Спосіб забарвлення гістологічних зрізів кобальт-сульфідним розчином для виявлення нервово-м’язових закінчень

Реферат: Спосіб забарвлення гістологічних зрізів кобальт-сульфідним розчином для виявлення нервовом'язових закінчень полягає у тому, що здійснюють імпрегнацію наперед приготовленого розчину на препаратах скелетних м'язів, порівнюють ступінь розгалуження та величини площі різних за гістологічними характеристиками нервово-м'язових закінчень в нормі і при різних патологічних станах, здійснюють морфологічну інтерпретацію про стан нервово-м'язових закінчень в різних умовах. Для імпрегнації вводять кобальт-сульфідний розчин у 2% розчині диметилсульфоксиду. UA 84496 U (12) UA 84496 U UA 84496 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі морфології людини і може бути використана для експериментального визначення стану нервово-м'язових закінчень в різних умовах. Нервово-м'язові закінчення - це морфологічні утворення в скелетних м'язах, які мають специфічні фізіологічні властивості і можуть викликати певну локомоторну відповідь. На даний час існують різні методи визначення різних типів нервово-м'язових закінчень в організмі людини і тварин. Відомим способом є авторадіографічний [Hoffman F. Molecular basis for transmitters in peripheral and sensory neurons of radio-nuclear investigations / F. Hoffman, M. Biel, V. Flocjerzi // Ann. Rev. Neurosci. - 1994. - V. 17. - P. 39-418] та гістохімічний метод [Плечкова Е.К. Сравниельная характеристика периферических сплетений парасимпатических и симпатических нервных волокон по признаку распределения и активности холинэстеразы (гистохимическое исследование) / Е.К. Плечкова // Соврем. Проблемы физиол. и патол. нервной системы. - М., 1965. - С. 183-198]. До часто застосовуваних способів виявлення нервово-м'язових закінчень належать також денситометрія, кількісне вимірювання ультрафіолетових та флюоресцентних маркерів, 3-и мірне магнітно-резонасне дослідження органів і тканин, ультразвуковий та електронно-мікроскопічний методи [Володько Я.Т. Электронно-микроскопическое исследование нервно-мышечных окончаний / Я.Т. Володько // Кровообращение в скелетных мышцах. - Рига, 2000. - С. 20-31; Коряк Ю.А. Изучение архитектуры и функций скелетных мышц человека с помощью ультразвукового сканирования / Ю.А. Коряк, М.М. Кузьмина // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 2008. - Т. 42, № 1. - С. 49-53; Taglialatella V. Dihidropyridine-insensitive stimulation of dopamine release from tuberoinfundibular neurons by high extracellular concentrations of narium ions / V. Taglialatella, L.M. Canzoniera, S. Amoroso // Science. - 1972. - V. 176. - P. 412414]. Однак існуючі способи вимагають тривалого обстеження, наявності спеціалістів, які працюють з складною і дорогою апаратурою, яка до того ж часто недоступна для широкого застосування. Прототипом до корисної моделі є спосіб визначення нервово-м'язових закінчень за допомогою методу Більшовського-Грос, який полягає в імпрегнації солей срібла на препаратах скелетних м'язів і порівнянні ступеня розгалуження та величини площі різних за гістологічними характеристиками нервово-м'язових закінчень в нормі і при різних патологічних станах [Лаврентьев Б.И. Методика окраски нервных элементов по Бильшовскому в модификации Грос / Б.И. Лаврентьев // М, 1976. - 96 с.]. Особливостями даного способу є: 1) наявність хімічних реактивів з заданими характеристиками; 2) доступний і безпечний спосіб забору матеріалу; 3) складна методика виконання; 4) необхідність дотримання багаточисленних умов, які суттєво впливають на кінцевий результат (необхідність підтримувати високий температурний режим у приміщенні, де проводиться підготовка зрізів, чітка підтримка рН інкубаційного середовища та концентрації реактивів тощо). Однак даний спосіб вимагає дорогих реактивів, значної затрати часу, спеціального приміщення, неможливість визначити точну топографію нервово-м'язових закінчень в різних частинах тіла. Крім цього ступінь їх порушення може коливатись в залежності від різних факторів. Основним недоліком в методиці виявлення нервово-м'язових закінчень є значні варіації кінцевого результату, поверхнева агрегація частинок срібла, недостатня їх кон'югація з сусідніми структурними компонентами нервово-м'язових закінчень, а відповідно затруднене виявлення гемокапілярів в їх оточенні. Такі недоліки методу Більшовського-Грос суттєво зменшують інформативність методики вивчення гісто-гематичних взаємовідношень у нервовом'язових закінченнях. Задачею корисної моделі є запропонувати такий спосіб визначення структури нервовом'язових закінчень, який би вирішував не тільки питання матеріальних затрат, але й був простим у виконанні і забезпечував об'єктивну оцінку їх стану не тільки в нормі, але й виявляв перебудову у фізіологічних умовах та порушення при різних патологічних станах. Поставлена задача корисної моделі вирішується кількісно-якісним виявленням нервовом'язових закінчень за допомогою кобальт-сульфідного розчину у 2 % розчині диметилсульфоксиду. Такий спосіб дозволяє швидко розрахувати кількісні параметри, які характеризують ступінь розгалуження і площу нервово-м'язових закінчень у фізіологічних умовах і патологічних станах. Обґрунтування такого способу полягає у необхідності і достатності виявлення окремих частин нервово-м'язових закінчень за різних умов. Приклад конкретного виконання. 1 UA 84496 U 5 10 15 20 25 30 Спосіб забарвлення гістологічних зрізів кобальт-сульфідним розчином для виявлення нервово-м'язових закінчень реалізується наступним чином: 1. 88 мМ розчин цистеїну готують змішуванням 0,11 г цистеїну з 10 мл дистильованої води. 2. Для приготування 260 мМ розчину азотнокислого кобальту використовують 0,75 г Со(NО3)2, який розчиняють у 5 мл дистильованої води при t 35 °С. 3. Розчини зберігають при температурі 10 °С в посуді із затемненим склом. 4. Перед використанням обидва розчини змішують у співвідношенні 1:3 і додають 2 мл диметилсульфоксиду. Експозиція - 3-5 хв. 5. Після забарвлення зрізів скелетних м'язів робочий розчин змивають 5 % розчином глюкози і дистильованою водою з наступним дозабарвленням загально гістологічними барвниками (гематоксилін та еозин, пікрофуксин, азур-еозин). 6. Зрізи заключають у полістерол і переглядають під мікроскопом. Результати порівняльного аналізу різних методів виявлення нервово-м'язових закінчень прямого м'яза стегна показані на фіг. 1 і 2. Суттєвими ознаками корисної моделі, схожими із суттєвими ознаками прототипу, є: 1) імпрегнація солей певного розчину, 2) порівняння ступеня розгалуження і площі нервовом'язових закінчень, 3) морфологічна інтерпретація про стан нервово-м'язових закінчень в різних умовах. Особливостями пропонованої корисної моделі, які забезпечують її промислове впровадження, є: 1) дешевизна реактивів, 2) невибагливість температурного режиму для обробки зрізів, 3) тривалий термін зберігання препаратів без подальшого "вицвітання", 4) покращення імпрегнації кобальтових частинок з внутрішньом'язовими нервовими елементами, 5) візуалізація в процесі приготування препаратів кровоносних судин, які забезпечують живлення нервово-м'язових закінчень, що робить вищевказаний спосіб загальнодоступним для широкого кола дослідників. Вище вказаний приклад конкретного виконання корисної моделі свідчить про її можливе практичне застосування. Перелік фігур та умовні позначення Фіг. 1. Гістоструктура нервово-м'язового закінчення прямого м'яза стегна виявлена за допомогою азотнокислого срібла. Фіг. 2. Гістоструктура нервово-м'язового закінчення прямого м'яза стегна виявлена за допомогою кобальт-сульфідного розчину з 2 % диметилсульфоксиду: 1 - термінальні розгалуження аксона, 2 - ядро нейролемоциту, 3 - гемокапіляр, 4 - м'язове волокно, 5 - міоядро. 35 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 Спосіб забарвлення гістологічних зрізів кобальт-сульфідним розчином для виявлення нервовом'язових закінчень, який полягає у тому, що здійснюють імпрегнацію наперед приготовленого розчину на препаратах скелетних м'язів, порівнюють ступінь розгалуження та величини площі різних за гістологічними характеристиками нервово-м'язових закінчень в нормі і при різних патологічних станах, здійснюють морфологічну інтерпретацію про стан нервово-м'язових закінчень в різних умовах, який відрізняється тим, що для імпрегнації вводять кобальтсульфідний розчин у 2 % розчині диметилсульфоксиду. 2 UA 84496 U Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3