Спосіб виявлення сполук, які придатні для лікування або профілактики ожиріння (варіанти), та застосування таких сполук для одержання лікарського засобу (варіанти)

1. Спосіб виявлення сполук, які придатні для лікування або профілактики ожиріння, який відрізняється тим, що відбирають ті сполуки, які здатні інгібувати у ссавців і насамперед у людини активність щонайменше однієї карбоангідрази, яка зустрічається в організмі ссавців. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що щонайменше одну сполуку вводять у контакт щонайменше з однією карбоангідразою і потім ідентифікують ті сполуки, які здатні інгібувати активність цієї щонайменше однієї карбоангідрази. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують карбоангідрази, які зустрічаються в організмі гризунів або людини. 4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що використовують карбоангідрази, які зустрічаються в організмі людини. 5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують карбоангідрази підтипів II та/або V, які зустрічаються в організмі ссавців, насамперед людини. 6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що використовують карбоангідрази підтипу V, які зустрічаються в організмі ссавців, насамперед людини. 7. Спосіб за п.2, який відрізняється тим, що використовують карбоангідрази, які представлені у вигляді виділених ферментів, отриманих хімічним або біотехнологічним методом, при цьому зміну активності карбоангідраз під впливом досліджува 2 (19) 1 3 74588 ського засобу, призначеного для лікування або профілактики ожиріння. Даний винахід відноситься до способу виявлення сполук, які придатні для лікування та/або профілактики ожиріння. Винахід відноситься також до застосування сполук, які здатні інгібувати у ссавців ліпогенез, який відбувається dе noνο, і які практично не впливають на центральну нервову систему (ЦНС), для одержання лікарських засобів, які призначені для лікування та/або профілактики ожиріння. В даний час безупинно зростає гострота проблеми, яка пов'язана із погіршенням здоров'я населення через ожиріння (або повноту), обумовленого в основному незбалансованим харчуванням та вживанням у їжу продуктів із занадто високим вмістом жирів, що найбільше актуально насамперед для промислово розвинених країн. При збільшенні серед усього населення тієї або іншої країни відсоток людей, які страждають від надлишкової ваги, зростає і число ускладнень, які є наслідком ожиріння, починаючи від простої незадоволеності людиною своїм зовнішнім виглядом і закінчуючи серцево-судинними захворюваннями або навіть розвитком деяких форм діабету. З урахуванням цього до даного часу вже були розроблені певні терапевтичні методи, які спрямовані на лікування або профілактику ожиріння. Як приклад при цьому можна назвати застосування сполук, які інгібують ліпази, дія яких заснована на зниженні ступеню розщеплення жирів у кишечнику і на зменшенні таким шляхом виходу енергії в процесі травлення. Таким чином, при подібній терапії харчові жири щонайменше частково знову виводяться з організму в нерозкладеному вигляді. Разом з тим існує необхідність у розробці нових терапевтичних підходів для лікування та/або профілактики ожиріння як доповнення до вже відомих терапевтичних методів. При створенні винаходу несподівано було встановлено, що сполуки, які здатні інгібувати у ссавців і насамперед у людини ліпогенез, який відбувається de novo, придатні для ефективного лікування та/або профілактики ожиріння. При цьому найкращі результати досягаються при застосуванні зазначених сполук протягом тривалого періоду часу, наприклад протягом декількох тижнів. Відповідно до цього об'єктом даного винаходу є спосіб виявлення сполук, які придатні для лікування та/або профілактики ожиріння, який полягає в тому, що вибирають ті сполуки, які здатні інгібувати у ссавців і насамперед у людини ліпогенез, який відбувається dе noνο. Крім цього об'єктом винаходу є застосування сполук, які здатні інгібувати у ссавців і насамперед у людини ліпогенез, який відбувається dе noνο, і які практично не впливають на ЦНС, наприклад протисудомної дії, для одержання лікарських засобів, які призначені для лікування та/або профілактики ожиріння. Під поняттям "літогенез, який відбувається dе noνο" (нижче скорочено називаний DN-Л) мається на увазі синтез аутогенних жирних кислот з вугле 4 водів, який відбувається в організмі ссавців. Ця реакція синтезу відбувається в цитозолі соматичних клітин та заснований на так званому циклі лимонної кислоти або циклі Кребса-Мартіуса. У цьому циклі у ході аутогенної біохімічної реакції з двох компонентів, одним з яким є піруват, джерелом якого є вуглеводи, а іншим є гідрокарбонат, через різні проміжні сполуки, до яких належать, зокрема, малеат, фумарат та ct-кетоглутарат, в остаточному підсумку утвориться цитрат. При цьому цитрат, оскільки він синтезується в надлишку, може перетворюватися через проміжний ацетил-кофермент А у вільні жирні кислоти (ліпідні продукти), з яких утворюються жири і які в наступному можуть накопичуватися в жирових клітках (адипоцитах). Надлишкове відкладення жирів, які утворилися з жирних кислот, у соматичних клітинах може в цілому привести до ожиріння. У циклі лимонної кислоти беруть участь різні ферменти. Метаболізм, який відбувається в циклі лимонної кислоти, в істотному ступені залежить від кількості доступного для реакції гідрокарбонату. При цьому кількість такого доступного для реакції гідрокарбонату у свою чергу залежить від швидкості, з якою він може утворюватися з діоксиду вуглецю. Каталізують подібну рівноважну реакцію, в результаті якої утворюється гідрокарбонат, так званої карбоангідрази. Серед відомих у даний час карбоангідраз та їх ізозимів у каталізі реакцій, в результаті яких відбувається утворення гідрокарбонату, доступного для участі в циклі лимонної кислоти, в організмі ссавців в основному беруть участь ізозими карбоангідраз підтипу II (СА II) та підтипу V (СА V). Найбільш важливу роль при цьому грають карбоангідрази підтипу V, оскільки вони присутні в мітохондріях. У цих мітохондріях також відбувається цикл лимонної кислоти. Всі існуючі можливі методи інгібування DN-Л у клітинах ссавців спрямовані на зниження інтенсивності метаболізму, який відбувається у циклі лимонної кислоти. Тим самим можна зменшувати концентрацію цитрату, який продукується в надлишку, доступного для синтезу жирних кислот. Згідно із представленим винаходом інгібувати DNЛ краще за рахунок інгібування карбоангідраз, які каталізують реакції, в результаті яких утворюється гідрокарбонат, який бере участь у циклі лимонної кислоти. При цьому відповідно до винаходу краще інгібувати карбоангідрази підтипів II та/або V, більш переважно СА V. Сполуки, які здатні неспецифічно інгібувати карбоангідрази (тобто неспецифічні або традиційні СА-інгібітори), відомі і їх вже досить давно застосовують у різних терапевтичних цілях, в основному як діуретики, або в офтальмології. Оглядову інформацію про галузі застосування подібних традиційних СА-інгібіторів можна знайти у С.Т. Supuran, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 10(5) (2000), стор. 575-600. На відміну від цього під "специфічними СА-інгібіторами" маються на увазі 5 74588 6 сполуки, які інгібують в основному тільки один підкислоти), які представляють собою підтип глутатип СА (наприклад, СА V) або певну групу САматних рецепторів, що супроводжується інгібуванпідтипів. Дотепер були відсутні відомості про заням індукованих АМПК потоків. Відповідно до цьостосування традиційних СА-інгібіторів для цілеспго топірамат виявляє яскраво виражену дію на рямованого лікування та/або профілактики ожиЦНС. Разом з тим дотепер залишається невідоріння. мим, чи обумовлені протисудомні властивості тоВважається, що основна причина ожиріння в пірамату вищевказаними факторами, які мають переважній більшості відомих випадків полягає у фармакологічне значення. порівняно високому вмісті чужорідних жирів у їжі, З заявки WO 98/00130 відомо далі, що топіраяку споживає людина. У високорозвинених країмат має і певні фармакологічні властивості, завдянах, таких як США, на частку жирів у всій їжі, яку ки яким він ймовірно придатний для лікування споживають гладкі люди, приходиться до 30%. ожиріння. Подібні властивості топірамату були Відповідно до цього, згідно наявним на сьогоднішвиявлені випадково як побічні дії, які було виявленій день даним, відкладення жиру, які приводять но у ході тривалих досліджень, які проводилися на до ожиріння, обумовлені переважно надмірним пацієнтах, які страждають від епілепсії. Однак доспоживанням харчових жирів, на які інгібування тепер не вдалося встановити, якими саме фармаDN-Л, яке супроводжує метаболізм вуглеводів, не кологічними властивостями топірамату обумовлечинить ніякого впливу. на втрата ваги, яка спостерігалася у пацієнтів, які Дотепер інгібування DN-Л, хоча воно і дозвостраждають від епілепсії. Топірамат належить до ляє також зменшити накопичення жирних кислот у групи сполук, які мають протисудомну дію загальадипоцитах, розглядалося внаслідок незначного ної формули І, які у заявці WO 98/00130 вказані як впливу DN-Л на процес накопичення жирних киспридатні для лікування ожиріння. лот у соматичних клітинах як безперспективний За допомогою запропонованого у винаході шлях лікування та/або профілактики ожиріння в способу вдалося встановити, що топірамат є висолюдини. Оглядову інформацію, яка відображає коактивним СА-інгібітором, насамперед високоакдумку більшості фахівців з цього питання, можна тивним інгібітором карбоангідраз підтипів Π і V, які знайти, наприклад, у М.К. Heiterstem, European зустрічаються в організмі ссавців, і що топірамат Journal of Clinical Nutrition, 53(1) (1999), стор. 53здатний ефективно інгібувати DN-Л у клітинах сса65. Подібна переважна серед фахівців думка певців. Відповідно до цього за допомогою запропорешкоджала дотепер цілеспрямованому пошуку нованого у винаході способу вперше виявилося або розробці лікарських засобів для лікування можливим підтвердити той факт, що фармакологіта/або профілактики ожиріння, принцип дії яких чна побічна дія топірамату, яка дотепер не піддазаснований на інгібуванні DN-Л. валася поясненню і яка виявляється у втраті ваги Однак при створенні даного винаходу несподіпацієнтами, які страждають від епілепсії, в основвано було встановлено, що сполуки, які здатні інгіному обумовлено його здатністю ефективно інгібубувати DN-Л у ссавців і насамперед у людини, вати DN-Л у ссавців. З урахуванням цього можна можуть ефективно використовуватися для лікуочікувати, що запропонований у винаході спосіб у вання та/або профілактики ожиріння і насамперед перспективі дозволить виявляти сполуки, які припри введенні цих сполук відповідним пацієнтам датні для лікування та/або профілактики ожиріння. протягом тривалого періоду часу, наприклад проТим самим за допомогою запропонованого у винатягом шести тижнів. Відповідно до цього, тривале ході способу вперше з'являється можливість поріінгібування DN-Л дозволяє істотно зменшити вагу вняно швидко і просто виявляти фармакологічно тіла у страждаючих ожирінням людей навіть неактивні сполуки, дія яких заснована на інгібуванні зважаючи на те, що власне процес інгібування DNDN-Л. Даний винахід, таким чином, дозволяє щоЛ має лише незначний вплив на накопичення жиру найменше на першій, орієнтованій стадії відбору у адипоцитах. Саме тривале інгібування DN-Л, яке виявляти без проведення тривалих і дорогих досу принципі супроводжується незначним однократлідів dе noνο, таких, наприклад, як досліди з відгоним ефектом, виявляє акумулюючу дію, і яка в довуванням піддослідної тварин, сполуки, дія яких цілому і приводить до значного зменшення маси заснована на зазначеному вище принципі і які тіла. придатні для лікування та/або профілактики ожиТой факт, що запропонований у винаході споріння. сіб дійсно дозволяє цілеспрямовано виявляти Подібні результати є несподіваними з урахусполуки, придатні для лікування та/або профілакванням того факту, що в дослідженнях фармакотики ожиріння, можна підтвердити на прикладі логічних властивостей топірамату, які проводилитакої сполуки, як топірамат. Топірамат являє сося раніше, його СА-інгібувальна ефективність бою антиепілептичний засіб, відомий з заявки ЕР завжди розцінювалася як незначна або навіть 0138441А2. Крім того, топірамат, як відомо, має тільки як занадто низька і тому вважалася такою, широкий фармакологічний спектр дії. Так, зокрема, що не представляє інтерес з терапевтичної точки топірамат здатний блокувати залежні від напруги зору (див., наприклад, В.Е. Maryanoff і ін., Journal натрієві канали і тим самим стабілізувати мемof Medicinal Chemistry, 30 (1987), стор. 880-887; бранний потенціал клітин, він активує рецептори B.E. Maryanoff і ін., Journal of Medicinal Chemistry, гамма-аміномасляної кислоти (ГАМК) і підсилює 41 (1998), стор.1315-1343; S.J. Dodgson і ін., тим самим опосередковуване ГАМК інгібування, Epilepsia 41(1), (2000), стор. 35-39). В цих дослівін має дію інгібітору карбоангідраз і крім цього дженнях, які проводилися раніше, для оцінки САмає здатність інгібувати рецептори каїнату/АМПК інгібувальної активності топірамату в кожному ви(аміно-3-гідрокси-5-метилізоксазол-4-пропіонової падку використовували досліджувані розчини, які 7 74588 8 містять СА різних ссавців, а також різні компоненScozzafava і ін. у Journal of Medicinal Chemistry, 42 ти організму, такі як кров або тканина того чи іншо(1999), стор. 3690-3700 (див. насамперед стор. го органа. 3696). Ці описані в Supuran і ін. та Scozzafava і ін. Відповідно до першого варіанта здійснення методи тестування включені в даний опис як посизапропонованого у винаходи способу придатні для лання. Сполуки, значення інгібувальної концентлікування та/або профілактики ожиріння сполуки рації ІС50 яких при їхньому тестуванні одним з вивиявляють, відбираючи як придатні ті сполуки, які щевказаних стандартних методів з визначення здатні інгібувати активність щонайменше однієї активності in vitro, описаних у Supuran і ін. або карбоангідрази, яка зустрічається в організмі ссаScozzafava і ін., складають щонайменше вців. Так, наприклад, з цією метою щонайменше 10мкмолів/л або менше (що відповідає більш виодну досліджувану сполуку можна вводити в консокій ефективності), можуть бути відібрані відповітакт щонайменше з однією карбоангідразою і потім дно до даного винаходу як придатні сполуки, які відомим методом ідентифікувати ті сполуки, які мають СА-інгібувальну дію (тобто як СА-інгібітори). інгібують активність цієї щонайменше однієї карПри необхідності визначення активності деяких боангідрази. У цьому варіанті здійснення запропопідтипів людських СА може виявитися доцільним нованого у винаході способу переважно застосовикористовувати інші методи, відмінні від засновавувати карбоангідрази, які зустрічаються в ного на застосуванні методу 4організмі ссавців, наприклад людини, або гризунів, нітрофенілацетатестерази. Так, зокрема, може зокрема пацюків, мишей або морських свинок, виявитися більш доцільним використовувати менасамперед карбоангідрази підтипів II та/або V. тоди, які дозволяють порівняно швидко проводити Найбільш переважно застосовувати карбоангідранеобхідні реакції та контролювати їх перебіг. зи, які зустрічаються в організмі людини. Придатні За результатами тесту з визначення фермендля застосування в цих цілях карбоангідрази можтативної активності, заснованого на описаному у на, наприклад, виділяти з організму зазначених Scozzafava і ін. (див. вище) методі з використанссавців і при необхідності очищати або їх можна ням 4-нітрофенілацетатестеразьі (спочатку описаодержувати, що краще, за допомогою відомих хіний у Y. Pocker і J.T. Stone, Biochemistry, 6 (1967), мічних або біотехнологічних методів. стор. 668-678), згідно із представленим винаходом У першому варіанті здійснення запропоновабуло встановлено, що топірамат виявляє яскраво ного у винаході способу зміна активності карбоанвиражену інгібувальну дію на отриману одним з гідраз під впливом досліджуваних сполук перевабіотехнологічних методів людську карбоангідразу жно оцінювати за допомогою добре відомого підтипу II (ІС50=5нмолів/л) і що ця інгібувальна дія досліду з визначення ферментативної активності є значно більш сильною у порівнянні з інгібувальin vitro, використовуючи при цьому карбоангідрази ною дією, яку виявляли ацетазоламід або метазоу вигляді виділених ферментів, які практично не ламід, які є традиційними СА-інгібіторами і які вимістять домішків. Переважно при цьому викорискористовували в дослідах як контрольні речовини. товувати карбоангідрази, які отримані хімічними Людську карбоангідразу підтипу II одержували за або біотехнологічними методами, оскільки такі методом, описаним у Scozzafava і ін. методи дозволяють одержувати їх у найбільш чисЗа результатами цього ж тесту було встановтій формі. Досліди з визначення активності карболено, що топірамат має також яскраво виражену ангідраз in vitro добре відомі в даній галузі. До доінгібувальну дію на отриману біотехнологічним слідів з визначення ферментативної активності in методом мишину карбоангідразу підтипу Va (mCA vitro, які відповідно до даного винаходу дозволяVa) (IC50=74нмолів/л). Однак на відміну від описають визначати зміну активності карбоангідраз, наного у Scozzafava і ін. протоколу проведення дослежать, наприклад, метод, заснований на вимірюліду в даному випадку фермент mCA Va застосованні зміни значення pH під впливом вували в концентрації 120нм. Фермент mCA Va карбоангідраз (див. K.M. Wilbur, N.G. Andersen, одержували відомим шляхом за методом, описаJournal of Biological Chemistry, 176 (1948), стор. ним у H.R. Heck і ін. у Journal of Biological 147-154; G. Sanyal, Т.Н. Maren, Journal of Biological Chemistry, 269 (1994), стор. 24742-24746. З цією Chemistry, 256 (1981), стор. 608-612), метод зупиметою використовували штам бактерій Escherichia неного струменя (див. R.G. Khaliiah, Journal of coli BL 21 (DE3), який трансфектували плазмідним Biological Chemistry, 246 (1971), стор. 2561-2573) вектором, який містить послідовність, яка кодує або метод, заснований на використанні 4mCA Va під контролем Т7-промотору, який індукунітрофенілацетатестерази (див. Y. Pocker, J.T. ється ізопропіл-Р-тіогалактопіранозидом (ШТГ). Stone, Journal of the American Chemical Society, 87 Культуру бактерій вносили при 37°С у рідке сере(1965), стор. 5497-5498). В останньому з зазначедовище Луріа-Бертані, доповнене ампіциліном них методів визначають швидкість гідролізу 4(100мкг/мл), і ріст цієї культури відслідковували нітрофенілацетату під впливом досліджуваної каспектрофотометрично при довжині хвилі 600нм. рбоангідрази, при цьому використовується власПісля досягнення культурою бактерій експонентної тивість карбоангідраз чинити той же вплив, що і фази росту додавали ШТГ у кінцевій концентрації естерази. 1ммоль/л. Після інкубації протягом 3год. (при 37°С У цьому відношенні для визначення САі при перемішуванні) культуру бактерій центрифуінгібувальних властивостей сполук відповідно до гували протягом 15хв. при 7000g і супернатант винаходу переважно використовувати метод тесвідкидали. Отриманий після центрифугування затування, описаний у CT. Supuran і ін. у European лишок (дебрис) розчиняли у 0,1-кратному об'ємі Journal of Medicinal Chemistry, 33 (1998)), стор. двічі дистильованої води та додавали лізоцим (100 577-594 (див. насамперед стор. 592) або в А. мкг/мл). Клітини лізували шляхом обробки ультра 9 74588 10 звуком. З цією метою аліквоти по 10мл отриманої при цьому є адипоцити гризунів. Як клітини людисуспензії бактерій поміщали у відриту зверху скляни також можна використовувати адипоцити та ну посудину і кожен такий зразок обробляли ультгепатоцити. Кращими при цьому є гепатоцити люразвуком 4 рази по 3хв. Після кожного ультразвудини. Використовувані в цьому варіанті здійснення кового імпульсу визначали поглинання способу клітини ссавців можна одержувати звивипромінювання зразками при довжині хвилі чайними методами культивування та/або клону600нм, для чого по 100мкл кожного зразка розбаввання. При цьому можна застосовувати природні ляли 900мкл двічі дистильованої води. Процес або модифіковані біотехнологічними методами завершували в той момент, коли поглинання виклітини ссавців. Якщо при тестуванні сполук опипромінювання зразком при довжині хвилі 600нм саним вище методом потрібно визначати поглизнижувалося приблизно до 1/10 від його вихідного нання радіоактивного випромінювання розчинними рівня. Після лізису клітин додавали СаСІ2-буфер в кислотах проміжними продуктами, які утворюдля зв'язування (фірми Stratagene) і отриманий ються в цитратному циклі, то в якості міченого ізоклітинний лізат очищали на колонці зі смолою, яка топом 14С субстрату переважно використовувати 14 має афінність до кальмодуліну. Подібний метод С -гідрокарбонат (тобто NаН[14С]О3). Якщо ж при очищення заснований на високій афінності зв'язатестуванні сполук описаним вище методом потрібних зі смолою доменів кальмодуліну до пептидної но визначати поглинання радіоактивного випромімітки, яка зв'язується з кальмодуліном, який є принювання кінцевими продуктами, які утворюються в сутнім на N-кінці експресуємого протеїну mCA Va. цитратному циклі, то в якості міченого ізотопом 14С Очищення проводили відомим методом (див. досубстрату переважно використовувати відник "Affinity LIC Cloning and Protein Purification [U-14С]глюкозу. Kit Manual" фірми Stratagene). У цьому другому варіанті здійснення запропоУ відповідності з другим варіантом здійснення нованого у винаході способу здатність сполук інгізапропонованого у винаході способу придатні для бувати DN-Л в організмі ссавців переважно визналікування та/або профілактики ожиріння сполуки чати за методом, описаним у S.A.Hazen та ін. у виявляють шляхом відбору тих сполук, які здатні FASEB Journal, 10(4) (1996), стор. 481-490. Цей зменшувати кількість метаболітів, які утворюються описаний у Hazen і ін. метод тестування включев циклі лимонної кислоти, що відбувається у видіний у даний опис як посилання. Сполуки, які при лених живих клітинах ссавців, або ліпідних продукїхньому тестуванні зазначеним методом, описаним тів, які утворюються в циклі лимонної кислоти. у Hazen та ін., здатні в значній мірі інгібувати погПрийнятними метаболітами, які утворюються в линання радіоактивного випромінювання, яке вициклі лимонної кислоти і кількість яких зменшуєтьпускається міченими ізотопом 14С речовинами, які ся під впливом досліджуваних сполук на величину, можуть служити попередниками в циклі лимонної яка піддається вимірюванню, є розчинні в кислотах кислоти, наприклад поглинання, яке випускається метаболіти, такі як цитрат, малеат, фумарат С-гідрокарбонатом радіоактивного випромінюванта/або -кетоглутарат. Кращим при цьому є цитня цитратом, малеатом, фумаратом та/або рат. До числа інших прийнятних метаболітів налекетоглутаратом, тобто сполуки, ІС50-значення яких жать ліпідні продукти, які утворюються в циклі ливідповідно до цього складає щонайменше 10 монної кислоти, такі як вільні жирні кислоти. У мкмолів/л або менше (що відповідає більш високій цьому другому варіанті здійснення запропонованоефективності), можуть бути відібрані відповідно до го у винаході способу в остаточному підсумку таданого винаходу як придатні сполуки, які задовокож визначають здатність досліджуваних сполук льняють визначеним критеріям. інгібувати активність щонайменше однієї карбоанЗа результатами тесту, який відповідає описагідрази, яка зустрічається в організмі ссавців, одному у Hazen та ін. методу тестування і який пронак застосовувана в цьому випадку модель тестуводили відповідно до даного винаходу, було вставання відрізняється від тієї, котра новлено, що топірамат виявляє яскраво виражену використовується в описаному вище першому ваінгібувальну дію на утворення розчинних у кислоріанті здійснення способу. Принцип, який лежить в тах метаболітів у циклі лимонної кислоти, яка відоснові методу тестування, використовуваного в бувається в отриманих біотехнологічним методом другому варіанті здійснення способу по винаходу, щурячих адипоцитах лінії 3T3-F442A. Подібна інгіполягає в тому, щоб відомим шляхом визначати бувальна дія топірамату (ІС50=348нмолів/л) істотно поглинання радіоактивного випромінювання, яке перевищувала дію такого традиційного САвипускається міченими ізотопом 14С субстратами, інгібітора, як етоксзоламід, який використовували використовуваними в циклі лимонної кислоти, меяк контрольну речовину. таболічними проміжними або кінцевими продуктаВідповідно до найбільш кращого варіанта ми, які утворюються в циклі лимонної кислоти, здійснення запропонованого у винаході способу який відбувається у виділених живих клітинах ссавиявлення сполук, які придатні для лікування вців, і порівнювати отримані результати з результа/або профілактики ожиріння, відбирають ті спотатами, які отримані в іншому в тих же умовах, але луки, які відповідно до описаного вище першого під впливом сполук, які мають СА-інгібувальну дію. варіанту здійснення способу, насамперед за реУ цьому варіанті здійснення запропонованого у зультатами вищеописаного тесту з визначення винаході способу переважно використовувати виферментативної активності in vitro, були відібрані ділені живі клітини таких гризунів, як пацюка, миші як придатні за їх здатністю інгібувати щонайменше або морської свинки, або людини. Кращими при одну карбоангідразу, яка зустрічається в організмі цьому є клітини людини. Як клітини гризунів викоссавців, і які додатково відповідно до описаного ристовуються адипоцити і гепатоцити. Кращими вище другого варіанту здійснення способу також 11 74588 12 були відібрані як придатні за їх здатністю зменшуthe Society for Experimental Biology and Medicine, вати кількість метаболітів, які утворюються в циклі 87 (1954), стор. 334-339, і в J.E.P. Toman і ін. у лимонної кислоти, який відбувається у виділених Journal of Neurophysiology, 9 (1946), с 231. Цей живих клітинах ссавців. Перший варіант здійсненописаний у Chen та ін. та у в Toman та ін. метод ня способу дозволяє досить швидко й ефективно тестування включений у даний опис як посилання. оцінювати здатність сполук інгібувати карбоангідТак, зокрема, сполуки, призначені для введення рази, які зустрічаються в організмі ссавців. Другий пацієнтам протягом тривалого періоду часу для варіант здійснення способу дозволяє одержувати, лікування та/або профілактики ожиріння, практичзокрема, первинні дані про наявність у досліджуно не повинні виявляти ніякої активності при їхваних сполук також здатності проникати у мітохонньому дослідженні за допомогою зазначеного видрії живих клітин ссавців, у яких локалізована СА ще СЕШ-теста, описаного у Chen та ін. та Toman V. Для відбору придатних сполук описані вище та ін., а при їхньому застосуванні й у підвищених перший та другий варіант здійснення запропонодозах, які становлять щонайменше 100мг/кг при ваного у винаході способу можна проводити парапероральному введенні, переважно не повинні лельно або послідовно в будь-якому порядку. виявляти дій, які згідно із прийнятим для даного Відповідно до винаходу сполуки, які здатні інтесту критеріям розглядаються як значимі (тобто гібувати DN-Л у ссавців, придатні для одержання згідно G. Chen та ін. "захисна доза" PD50 повинна лікарських засобів, призначених для лікування становити 100мг/кг при пероральному введенні, та/або профілактики ожиріння. При цьому відбипри цьому зазначені в роботі G. Chen та ін. знарають ті сполуки, які здатні інгібувати щонайменше чення PD50 власне кажучи відповідають широко одну карбоангідразу, яка зустрічається в організмі використовуваному для позначення дози поняттю ссавців. Очевидно, що відібрані сполуки повинні "мінімальна ефективна доза", МЕД). Сполуки, які бути фізіологічно сумісними та задовольняти загабули відібрані як придатні відповідно до запропольним вимогам, які пред'являються до лікарських нованого у винаході способу і які додатково до діючих речовин, наприклад вимогам стосовно нецього в МЕШ-тесті, описаному у Chen та ін., не шкідливості та переносності. Переважно застосовиявили практично ніякої активності, найбільш вувати сполуки, які здатні інгібувати карбоангідрапридатні для одержання лікарських засобів, приззи, які зустрічаються в організмі ссавців, підтипів II начених для лікування та/або профілактики ожита/або V. Найбільш кращими при цьому є сполуки, ріння. Зазначені вище СЕШ- (відповідно МЕШ-) які здатні специфічно інгібувати САII та/або СА V, тести є стандартними фармакологічними тестами, насамперед СА V. які можуть проводитися за загальноприйнятою Відомі в даний час сполуки, наприклад топіраметодикою організаціями, які надають подібні посмат, які мають СА-інгібувальну дію і при тривалому луги, та фірмами (наприклад фірмою "Panlabs"). застосуванні яких у пацієнтів спостерігається змеСполуки, які відповідно до запропонованого у ншення ваги їх тіла, чинять також яскраво виражевинаході способу були відібрані як придатні для ну дію на ЦНС, зокрема протисудомну дію. Однак лікування та/або профілактики ожиріння, можна за наявність побічних дій на ЦНС у сполук, призначезагальноприйнятою технологією переробляти як них для застосування протягом тривалого періоду діючі речовини разом зі звичайними фармацевтичасу для лікування та/або профілактики ожиріння, чними допоміжними речовинами в галенові компочасто є небажаною. Тому сполуки, які відповідно зиції, наприклад у таблетки, капсули, супозиторії до запропонованого у винаході способу були відіабо розчини. Такі галенові композиції можна одебрані як придатні для лікування та/або профілакржувати відомими методами з використанням звитики ожиріння, можна додатково перевіряти на чайних твердих або рідких носіїв, таких, напринаявність у них яких-небудь дій на ЦНС. Так, наклад, як лактоза, крохмаль або тальк, або рідких приклад, подібні сполуки на можливу наявність у парафінів та/або з використанням звичайних фарних протисудомних властивостей. Для дослідженмацевтичних допоміжних речовин, наприклад розня сполук на наявність у них протисудомних власпушувачів для таблеток, гідротропних солюбілізативостей можна використовувати, наприклад, так торів або консервантів. Фармацевтичні композиції, званий "тест із супермаксимальним електрошком" придатні для застосування відповідно до винахо(СЕШ-тест, який іноді називають також "тестом з ду, відомі, наприклад, із заявки ЕР 0138441 А2, а максимальним електрошком" або скорочено МЕШтакож з публікації WO 98/00130. тест), описаний у G. Chen та ін. у Proceedings of Комп’ютерна верстка О. Воробей Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601