Комплексний біотрансплантат, спосіб одержання біотрансплантата для лікування цукрового діабету та спосіб лікування цукрового діабету

1. Комплексний біотрансплантат для лікування цукрового діабету, що складається з органної культури підшлункової залози, який відрізняється тим, що додатково містить органну культуру печінки і фізіологічний розчин, взяті при наступному співвідношенні, ваг. %: органна культура підшлункової тканину останньої, взяту із зони вище жовчного залози 25-30 залози здійснюють у живильному середовищі при органна культура печінки 8-10 ваговому фізіологічний розчин решта. середовище (0,8-1,2):(5-7), протягом 4,5-5,5 діб міхура. 4. Спосіб одержання біотрансплантата за п. 1, який включає виділення фрагментів матеріалу, отримання мікрофрагментів та культивуванням органної культури, який відрізняється тим, що виділені фрагменти підшлункової залози і печінки охолоджують до 3-5 °С, промивають, подрібнюють до мікрофрагментів, повторно промивають, хвилин, а мікрофрагменти печінки відмивають охолодженим до 3-5 °С розчином Хенкса і мікрофрагменти окремо у отриману залози та живильному органну печінки культивують середовищі, культуру причому промивають фізіологічним розчином при t 21-29 °С. 5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що культивування мікрофрагментів співвідношенні підшлункової фрагмент: живильне 2. Біотрансплантат за п. 1, який відрізняється при періодичній зміні живильного середовища тим, що він як органну культуру підшлункової через 11,5-12,5 годин. залози 6. Спосіб за п. 4 або 5, який відрізняється тим, містить тканину хвостової частини підшлункової залози. що використовують 3. Біотрансплантат за п. 1, який відрізняється складі: тим, що він як органну культуру печінки, містить ембріональна теляча сироватка та антибіотик середовище живильне 199, середовище середовище у RPMI, 81884 підшлункової (13) 50-70 (11) протягом UA 3-5 °С (19) при C2 мікрофрагменти підшлункової залози витримують цефазолін 3 наступному при співвідношенні компонентів, об'ємні %: 81884 гідролізат лактальбуміну 4 55-65 середовище Ігла MEM 30-35 5-10. середовище 199 55-65 ембріональна теляча сироватка середовище RPMI 25-34 9. ембріональна теляча сироватка 8,5-9 біотрансплататом за п. 1 шляхом трансплантації антибіотик (0,003-0,005 % розчин) 1,5-2. останнього, Спосіб лікування який цукрового відрізняється діабету тим, що 7. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що трансплантацію виконують у підшкірну жирову культивування печінки клітковину передньої черевної стінки на 40-60 мм здійснюють у живильному середовищі при t 3-5 °С, вище пупка через спільний ін'єкційний канал протягом 4,5-5,5 діб при періодичній зміні через послідовно, 23,5-24,5 години живильного середовища. залози, а потім органну культуру печінки на 9-15 8. Спосіб за п. 4 або 7, який відрізняється тим, мм нижче. що у 10. Спосіб лікування за п. 9, який відрізняється складі: гідролізат лактальбуміну, середовище Ігла тим, що ін'єкцію органної культури роблять у 4-5 MEM та ембріональна теляча сироватка при напрямках мікрофрагментів використовують живильне середовище спочатку від культуру ін'єкційної підшлункової точки. співвідношенні компонентів, об'ємні %: Винахід відноситься до галузі біотехнології і стосується лікарських препаратів (біотрансплантат), які містять речовину із матеріалу тваринного походження для лікування цукрового діабету, способу його одержання та способу лікування цукрового діабету. З літературних та патентних джерел інформації відомі способи одержання культури підшлункової залози [1. Пат. РФ №2008953, МПК 5 A 61N5/02, А 61К3100. Способ лечения сахарного диабета // Горбунов О.М., Белокопытов Ю.Ю., Рововая Л.М. Заявл. 1990. Опубл. 1994], [2. Пат. РФ №2095410, МПК 6 C12N35/00. Способ получения культуры эндокринной ткани // Кирпатовский И.Д., Каитова З.С., Лысенко А.И. Заявл. 1995. Опубл. 1997], але ці способи стосуються переважно отримання культури острівцевих клітин (b-клітин). Слід зазначити, що відомі способи виключають можливість застосування нових багатокомпонентних живильних (ростових) середовищ та антибіотиків нової генерації. Відомі також способи вирощування клітин печінки (одношарова культура) шляхом їх культивування на шматочках слюди [4. Корпачев В.В., Онищенко Д.С. Стимулирующий эффект биологически активных веществ селезенки на функциональную активность гепатоцитов // Физиол. журн. - 1989. Т.35, №3. С.80-83.] або на матрицях із вуглецевого сорбенту [5. Автор. свид. СССР №1578192, МПК 5 С12N5/00. Способ выращивания клеток печени // Осипова Л.Α., Алексеева Т.А., Немлий Н.И., Быкорез А.И. и др. Заявл. 1988. Опубл. 1990]. Але багатоетапна обробка клітинного матеріалу на всіх етапах (центрифугування, трипсинізація тощо) сприяє механічному травмуванню гепатоцитів та зменшенню їх кількості. Відомий також спосіб одержання клітин ембріональної печінки [6. Пат. РФ№2153344, МПК 7 А61К35/407, А61Р43/00. Способ трансплантации эмбриональных печеночных клеток в эксперименте // Тимербулатов В.М., Рахматуллин СИ., Хасанов А.Г. и др. - Заявл. 1999. Опубл. 2000]. Спосіб полягає в тому, що виділену печінку відмивають у середовищі 199, вміщують у свіже середовище 199 та гомогенізують. Гомогенат центрифугують, для трансплантації використовують переважно середній шар, в якому залишається основна кількість живих гепатоцитів. До недоліків цього способу відноситься те, що при гомогенізації відбувається руйнування структури паренхіми печінки і, особливо, при подальшому центрифугуванні, зниження відсотка життєздатних клітин, тобто для реалізації мети даного винаходу необхідним є отримання значно більшої кількості вихідного матеріалу. Найближчим аналогом до винаходу за технічною суттю та досягненим результатом є біотрансплатат, який містить b-клітини підшлункової залози і спосіб отримання його, [3. Пат. РФ №2135193, МПК 6 А61К35/39. Способ получения материала, содержащего бета- клетки поджелудочной железы для трансплантации больным сахарным диабетом с использованием феномена миграции клеток // Скалецкий Н.Н., Шумаков В.И. Заявл. 1997. Опубл. 1999, Бюл. 24]. Біотрансплатат складається із підшлункової залози. Спосіб його отримання полягає у виділенні цілої підшлункової залози, подрібненні її до мікрофрагментів розміром до 1мм, відмиванні цих мікрофрагментів (матеріалу) розчином Хенкса з 5 81884 6 антибіотиками, культивування у культуральних а також тим, що біотрансплантат, як органну матрацах при температурі 35-40°С протягом від культуру підшлункової залози, містить тканину двох діб до шести тижнів при періодичному хвостової частини та тим, що біотрансплантат, як зниженні температури до 4-25°С. При цьому органну культуру печінки, містить тканину одноразово чи періодично знижують концентрацію останньої, взяту із зони вище жовчного міхура. сироватки у культуральному середовищі Спосіб одержання біотрансплатату за п.1, який (середовище 199). включає видалення фрагментів матеріалу, Недоліком цього способу є те, що для отримання мікрофрагментів та культивуванням культивування використовують усю підшлункову органної культури у якому, відповідно до винаходу, видалені фрагменти підшлункової залози і печінки залозу, не враховуючи, що анатомічно b-клітини охолоджують до 3-5°С, промивають, подрібнюють розташовані переважно у її хвостовій частині. Крім до мікрофрагментів, повторно промивають, того, багаторазова зміна температурного режиму мікрофрагменти підшлункової залози витримують та концентрації окремих компонентів (сироватки) при 3-5°С протягом 50-70 хвилин, а ростового середовища змінює (робить несталим) мікрофрагменти печінки відмивають охолодженим фізико-хімічні параметри, що не сприяє адаптації до 3-5°С розчином Хенкса та мікрофрагменти b-клітин та їх проліферації. Досить тривале підшлункової залози і печінки культивують окремо культивування (до 6 тижнів) поступово зменшує у живильному середовищі, причому отриману кількість і функціональну активність b-клітин. органну культуру промивають фізіологічним Таким чином, вказані недоліки знижують розчином при t 21-29°С, а також тим, що життєздатність культури та негативно впливають культивування мікрофрагментів підшлункової на функціональну активність b-клітин. залози здійснюють у живильному середовищі при Відомий спосіб трансплантаційного лікування ваговому співвідношенні тканина підшлункової цукрового діабету, ускладненого гепатопатією, що залози:живильне середовище (0,8-1,2):(5-7) включає імплантацію у черевну стінку реципієнта протягом 4,5-5,5 діб при періодичній зміні ксенокультури неонатальних підшлункових залоз живильного середовища через 11,5-12,5 годин, а та фетальних гепатоцитів [7. Пат. України також тим, що використовують живильне №48859, МПК 6 А61В17/00. Спосіб середовище у складі: середовище 199, трансплантаційного лікування ускладненого середовище RPMI, ембріональна теляча цукрового діабету // Кот О.Г., Турчин І.С., Гусак сироватка та антибіотик цефазолін при В.К., Андрієнко В.В. Заявл. 2002. Опубл. 2002, співвідношенні компонентів, % об'єму (мл) №8], який прийнято за найближчий аналог. Згідно середовище 199 55-65 останньому ксенокультури підшлункової залози та середовище RPMI 25-34 фетальні гепатоцити імплантують через дві ембріональна теляча сироватка 8,5-9 пункційні точки на відстані не менше 5см одна від антибіотик (0,003-0,005 % розчин) 1,5-2 одної, тобто практично тканинна культура а також тим, що культивування підшлункової залози та гепатоцити мікрофрагментів печінки здійснюють у живильному трансплантуються не сумісно, а окремо, що середовищі при t 3-5°С протягом 4,5-5,5 діб при виключає можливість безпосереднього впливу періодичній зміні живильного середовища через останніх на функціональну активність 23,5-24,5 годин та також тим, що для трансплантованих b-клітин. Крім того, у винаході культивування тканини печінки використовують відсутні свідчення щодо розрахункової дози живильне середовище у складі: гідролізат трансплантаційних матеріалів. лактальбуміну, середовище Ігла MEM та В основу винаходу поставлена задача ембріональна теляча сироватка при отримання біотрансплатату із підвищеною співвідношенні компонентів, % об'єму (мл) функціональною активністю b-клітин та Гідролізат лактальбуміну 55-65 удосконалення способу його одержання і способу середовище Ігла MEM 30-35 лікування шляхом одержання біотрансплантата ембріональна теляча сироватка 5-10 органної культури, в якому за рахунок підбору Спосіб лікування цукрового діабету інгредієнтів та оптимальних умов культивування біотрансплататом за п.1 шляхом трансплантації останніх досягається підвищення функціональної останнього, за яким, відповідно до винаходу, активності b-інсулоцитів та подовження їх трансплантацію виконують у підшкірну жирову життєздатності in vitro та in vivo. клітковину передньої черевної стінки на 40-60мм Для рішення поставленої задачі вище пупка через спільний ін'єкційний канал запропонований біотрансплантат для лікування послідовно, культуру підшлункової залози, а цукрового діабету, спосіб його одержання та органної культури печінки на 9-15мм нижче, а спосіб лікування цукрового діабету. також тим, що ін'єкцію органної культури роблять у Біотрансплантат для лікування цукрового 4-5 напрямках від ін'єкційної точки. діабету, що включає органну культуру Запропонована група винаходів пов’язана підшлункової залози, у якому, відповідно до єдиним винахідницьким задумом отримання винаходу, додатково введено органну культуру життєздатної in vitro та in vivo органної культури, печінки і компоненти взяти при співвідношенні, % що приведе до уникнення гострого відторгнення ваг. біотрансплатата та значно підвищить рівень органну культуру підшлункової залози 25-30% інсуліну. Задум втілюється новим вперше органну культуру печінки 8-10% запропонованим біотрансплантатом (органною фізіологічний розчин Решта культурою) для лікування цукрового діабету, 7 81884 8 способом його отримання та способом лікування використовується тканина із зони розташованої цукрового діабету цим біотрансплататом. вище жовчного міхура, яку поділяють на 3-5 Запропонований відповідно до винаходу часток, вага кожної з яких дорівнює 200-205мг. Біотрансплантат вперше складається із двох Кожну частку вміщують в окремий флакон із компонентів (органної культури підшлункової охолодженим до 4°С гідролізатом лактальбуміну. залози і органної культури печінки), причому Після 5-7 разового відмивання тканину органну культуру підшлункової залози отримують подрібнюють до фрагментів діаметром 0,6-0,8мм. із мікрофрагментів хвостової частини останньої, а Отриману суспензію переносять в інший органну культуру печінки отримують із стерильний флакон та відмивають охолодженим мікрофрагментів тканини із зони, розташованої до 4°С розчином Хенкса (6-8) разів до отримання вище жовчного міхура, а використання нової прозорої надосадної рідини. Відмитий тканинний послідовності операцій отримання матеріал заливають живильним середовищем біотрансплатату у заявлених параметрах (склад: гідролізат лактоальбуміну 55-65%, приводить до отримання біотрансплатату без середовище Ігла MEM 30- 35% та ембріональна зруйнування структури паренхіми печінки і, теляча сироватка 5-10мл) і культивують при особливо, з великим відсотком життєздатних температурі 3-5° С протягом 4-6 діб. Заміну живильного середовища здійснюють кожні 23,5клітин, та в якому b-клітини вирізняються високою 24,5 години. Органну культуру відмивають 5-8 функціональною активністю - рівень інсуліну у разів нагрітим до 27-29° С фізіологічним розчином культуральному середовищі коливається від і використовують як складовий елемент 28,2±3,68мк од./мл до 36,7±0,5мк од./мл (у людини комбінованого ксенотрансплантату хворим на за стандартним методом аналізу рівень інсуліну у цукровий діабет у кількості 1-1,5г. Життєздатність крові 29мк од./мл), що в свою чергу при культури контролюють за допомогою трансплантації відповідно до способу, який гістологічного дослідження. заявляється, дозволяє уникнути гострого Біотрансплантат для лікування цукрового відторгнення біотрансплатату, а наявність складається з органної культури підшлункової гепатоцитів приводить до активування залози та органої культури печінки, отриманних за проліферації острівцевих клітин та збільшення вище зазначеними технологіями при секреції інсуліну, а також гепатоцити виконують співвідношенні, % ваг., органна культура імуноізоляційну та антитоксичну функції. підшлункової залози 25-30%, органна культура Технологія отримання біотрансплатату . печінки 8-10%, решта - фізіологічний розчин. Виділену у стерильних умовах у Біотрансплантат вводять хворому на цукровий новонароджених поросят хвостову частину діабет у підшкірну жирову клітковину передньої підшлункової залози (період ішемії 3-5хв.) черевної стінки на 4-6см вище пупка через вміщують у флакони із охолодженим (4°С) спільний (один) ін'єкційний канал: спочатку розчином Хенкса і промивають останнім 2-3 рази. вводиться органна культура підшлункової залози у Потім тканинний матеріал подрібнюють до 4-5 напрямках від ін'єкційної точки, а потім на 1мікрофрагментів діаметром 0,5-0,6мм і відмивають 1,5см нижче останньої так само вводиться органна (до 5 разів) охолодженим розчином Хенкса із культура печінки. Культури вводяться у ваговому антибіотиком (цефазолін або триаксон) 1мг/100мл співвідношенні 3:1.Загалом діаметр сумісного і витримують у холодильнику протягом 1-1,5год. трансплаційного поля складає 2-2,5см, що при температурі 4°С. Після чого розчин Хенкса забезпечує реалізацію безпосередньої взаємодії зливають і у кожний флакон наливають живильне b-клітин та гепатоцитів in situ. При сумісній середовище складу: середовище 199 (55-65%), середовище RPMI-1640 (25-34%), ембріональна трансплантації запропонованим способом теляча сироватка (8,5-9%) та антибіотик приживлення трансплантату відбувається на 2-3 цефазолін,0,003-0,005% розчин (1,5-2%). Вагове дні раніше, а ефект трансплантації за клінічними співвідношення тканина:живильне середовище та гормональними показниками (інсулін, С-пептид) (0,8-1,2):(5-7). Матеріал культивують у подовжується на 7-8 місяців (спостерігається ротаційному апараті (швидкість обертання ролера протягом 15-16 місяців), порівняно із таким при 1,5-2 оберти/хвилину) при температурі 25-26° С трансплантації лише органної культури протягом 5 діб, заміну живильного середовища підшлункової залози. проводять кожні 11,5-12,5год. Після закінчення Таким чином, запропоновані умови одержання строку культивування органну культуру 4-7 разів органної культури підшлункової залози та органної відмивають фізіологічним розчином кімнатної культури печінки та подальшій їх сумісній температури (20-22°С) і вживають для трансплантації придатні для лікування хворих на трансплантації. Життєздатність культури цукровий діабет. визначають за допомогою морфологічних та Приклад виконання за винаходом гормональних досліджень. Отримана органна Приклад 1. Культивування тканини підшлункової залози. культура підшлункової залози, в якій b-клітини Спосіб здійснюється наступним чином. вирізняються високою функціональною активністю Виділену у стерильних умовах у новонароджених - рівень інсуліну у культуральному середовищі поросят хвостову частину підшлункової залози коливається від 28,2±3,68мк од./мл до 36,7±0,5мк (період ішемії 2-5хв.) вміщують у флакон із од./мл (у людини за стандартним методом аналізу охолодженим (4°С) розчином Хенкса і промивають рівень інсуліну у крові 29мк од./мл). останнім 2-3 рази. Потім тканинний матеріал В стерильних умовах у новонароджених подрібнюють до фрагментів діаметром 0,4-0,7мм і поросят видаляють печінку. Для культивування 9 81884 10 відмивають (до 5 разів) охолодженим розчином Порівняльна оцінка ефективності різних Хенкса із антибіотиком (цефазолін «Дарниця» або способів та комбінацій трансплантації органних CF-тріаксон, 1мг/100мл) і вмішують на 1год в культур хворим холодильник при температурі 4°С. Після чого у Органні культури підшлункової залози та кожний флакон наливають живильне середовище печінки новонароджених поросят вводять складу: середовище 199 (60%), середовище RPMI(трансплантують) хворим на цукровий діабет за 1640 (30%), ембріональна теляча сироватка (10%) допомогою одноразового шприца об'ємом 20 мл із та антибіотик цефазолін 0,5мг/100мл середовища. товстою голкою (типу голки Дюфо) у підшкірну Вагове співвідношення тканина:живильне жирову клітковину передньої черевної стінки на 4середовище дорівнює 1:6. Матеріал культивують у 6 см вище пупка рівними порціями кожну окремо ротаційному апараті при температурі 26°С або в певних комбінаціях (сумісно): протягом 5 діб. Заміну культурального а) Органні культури підшлункової залози та середовища проводять кожні 12 годин. Після печінки після роздільного культивування вводили закінчення строку культивування тканину кожну окремо по різні сторони від пупка. У таких підшлункової залози 5-8 разів відмивають хворих спостерігався легкий больовий синдром та фізіологічним розчином кімнатної температури виразна гіперемія шкіри у місті введення культури (20-22°С) 1 передають для трансплантації. печінки. Тривалість клінічного ефекту Приклад 2. Культивування тканини печінки. спостерігалась протягом 5-6,5міс. Спосіб здійснюється наступним чином. В б) Тканину підшлункової залози та тканину стерильних умовах у новонароджених поросят печінки культивували протягом 4,5 діб окремо, видаляють печінку. Для культивування потім об'єднували в один флакон і культивували використовується тканина із розташованої вище сумісно протягом 12 годин. Після трансплантації жовчного міхура зони печінки, яку попередньо сумісної органної культури у хворих виявляються поділено на 3-5 часток, вага кожної з яких ознаки гіперемії та набряк у місці введення, але дорівнює 200-205мг. Кожну частку вміщують в больовий синдром відсутній. Тривалість клінічного окремий флакон із охолодженим до 4°С ефекту складає 6-7міс. гідролізатом лактальбуміну. Після 5 разового в) Органні культури підшлункової залози і відмивання тканину подрібнюють до фрагментів печінки вводяться через спільний (один ін'єкційний діаметром 0,6-0,8мм. Отриману суспензію канал. Спочатку вводиться органна культура переносять у інший стерильний флакон та підшлункової залози у 4-5 напрямках від ін'єкційної відмивають охолодженим до 4°С розчином Хенкса точки, а потім (голка залишається на місці) тим же (7-8 разів) до отримання прозорої надосадної шприцом на 1-1,5см нижче ін'єкційної точки також рідини, яку потім зливають. Відмитий тканинний у 4-5 напрямках вводиться органна культура матеріал заливають живильним середовищем печінки. У всіх хворих відсутні больовий синдром складу: гідролізат лактальбуміну 60%, та місцева реакція, а клінічний ефект середовище Ігла MEM - 35% та ембріональна спостерігається протягом 1-12 місяців. Таким теляча сироватка - 5%. Флакони вміщують у чином, в організмі хворого створюється холодильник при температурі 4°С матеріал (формується) локальний біотрансплантат, в якому культивують за таким температурним режимом завдяки циркуляції тканинної рідини протягом 4-6 діб. Заміну живильного середовища забезпечується можливість взаємовпливу та здійснюють кожні 24 години в один і той же час. взаємодії між пулами різних типів клітин. Після закінчення культивування отриману органну Вплив сумісної трансплантації органної культуру 6-8 разів відмивають нагрітим до 28-29°С культури підшлункової залози та органної культури 0,9% фізіологічним розчином і використовують для печінки на перебіг цукрового діабету у хворих. трансплантації хворим на цукровий діабет у Дослідження проведені на 8 хворих на кількості 1,0-1,5г. інсулінзалежний цукровий діабет 1 типу віком від Приклад 3. Культивування тканини 21 до 57 років (середня тривалість захворювання підшлункової залози із тканиною печінки 18,98±0,86 року). У всіх хворих відмічався новонароджених поросят. лабільний перебіг захворювання у стадії Для визначення впливу гепатоцитів на медикаментозної субкомпенсації. Доза екзогенного інсуліну, який отримували хворі, функціональну активність b-клітин через 36год складала від 41од./добу до 80од./добу, Середня культивування до органної культури підшлункової добова доза дорівнювала 51,3од./добу. Всім залози додавали культивовану того ж строку хворим було проведено сумісну трансплантацію 5тканину печінки у ваговому співвідношенні 1:0,5 та добової органної культури підшлункової залози і 1:1. Сумісне культивування проводили до 5 діб. органної культури печінки новонароджених При сумісному культивуванні рівень інсуліну у поросят у підшкірну жирову клітковину передньої культуральному середовищі значно підвищується черевної стінки живота через спільний ін'єкційний 74,98±1,90од./мл та 78,9-5,9од./мл, відповідно, канал. Спочатку вводиться органна культура контроль - 21,4±2,4мк од./мл. Спостерігається підшлункової залози у 5 напрямках від ін'єкційної підвищення функціональної активності b-клітин, за точки, а потім на 1см нижче також у 5 напрямках даними морфометричного аналізу виявляються вводиться органна культура печінки. Кількість ознаки гіпертрофії b-клітин та їх ядер об'єм їх трансплантаційного матеріалу, відповідно, збільшується на 15-20% порівняно із контролем, дорівнювала 3-5г та 0,5-1,5г в залежності від маси ступінь деструктивних змін менш виразна. тіла хворого. Після ксенотрансплантації хворі перебували в умовах стаціонару протягом 2 11 81884 12 тижнів, отримуючи антигістамінну терапію та в порівнянні з таким при трансплантації інсулін, доза якого була зменшена на 10-60%. монокультури. Хворі були обстежені через 14 діб, 3міс., 6міс., Перелік використаних аналогів 9міс., 12міс. та 14-15міс. після трансплантації. 1. Пат. РФ №2008953, МПК 5 A61N5/02, А61К3100. Слід зазначити, що больовий синдром був Способ лечения сахарного диабета // Горбунов відсутній безпосередньо після операції у 7 хворих, О.М., Белокопытов Ю.Ю., Рововая Л.М. Заявл. лише у одного зник через 3 доби. 1990. Опубл. 1994. Компенсація цукрового діабету спостерігалася 2. Пат. РФ №2095410, МПК 6 C12N35/00. Способ у 7 хворих через 10 днів, а у одного хворого через получения культуры эндокринной ткани // місяць після трансплантації. Через 7-14 діб після Кирпатовский И.Д., Каитова З.С., Лысенко А.И. трансплантації рівень глікозованого гемоглобіну Заявл. 1995. Опубл.1997. дорівнював 8,45±0,69% (що не відрізняється від 3. Пат. РФ №2135193, МПК 6 А61К35/39. Способ такого перед трансплантацією). Через 3 та 6 получения материала, содержащего бета- клетки місяців після трансплантації рівень глікозованого поджелудочной железы для трансплантации гемоглобіну складав 8,62±0,27% та 6,77±0,43% больным сахарным диабетом с использованием (р