Спосіб комплексного лікування стабільного вітиліго

Реферат: Винахід належить до медицини, а саме до дерматовенерології, і може бути використаний для відновлення пігментації шкіри, що виникла внаслідок стабільного вітиліго, при якому виконують комплексне лікування стабільного вітиліго шляхом введення у депігментовану ділянку шкіри сумісно культивованих кератиноцитарноцитів та меланоцитів з наступним проведенням фототерапії, де спочатку на двох виділених ділянках нормально пігментованої шкіри, діаметром 3-5 мм кожна, індукують пігментацію за допомогою сеансів вузькосмугової фототерапії 311 нм через день, кожного разу збільшуючи дозу на 20 %, кількість процедур фототерапії і початкова доза залежать від фототипу шкіри за Фітцпатріком, а саме: для пацієнтів з І-ІІ фототипом шкіри за Фітцпатріком із 80 мДж/см кількість процедур 5, для пацієнтів з III-IV фототипом шкіри за UA 116071 C2 (12) UA 116071 C2 Фітцпатріком курс фототерапії починають з 120 мДж/см, кількість процедур від 5 до 8, потім після місцевої інфільтраційної анестезії за допомогою панч-біопсії проводять забір біоптатів шкіри, з яких в умовах біотехнологічної лабораторії виділяють та культивують кератиноцити і меланоцити для подальшого виготовлення індивідуалізованого клітинного препарату та лікування, після чого на депігментовані ділянки шкіри наносять аплікаційну анестезію, ін'єкційно 2 вводять власну плазму пацієнта, збагачену тромбоцитами, у кількості 1 мл на 10 см шкіри, один раз на 2-3 тижні, повторюючи процедуру 2-3 рази, далі ін'єкційно вводять отриманий в умовах біотехнологічної лабораторії індивідуалізований клітинний препарат і, починаючи з другого дня, опромінюють вказані ділянки з вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм з початковою дозою фототерапії залежно від фототипу шкіри за Фітцпатріком, при цьому пацієнтів з III-IV фототипом шкіри, в яких відновлення пігментації відбулося лише на 60-65 %, виконують повторне введення індивідуалізованого клітинного препарату, але не раніше, ніж через 2 місяці після першого введення, контроль відновлення пігментації здійснюють в динаміці та після проведеного лікування за допомогою цифрової дерматоскопії. UA 116071 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід належить до медицини, а саме до дерматовенерології, і може бути використана для відновлення пігментації шкіри, що виникла внаслідок стабільного вітиліго. Порушення пігментації, що проявляється у вигляді різко обмежених депігментованих плям, які можуть розташовуватись на будь-яких ділянках шкіри, волосся та сітківці ока, призводять до низки психо-соціальних проблем і зниження якості життя хворих на вітиліго. Відомо, що для відновлення пігментації на ділянках шкіри, уражених вітиліго, традиційно використовується лише фототерапія або застосування її із зовнішньою медикаментозною терапією (глюкокортикоїди ти інгібітори кальціоневрину). Проте такий підхід не дозволяє досягти тривалого та вираженого клінічного ефекту. Існують сучасні та більш ефективні методи - трансплантація культивованих меланоцитів (1). Однак досягти високого ступеня репігментації та стійких результатів за допомогою використання виключно культивованих меланоцитів не є можливим. Це відбувається, вочевидь, через те, що не всі із підсаджених на попередньо деепітелізовану поверхню меланоцитів мають необхідні умови для життєдіяльності, тому частина з них гине. Також до недоліків цього методу лікування можна віднести і те, що плями вітиліго готують до пересадки клітин за допомогою дермабразії або аблаційного лазера, що створює відкриту ранову поверхню, чим суттєво підвищується ймовірність побічних ефектів. Відомо також, що для відновлення пігментації на ділянках, уражених вітиліго використовують внутрішкірне введення або нанесення на попередньо деепітелізовану поверхню клітинної суспензії із сумісно культивованих меланоцитів та кератиноцитів (2). Але означена методика також передбачає підготовку ділянки вітиліго до трансплантації клітин за допомогою дермабразії або абляційних лазерів (Er: YAG- або СО2-лазера), що також створює значний ризик інфікування за рахунок створення великої відкритої ранової поверхні, рубцювання та небажаного ефекту "бруківки". Найбільш близькою до заявленого технічного рішення є розробка, в якій для лікування стійкої форми вітиліго використовують трансплантацію сумісно культивованих меланоцитів та кератиноцитів у комбінації з ультрафіолетовим опроміненням реципієнтної ділянки (3). Завдяки цьому у пацієнтів із вітиліго було отримано достатній ефект терапії. Але вказаний метод має наступні вади: - травматичність; - висока ймовірність побічних ефектів: інфікування, рубцювання, ефекту "бруківки" тощо; - відсутність забезпечення оптимальних умов життєдіяльності трансплантованим клітинам; - недоступність до широкого застосування методу через необхідність введення значної кількості культивованих клітин, що є високовартісним. В основу винаходу поставлена задача вдосконалення способу комплексного лікування вітиліго за рахунок застосування сумісно культивованих кератиноцитів та меланоцитів, власної плазми пацієнта, збагаченої тромбоцитами (PRP), та фототерапії. Поставлена задача вирішується тим, що, згідно з винаходом, спочатку на двох виділених ділянках нормально пігментованої шкіри, діаметром 3-5 мм кожна, індукують пігментацію за допомогою сеансів вузькосмугової фототерапії 311 нм через день, кожного разу збільшуючи дозу на 20 %, кількість процедур фототерапії і початкова доза залежать від фототипу шкіри за Фітцпатріком, а саме: для пацієнтів з І-ІІ фототипом шкіри за Фітцпатріком із 80 мДж/см, кількість процедур 5, для пацієнтів з III-IV фототипом шкіри за Фітцпатріком курс фототерапії починають з 120 мДж/см, кількість процедур від 5 до 8, потім після місцевої інфільтраційної анестезії за допомогою панч-біопсії проводять забір біоптатів шкіри, з яких в умовах біотехнологічної лабораторії виділяють та культивують кератиноцити і меланоцити для подальшого виготовлення індивідуалізованого клітинного препарату та лікування, після чого на депігментовані ділянки шкіри наносять аплікаційну анестезію, ін'єкційно вводять власну плазму 2 пацієнта, збагачену тромбоцитами у кількості 1 мл на 10 см шкіри, один раз на 2-3 тижні, повторюючи процедуру 2-3 рази, далі ін'єкційно вводять отриманий в умовах біотехнологічної лабораторії індивідуалізований клітинний препарат і, починаючи з другого дня, опромінюють вказані ділянки з вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм з початковою дозою фототерапії залежновід фототипу шкіри за Фітцпатріком, а саме: для пацієнтів з І-ІІ фототипом шкіри із 80 мДж/см, для пацієнтів з III-IV фототипом шкіри - з 120 мДж/см, при цьому пацієнтів з III-IV фототипом шкіри за Фітцпатріком, в яких відновлення пігментації відбулося лише на 60-65 %, виконують повторне введення індивідуалізованого клітинного препарату, але не раніше ніж через 2 місяці після першого введення, контроль відновлення пігментації здійснюють в динаміці та після проведеного лікування за допомогою цифрової дерматоскопії. Спосіб виконується наступним чином: 1 UA 116071 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Спочатку створюють індукцію пігментації донорської ділянки шкіри за допомогою вузькосмугової NB UVB 311 нм (збільшуючи дозу кожного сеансу на 20 % та починаючи в залежності від фототипу шкіри за Фітцпатріком, а саме для пацієнтів з І-ІІ фототипом шкіри за Фітцпатріком із 80 мДж/см, кількість процедур 5, для пацієнтів з III-IV фототипом шкіри за Фітцпатріком курс фототерапії починають з 120 мДж/см, кількість процедур від 5 до 8). Потім виконують забір донорської ділянки шкіри за допомогою панч-біопсії (діаметром 3-5 мм) під місцевою інфільтраційною анестезією (2 % лідокаїном після попередньої проби) та передають до біотехнологічної лабораторії для культивування та виготовлення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату. Сумісне використання кератиноцитів та меланоцитів є необхідним, так як саме кератиноцити, які виділяють більшу кількість цитокінів, регулюють ріст та диференціацію меланоцитів. Важливо і те, що останні зберігають свої фізіологічні особливості при сумісному культивуванні з кератиноцитами. Одночасно з цим вводять внутрішкірно власну плазму пацієнта, збагачену тромбоцитами (РЯР);на попередньо анестезовану (за допомогою аплікаційної анестезії) ділянку вітиліго 1 раз на 2-3 тижня, щільність ін'єкцій - 1,5-5 мм, процедуру проводять тричі. Локальне створення необхідної концентрації факторів росту, зокрема епідермального фактору росту (EGF), шляхом введення власної плазми пацієнта, збагаченої тромбоцитами, дозволяє створити оптимальні умови для життєдіяльності кератиноцитів і меланоцітів. Потім ін'єкційно вводять індивідуалізований кератиноцитарно-меланоцитарний препарат із 2 розрахунку 1 млн. клітин на 1 см депігментованої ділянки шкіри, в ділянки знебарвленої шкіри, на які попередньо було нанесено аплікаційну анестезію (наприклад крем "Емла"). Використання панч-біопсії та подальше ін'єкційне введення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату дозволяє уникнути відкритої ранової поверхні на відміну від аблаційних методів обробки, що запобігає ризику інфікування, рубцювання, ефекту "бруківки" тощо. Починаючи з 2 дня після цього, проводять опромінення ділянок вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм, курс складається з 20-30 процедур, які проводять через день, збільшуючи дозу кожного сеансу на 20 %. Пацієнтам з III-IV фототипом шкіри за Фітцпатріком, в яких відновлення пігментації відбулося лише на 60-65 %, виконують повторне введення індивідуалізованого клітинного препарату, але не раніше ніж через 2 місяці після першого введення. Поєднання з вузькосмуговою фототерапією дозволяє значно зменшити кількість введених клітин, що при збереженні вираженого значного результату лікування за заявленим способом робить його фінансово доступним для широкого впровадження. Динамічний контроль за відновленням пігментації та оцінку результатів лікування проводили за допомогою цифрової дерматоскопії. Виявлено відновлення пігментації ураженої ділянки до 70-100 % майже в усіх пацієнтів із стійкою формою вітиліго. Суть способу пояснюється прикладами. Приклад № 1 Хвора Т., 1981 р. н. Скарги на появу білих плям з чіткими межами на передній поверхні живота та в ділянці чола розмір плям - від 2 до 7 см у діаметрі. З анамнезу плями з'явились 9 років тому після нервового стресу, помірно збільшувались у розмірі наступні 5 років. Останні 4 роки плями не збільшувались у розмірах, не сверблять. Діагноз: вітиліго, сегментарна форма. Фототип шкіри за Фітцпатріком III. Попереднє лікування результату не дало. Проведено п'ятиетапне лікування за заявленим способом. Перший етап - індукція пігментації в ділянці правої сідниці за допомогою вузькосмугової NB UVB 311 нм, проведено 7 сеансів через день, 2 починаючи із 120 мДж/ см , збільшуючи дозу кожного сеансу на 20 %. Другий етап - забір 2-ох шматків донорської ділянки шкіри за допомогою панч-біопсії (діаметром 3 мм) під місцевою інфільтраційною анестезією (2 % лідокаїном після попередньої проби) та передача до біотехнологічної лабораторії для культивування та підготовки індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату. Третій - внутрішкірне введення PRP на попередньо анестезовану (за допомогою аплікаційної анестезії) ділянку вітиліго 1 раз у 2 тижня, щільність ін'єкцій - 4-5 мм, процедуру проводили двічі. Четвертий етап - внутрішкірне введення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату із розрахунку 1 млн. клітин 2 на 1 см депігментованої ділянки шкіри у знебарвлені ділянки, на які попередньо було нанесено аплікаційну анестезію (наприклад крем "Емла"). П'ятий етап - опромінення ділянок вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм, курс складається з 30 процедур через день, з другого дня після введення індивідуалізованого клітинного препарату. Доза фототерапії починається з 120 мДж/ 2 см , кожного разу збільшуючись на 20 %. 2 UA 116071 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 За даними, отриманими за допомогою цифрових фотографії та дерматоскопії, зафіксовано зменшення плям вітиліго на 65 % та відновлення пігменту шкіри. Шостий етап - через два місяці, після першого введення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату була проведена процедура повторного введення 2 індивідуалізованого клітинного препарату із розрахунку 1 млн. клітин на 1 см депігментованої ділянки шкіри у знебарвлені ділянки, на які попередньо було нанесено аплікаційну анестезію (наприклад крем "Емла"). За даними, отриманими за допомогою цифрових фотографії та дерматоскопії, зафіксовано зменшення плям вітиліго на 90 % та відновлення пігменту шкіри. Приклад № 2 Хвора О., 1966 р. н. Скарги на появу білих плям з чіткими межами в ділянках очей, декольте, бікіні та на обох колінах, розмір плям - від 2 до 8 см у діаметрі. З анамнезу плями з'явились 20 років тому, причина появи - стрес. Плями помірно збільшились під час вагітності та після пологів 8 років тому. Останні 5 років плями не збільшувались у розмірах. Діагноз: вітиліго, сегментарна форма. Фототип шкіри за Фітцпатріком II. Попереднє лікування помітного результату не дало. Проведено п'ятиетапне лікування за заявленим способом. Перший етап - індукція пігментації в ділянці правої сідниці за допомогою вузькосмугової NB UVB 311 нм, проведено 5 сеансів через 2 день, починаючи із 80 мДж/ см , збільшуючи дозу кожного сеансу на 20 %. Другий етап - забір 2ох шматків донорської ділянки шкіри за допомогою панч-біопсії (діаметром 3 мм) під місцевою інфільтраційною анестезією (2 % лідокаїном після попередньої проби) та передача до біотехнологічної лабораторії для культивування та підготовки індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату. Третій - внутрішкірне введення PRP на попередньо анестезовану (за допомогою аплікаційної анестезії) ділянку вітиліго 1 раз у 2 тижня, щільність ін'єкцій - 4-5 мм, процедуру повторювали двічі. Четвертий етап - внутрішкірне введення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату із розрахунку 1 2 млн. клітин на 1 см депігментованої ділянки шкіри, у ділянки знебарвленої шкіри, на які попередньо було нанесено аплікаційну анестезію (наприклад крем "Емла"). П'ятий етап опромінення ділянок вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм, курс складається з 20 процедур через день, з другого дня після введення індивідуалізованого клітинного препарату. Доза 2 фототерапії починається з 80 мДж/ см , кожного разу збільшуючись на 20 %. За даними, отриманими за допомогою цифрових фотографії та дерматоскопії, виявлено зменшення плям вітиліго на 85 % та відновлення пігменту шкіри. Всього за заявленим способом проліковано 27 пацієнтів, з яких 6 - чоловіків, решта - жінки, у віці від 25 до 59 років. У всіх випадках відмічена позитивна динаміка відновлення пігменту шкіри до 80-100 % та поліпшення психоемоційного фону пацієнтів. У порівнянні з прототипом, запропонований спосіб комплексного лікування стабільного вітиліго, за рахунок оригінальної методики забору, вирощування та введення індивідуалізованого кератиноцитарно-меланоцитарного препарату, комбінації із PRP-терапією та NB UVB 311 нм, дозволяє зменшити травматичність процесів забору та трансплантації клітин, скоротити термін лікування, забезпечити досягнення тривалого клінічного ефекту, відновити пігментацію майже на 100 %, подолати психологічний дискомфорт, підвищити якість життя пацієнтів, зробити процес лікування безпечним та фінансово доступним для пацієнтів. Джерела інформації: 1. Guerra L., Сapurro S., Melchi F., et al. Treatment of "stable" vitiligo by Timedsurgery and transplantation of cultured epidermal autografts //Arch. Dermatol. - 2000. - V. 136. - P. 1380-1389. 2. Beck A.J., Phillips J., Smith-Thomas L., et al. Development of a plasma polymerized surface suitable for the transplantation of keratinocyte-melanocyte cocultures for patients with vitiligo //Tissue Eng. - 2003. - V. 9. - P. 1123-1131. 3. Kyoichi Matsuzaki, Norio Kumagai. Treatment of vitiligo with autologous cultured keratinocytes in 27 cases //Eur J Plast Surg. - 2013. - V. 36. - P. 651-656. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 55 60 Спосіб комплексного лікування стабільного вітиліго шляхом введення у депігментовану ділянку шкіри сумісно культивованих кератиноцитарноцитів та меланоцитів з наступним проведенням фототерапії, який відрізняється тим, що спочатку на двох виділених ділянках нормально пігментованої шкіри, діаметром 3-5 мм кожна, індукують пігментацію за допомогою сеансів вузькосмугової фототерапії 311 нм через день, кожного разу збільшуючи дозу на 20 %, кількість процедур фототерапії і початкова доза залежать від фототипу шкіри за Фітцпатріком, а саме: для пацієнтів з І-ІІ фототипом шкіри за Фітцпатріком із 80 мДж/см кількість процедур 5, для 3 UA 116071 C2 5 10 15 пацієнтів з III-IV фототипом шкіри за Фітцпатріком курс фототерапії починають з 120 мДж/см, кількість процедур від 5 до 8, потім після місцевої інфільтраційної анестезії за допомогою панчбіопсії проводять забір біоптатів шкіри, з яких в умовах біотехнологічної лабораторії виділяють та культивують кератиноцити і меланоцити для подальшого виготовлення індивідуалізованого клітинного препарату та лікування, після чого на депігментовані ділянки шкіри наносять аплікаційну анестезію, ін'єкційно вводять власну плазму пацієнта, збагачену тромбоцитами, у 2 кількості 1 мл на 10 см шкіри, один раз на 2-3 тижні, повторюючи процедуру 2-3 рази, далі ін'єкційно вводять отриманий в умовах біотехнологічної лабораторії індивідуалізований клітинний препарат і, починаючи з другого дня, опромінюють вказані ділянки з вітиліго за допомогою NB UVB 311 нм з початковою дозою фототерапії залежно від фототипу шкіри за Фітцпатріком, при цьому пацієнтів з III-IV фототипом шкіри, в яких відновлення пігментації відбулося лише на 60-65 %, виконують повторне введення індивідуалізованого клітинного препарату, але не раніше, ніж через 2 місяці після першого введення, контроль відновлення пігментації здійснюють в динаміці та після проведеного лікування за допомогою цифрової дерматоскопії. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4