Спосіб моделювання запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта щурів

Реферат: Спосіб моделювання запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта щурів полягає у введенні купренілу в дозі 20 мг/кг маси тіла щурів 7 днів на тиждень протягом 55 діб. Щурам додатково вводять препарат варфарин у дозі 10 мг/кг 5 разів на тиждень. UA 85506 U (54) СПОСІБ МОДЕЛЮВАННЯ ЗАПАЛЬНО-ДИСТРОФІЧНИХ ПРОЦЕСІВ СПОЛУЧНОТКАНИННОГО МАТРИКСУ ПАРОДОНТА ЩУРІВ UA 85506 U UA 85506 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, конкретно до стоматології, і може бути використана для створення моделі запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта для можливості експериментального вивчення патогенезу пародонтиту і розробки методів профілактики і медикаментозного лікування даного захворювання. Характерною рисою цієї тканини є наявність у ній, окрім клітин (фібробласти, гладкі клітини, макрофаги), сполучнотканинного матриксу (СТМ). Основними компонентами СТМ є фібрилярні білки (колагени та еластини) і полісахариди (протеоглікани та глікопротеїни). Найбільш близьким до пропонованого способу моделювання запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта є спосіб моделювання пародонтиту з ураженням сполучної тканини пародонта (ПУ № 67897), за яким тваринам з питною водою вводять ксенобіотик купреніл в дозі 20 мг/кг маси тіла щурів 5 днів (підряд, з перервою, два дні) на тиждень протягом 55 діб. Однак при використанні цього способу у експериментальних тварин спостерігається незначна резорбція кісткових структур пародонта. Сьогодні відомий препарат варфарин - антагоніст вітаміну K, введення якого призводить до порушень формування кальційзв'язуючих зон факторів згортання крові та білка кісткової тканини - остеокальцину, наслідком чого є недостатність зв'язування ними іонів кальцію, що викликає процеси остеорезорбції. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу моделювання пародонтиту з ураженням сполучної тканини пародонта шляхом введення тваринам препарату, який є антагоністом вітаміну К, за рахунок чого відбувається збільшення впливу на сполучнотканинний матрикс (СТМ) - підсилення запальних явищ в тканинах, распад глікопротеїнів СТМ, зниження вмісту вільного оксипроліну, що дозволить отримати модель запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта. Поставлена задача вирішується тим, що в способі моделювання запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта щурів, що полягає у введенні купренілу в дозі 20 мг/кг маси тіла щурів 7 днів на тиждень протягом 55 діб, згідно з корисною моделлю, щурам додатково вводять препарат варфарин у дозі 10 мг/кг маси тіла щурів 5 разів на тиждень. Причинно-наслідкові зв'язки: додаткове введення варфарину викликає: підсилення процесів перекисного окису ліпідів (ПОЛ) у тканинах ротової порожнини і у кістці альвеолярного відростка; недостатнє функціонування антиоксидантної системи; недостатність зв'язування іонів кальцію за рахунок порушень формування кальційзв'язуючих зон факторів згортання крові та білка кісткової тканини, що дозволяє отримати значну резорбцію кісткових структур пародонта. Опис способу Спосіб був здійснений в експериментальному відділі ДУ "1С АМНУ". В експерименті взяли участь 18 самців щурів. Основна група 10 самців, інтактна група - 8 самців. В експерименті було 2 групи щурів: 1 інтактна - 8 щурів утримувались на стандартному раціоні віварію, основна - 10 щурів протягом 55 діб отримували з питною водою купреніл в дозі 20 мг/кг маси тіла щурів та варфарин у дозі 10 мг/кг 5 разів на тиждень. По завершенні експериментів тварин виводили з експериментів шляхом тотального кровопускання із серця, проведеного під наркозом (тіопентал натрію 40 мг/кг). Попередньо відокремивши ясна, виділяли верхні та нижні щелепи. Об'єктами біохімічних досліджень були сироватка крові, надосадова рідина гомогенатів кістки альвеолярного відростка та ясен (25 мг/мол). Надосадову рідину одержували шляхом центрифугування в центрифузі РС-6 протягом 15 хвилин при 3000 об./хв при температурі +4 °C. Для оцінки стану тканин щурів визначали біохімічні показники сироватки крові уніфікованими методами, використовуючи комерційні набори реактивів: активність лужної фосфатази (сер. 35/100); вміст кальцію (сер. 18/200); вміст фосфору (сер. 20/200); вміст магнію (сер. 18/100); вміст міді (сер. 14/50). Рівень процесів перекисного окислювання ліпідів (ПОЛ) оцінювали по вмісту малонового діальдегіду (МДА) тіобарбітуровим методом [Стальная И.Д. Метод определения диеновых конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И. Стальная, Т. Гаришвили // Современные методы биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. - М., 1977. - С. 63-64.]. Активність кислої фосфатази (КФ) визначали за методом Bessay et. al у модифікації А. П. Левицкого із соавт. [Левицкий А.П. Сравнительная оценка трёх методов определения активности фосфатаз слюны человека / А. Левицкий, А. Марченко, Т. Рыбак // Лаб. дело.-1972. №10. - С. 624-625.]. Стан мінерального обміну в кістці альвеолярного відростка щурів визначали 1 UA 85506 U 5 10 15 по активності лужної фосфатази (ЩФ) [Левицкий А.П. і др., 1972], вмісту кальцію й фосфору, за допомогою комерційних наборів реактивів. Стан сполучної тканини оцінювали по вмісту сіалових кислот у сироватці крові за допомогою набору (сер. 0910), глікозаміногліканів (ГАГ) у тканинах ротової порожнини [Метод определения гликазаминогликанов в биологических жидкостях. / [П. Шараев, В. Пишков, Н. Соловьева, Т. Широкова, Н. Зворыгина, А. Солопаев, Н. Алексеева] // Лаб. дело.-1987. - № 5. - С. 330-332.], стан колагену - по вмісту оксипроліну в яснах щурів [Шараев П. Н. Метод определения свободного и связанного оксипролина в сыворотке крови. / П. Шараев. // Лаб. дело.-1981. - № 5. - С. 283-285.]. Виділені щелепи щурів піддавали морфометрическому дослідженню. Ступінь резорбції кістки альвеолярних відростків нижньої та верхньої щелеп щурів оцінювали методом А.В. Ніколаевої [Николаева А.В. Влияние некоторых нейротропных средств на состояние тканей при раздражении верхнего шейного симпатического узла: Автореф. дис. канд. мед. наук / А. Николаева - Харьков, 1967.-29 с]. Результати досліджень Дослідження показали, що введення варфарину (В) і купренілу (К), що вводили у дозі 20 мг/кг маси тіла щурів у продовженні 55 діб, викликало значне посилення резорбції кісткових структур пародонта: на 27,4 % - на нижній щелепі (р=0,001) і на 23,5 % - на верхній (р=0,002) (від 100 % в інтактних групах (табл. 1). 20 Таблиця 1 Показник резорбції (%) кістки альвеолярного відростка щурів при моделюванні пародонтиту (М±m; р) Групи тварин Інтактна Модель (В+К) Нижня щелепа 30,7±1,5 39,1±0,8 р 0,001 Верхня щелепа 22,2±0,9 27,5±1,8 Р=0,02 При моделюванні пародонтиту було виявлено двократне збільшення активності запального ферменту кислої фосфатази (КФ) у тканинах ротової порожнини. У кістці альвеолярного відростка активність КФ збільшилася у 3 рази (табл. 2) 25 Таблиця 2 Активність кислої фосфатази в тканинах ротової порожнини щурів при моделюванні пародонтиту (М±т; р) Групи тварин Інтактна Модель (В+К) 30 35 Активність КФ (рН 4,8) (мкмоль/г) Ясна Кістка альвеолярного відростка 3,51±1,27 1,01±0,45 8,82±0,17 3,08±0,60 р=0,004 р=0,02 При моделюванні пародонтиту шляхом сумісного введення варфарину і купренілу при проведенні досліджень спостерігалося збільшення змісту силових кислот у сироватці крові відносно інтактної групи, що свідчило про посилення запальних явищ у тканинах та про розпад глікопротеїнів СТМ під дією нейрамінідази. Вміст загального оксипроліну зменшився у 3,4 разу, спостерігалося підсилення процесів ПОЛ, знижувалась у 2 рази активність каталази у сироватці крові. Проведені біохімічні дослідження свідчать про деградацію СТМ пародонта під впливом сумісного введення варфарину і купренілу. Хронічне введення препаратів протягом 55 діб викликає значне підсилення резорбції кісткових структур пародонта, що пов'язано з викликаним K-авітамінозом у організмі тварин. Таким чином, за допомогою сумісного введення варфарину і купренілу була відтворена експериментальна модель запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта, яка у значному ступені аналогічна пародонтиту людини. 40 2 UA 85506 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Спосіб моделювання запально-дистрофічних процесів сполучнотканинного матриксу пародонта щурів, що полягає у введенні купренілу в дозі 20 мг/кг маси тіла щурів 7 днів на тиждень протягом 55 діб, який відрізняється тим, що щурам додатково вводять препарат варфарин у дозі 10 мг/кг 5 разів на тиждень. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3