатозахисний засіб [11] Недоліком препарату є його здатність викликати алергічні реакції Крім того, незважаючи на ступінь очистки 00 о о> о> ю 59908 препарату, у ньому можливі гормональні домішки, інфекційні агенти, тощо Дослідження рекомбінантної СОД (СОДГЄс), отриманої методом генної інженери, виявили такі види и активності як гепатозахисна [12] та протизапальна [13] Проте нема даних про наявність у рекомбінантної Cu-Zn СОД кардюпротекторних, анпопротекторних та імунокорегуючих властивостей Завданням винаходу є розширення арсеналу засобів з кардюпротекторною, анпопротекторною та імунокорегуючою дією Поставлена задача вирішується шляхом використання рекомбінантної Cu-Zn СОД у якості лікарського засобу з кардюпротекторною, анпопротекторною та імунокорегуючою активністю Нові ВИДИ фармакологічної активності рекомбінантної Cu-Zn СОД визначені експериментальним шляхом На думку авторів, кардюпротекторна, анпопротекторна та імунокорегуюча дія рекомбінантної Cu-Zn СОД обумовлені, не тільки її антирадикальною дією, але і здатністю (при застосуванні у малих дозах від 0,001 до 0,065мг/кг) стимулювати активність ендогенних антиокисних систем організму, і насамперед, ендогенної СОД Згідно даних літератури, при введенні в організм ендогенних речовин (гормонів, ферментів та ш) та їхніх структурних аналогів, виділення цих речовин організмом гальмується (принцип "зворотного зв'язку") У той же час, як свідчать результати ДОСЛІДІВ, використання надто малих доз СОДГЄс приводить до стимулюючого ефекту Цей ефект призводить до зменшення кардюдеструктивних процесів, зменшує ліпоперекисне пошкодження ендотелію, покращує функціювання імунної системи організму Винахід ілюструється прикладами Приклад 1 Кардюпротекторну активність рекомбінантної Cu-Zn СОД (СОДгес) вивчали на моделі адріаміцинової кардіомюдістрофм (КМД) у щурів Усі тварини були розподілені на групи інтактні тварини, неліковані тварини з КМД, тварини, з КМД, ліковані СОДгес та тварини з КМД, ліковані кверцетином Модельну КМД викликали шляхом однократного внутрішньом'язового введення адріаміцину у дозі 20мг/кг Рекомбінантну Cu-Zn СОД, отриману методом генної інженери з культури штаму дріжжів-продуцентів Saccharomycess cerevisie Y2134 у Санкт-Петербургському НДІ особливо чистих біопрепаратів, вводили внутрішньом'язово у дозі 0,020мг/кг за 1 годину до застосування адріаміцину Препарат порівняння кверцетин вводили перорально у дозі 5мг/кг за 1 годину до введення адріаміцину У міокарді та сироватці крові дослідних тварин оцінювали інтенсивність процесів ВРО за рівнем малонового діальдепду (МДА), та дієнових кон'югат (ДК) Ефективність функціювання антиокисної системи оцінювали за рівнем каталази, відновленого глутатюну (G-SH) та активністю СОД Результати ДОСЛІДІВ представлені у таблицях 1 та 2 Як видно з наведених у таблиці 1 даних, при адріаміциновій КМД спостерігається порушення функціональної активності міокарду (табл 1) Зменшилась скорочувальна функція міокарду (зубець R), порушилась предсердия (PQ) та шлуночкова проводимість (QRS), змінилась збудливість предсердь (Р), потенціал реполярізацп шлуночків (Т), а також з'явились явища ішемії міокарду (сегмент ST нижче ІЗОЛІНІЇ}, та виникла тахікардія (за показником ЧСС) Усе це супроводжувалось значною активацією активація процесів ВРО Рівень МДА у міокарді контрольних (не лікованих) тварин у порівнянні з інтактом зріс в 2,8 рази, ДК - у 3,4 рази, активність СОД зменшилась у 2,4 рази, а рівень каталази збільшився у 2,8 рази, рівень G-SH зменшився у 2,5 рази (табл 2) У сироватці крові спостерігаються аналогічні тенденції рівень МДА збільшився у 2,1 рази, ДК у 2,6 рази, а активність ендогенної СОД компенсаторне збільшилась у 1,5 рази, каталази - у 1,6 рази, GSH -у 2,5 рази Використання СОДГЄс та кверцетину привело до зменшення інтенсивності процесів ВРО Під ВПЛИВОМ СОДГЄс спостерігається покращенням функціонального стану серцевого м'язу Про це свідчить відновлення часу розповсюдження потенціалу у предсердях (PQ), зменшенням електрокардіографічних показників ішемії (підйом сегменту ST над ІЗОЛІНІЄЮ), нормалізацією шлуночкової проводимості (QRS), та ш показників ЕКГ (табл 1) Під ВПЛИВОМ СОДГЄс рівень МДА у міокарді зменшився у 1,7 рази, ДК - у 1,86 рази Активність ендогенної СОД збільшилась у 1,7 рази, вміст G-SH зріс у 1,9 рази, а рівень каталази у міокарді майже не змінився (табл 2) У сироватці крові рівень МДА та ДК під впливом СОДГЄс зменшився у 1,4 рази, вміст каталази зменшився у 1,13 рази, GSH - у 1,3 рази, а активність СОД збільшилась у 1,3 рази Під ВПЛИВОМ кверцетину вміст МДА у гомогенаті міокарду зменшився у 1,2 рази, ДК - у 1,3 рази, рівень G-SH збільшився у 1,6 рази Активність ендогенної СОД під впливом кверцетину збільшилась у 1,2 рази, рівень каталази дещо зменшився (табл 2) У сироватці крові у тварин з модельною КМП, що отримували кверцетин, рівень МДА зменшився у 1,2 рази, ДК - у 1,3 рази При застосуванні препарату порівняння також декілька зменшився вміст G-SH та каталази (у 1,2 рази), активність ендогенної СОД збільшилась у 1,1 рази Покращення цих біохімічних показників під впливом кверцетину супроводжувалось покращенням і функціонального стану міокарду, однак за впливом на систолічний показник (СП) та за спроможністю зменшувати явища ішемії міокарду (зубці R, підйом сегменту ST над ІЗОЛІНІЄЮ) (табл 1) кверцетин поступався препарату рекомбінантної СОД Очевидно, не однотипні результати дії антиокисників при модельній КМД обумовлені тим, що СОДгес та кверцетин мають різні механізми реалізації антиокислювальної дії СОДгес дисмутуючи високо реакційно-спроможну форму активного кисню - супероксидний анюн-радікал, перетворює його в менш реакційноздатний перекис водню [8, 10-13], який подальше каталізується каталазою та глутатюн - пероксидазою до НгО та Ог Це попереджає процес ВРО - деструкції кардюмюцитів, який спричиняється дією адріаміцину, що і підтверджено у наших дослідах СОДгес також че 59908 рез вищезазначений механізм дм, зменшує пошкоджуючий вплив продуктів ВРО на активні центри ферментів - антиокисників, і цим захищає їх від пошкодження Кверцетин, майже за всіма показниками, що досліджувались, поступався СОДГЄс, що очевидно, обумовлено тим, що він діє переважно на стадії перекисного окислення ЛІПІДІВ, КОЛИ про цес деструкції кардюмюцитів вже запущено [2,3] Таким чином, дослідження показало, що за ступенем інгібування процесів ВРО у міокарді та сироватці крові при адріаміцинової КМД, Cu-Zn перевищує дію кверцетину Таблиця 1 Дія препаратів СОД ГЄ сТа кверцетину на показники Е К Г т а ВКС при МКД у щурів Контрольні (не ліковані тварини) ВКС 0,31±0,01 0,53±0,01* ЧСС, уд/хв 401,8±9,4 358,1±15,1* СП, % 51,40±42,4 40,5±10,1 RQ, сек 0,06±0,002 0,045±0,001* QRS, сек 0,02±0,001 0,013±0,002 QT, сек 0,063±0,002 0,05±0,005 R, мВ 0,73±0,033 0,40±0,084* Р, мВ 0,112±0,007 0,069±0,019* Т, мВ 0,161 ±0,012 0,025±0,04* Підйом ST над ІЗОЛІНІЄЮ 1,4±0,16 -0,42±0,31* "р < 0,05 вірогідно у порівнянні з штактом, "*р< 0,05 вірогідно у порівнянні з контролем Показник Інтактні тварини КМД+СОДгес КМД+кверцетин 0,4610,02** 481,2±12,1** 46,2±1,4** 0,048±0,002** 0,015±0,003 0,051 ±0,001 0,641 ±0,08** 0,100±0,01** 0,152±0,003** 1,00±0,1* 0,48±0,01** 452,8±21,1** 55,2±1,9, 0,04±0,003* 0,02±0,003** 0,072±0,004** 0,84±0,09** 0,096±0,016** 0,140±0,019* -0,38±0,2 Таблиця 2 Вплив рекомбшантної СОД та кверцетину на показники ВРО та ЕАОС при адріаміцшовій КМД, (М±т) Умови досліду МДА, мкмоль/г Гомогенат міокарду G-SH, ДК, СОД, мккат/л Катал аз а, У О мкмоль/л ммоль/л Інтактні тварини, п=10 61,9±4,3 4,2±0,3 0,9+0,09 Контрольні (не ліковані тварини), п=10 172,4±9,2" 15,1+2,4" 0,37±0,02" СОД гес ,п=10 101,2+6,1" 8,1+2,1" 0,63±0,02" Кверцетин, п=10 146,1 ±7,8 11,3±3,2 0,45±0,05 П-КІЛЬКІСТЬ тварин у групи *р