Система обробки сільськогосподарських культур для боротьби з бур’янами

Реферат: Винахід належить до систем обробки сільськогосподарських культур для контролювання бур'янів в середовищі вирощування культури. Система обробки сільськогосподарських культур для контролювання росту бур'янів в середовищі вирощування культури, що включає висівання в середовищі вирощування культури насіння сільськогосподарської культури, яке проростає і розвивається в культурну рослину, що має стійкість до дикамба та гліфосинату, і здійснення щонайменше першої гербіцидної обробки середовища вирощування культури для контролювання росту бур'янів, де гербіцидна обробка вибрана з групи, що складається з першої, другої, третьої, четвертої і п'ятої обробок, і де для обробки використовують кількість гербіциду, ефективну для контролювання росту бур'янів, яка суттєво не пошкоджує насіння культурної рослини або культурну рослину. UA 101470 C2 (12) UA 101470 C2 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 За даною заявкою запитується пріоритет згідно з попередньою заявкою на патент США з порядковим номером 60/862907, поданою 25 жовтня 2006, і заявкою на патент США з порядковим номером 11/758660, поданою 5 червня 2007, описи яких включені в даний опис за допомогою посилання у всій їх повноті. Даний винахід, загалом, належить до галузі контролювання росту бур'янів. Більш конкретно, винахід стосується способів досходового і післясходового застосування гербіцидів для боротьби з бур'янами в комбінації з використанням трансгенних сільськогосподарських культур, стійких до одного або декількох гербіцидів. Бур'яни коштують фермерам мільярди доларів щорічно через втрати врожаю і витрат на спроби втримувати бур'яни під контролем. Бур'яни також є хазяїнами носіями хвороб сільськогосподарських культур і комах-шкідників. Втрати у виробництві сільськогосподарської продукції, викликані бур'янами, включають зниження врожайності, погіршення якості врожаю, підвищення витрат на іригацію, збільшення витрат на збір врожаю, підвищення вартості землі, шкоду для худоби і пошкодження урожаю комахами і хворобами, які несуть бур'яни. Викликане пошкодження може бути значним. Наприклад, за оцінками врожайність з 1972 по 1976 рік була знижена приблизно на 10 % через бур'яни (Chandler, 1981). Хімічні гербіциди забезпечують ефективний спосіб боротьби з бур'янами протягом багатьох років. Гербіциди, як правило, можуть бути застосовані до появи сходів і/або після появи сходів. Досходові гербіциди застосовують на полях до появи сходів культури з грунту. При такому застосуванні їх зазвичай вносять в грунт до або незабаром після висіву культури. Таке застосування може викликати загибель бур'янів, які ростуть на полі до появи сходів культури, а також може запобігати або знижувати проростання насіння бур'янів, яке присутнє в грунті. Післясходові гербіциди зазвичай використовують для того, щоб викликати загибель бур'янів після появи сходів культури на полі. Таке застосування може викликати загибель бур'янів на полі і запобігати або знижувати утворення і проростання насіння бур'янів в майбутньому. Одна з методик боротьби з бур'янами полягає у внесенні гербіциду, такого як дикамба, на полі перед висівом насіння. Однак після внесення гербіциду на полі фермер повинен вичікувати щонайменше декілька тижнів перед засіванням поля насінням сільськогосподарської культури, для того щоб гербіцид викликав загибель більшої частини бур'янів і відбувся його розпад, щоб він не пошкодив висіяну культуру. Наприклад, рослини особливо чутливі до дикамба, і TM TM TM рекомендується вносити препарати дикамба, такі як Banvel , Clarity або Sterling , для боротьби з бур'янами, наприклад, за 30 днів до висіву. Інший спосіб, який можна успішно використовувати для боротьби з бур'янами, поєднує в собі обробку гербіцидом з використанням культур, які є стійкими до гербіциду. У такому випадку гербіцид, який зазвичай може пошкоджувати культуру, можна вносити перед і під час росту культури, не викликаючи пошкодження. Таким чином, може бути здійснений ефективний контроль бур'янів, і для виробника сільськогосподарської продукції стають доступними нові варіанти боротьби з бур'янами. В останні роки доступність трансгенних культур, що мають ознаки, які забезпечують стійкість до гербіциду або гербіцидів з одним способом дії, спростила для виробників боротьби з бур'янами. Наприклад, створені культури, стійкі до 2,4-дихлорфеноксіоцтової кислоти (Streber and Willmitzer, 1989), бромоксинілу (Stalker et al, 1988), гліфосату (Comai et al, 1985) і фосфінотрицину (De Block et al, 1987). Однак така методика збільшувала імовірність відбору і поширення біотипів бур'янів, резистентних до конкретного гербіциду в конкретній системі землеробства. Отже, в даній галузі існує необхідність в створенні систем вирощування сільськогосподарських культур, в яких використовують трансгенні культури, що забезпечують стійкість до одного або декількох гербіцидів, для боротьби з бур'янами, тобто для боротьби з резистентними до сучасних гербіцидів бур'янами, для боротьби з потужними бур'янами, для контролювання самосівних рослин і для мінімізації розвитку резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому. У даній галузі також відомо, що ризик розвитку резистентних бур'янів більш високий у випадку деяких типів гербіцидів і нижче у випадку інших типів. Для подальшого обговорення гербіциди класифіковані згідно зі способом їх дії на основі схем HRAC або WSSA (таблиця 2). Наприклад, вважається, що ризик розвитку резистентних бур'янів вище при використанні гербіцидів, що належать до таких груп, як інгібітори ацетолактатсинтази (ALS) (група 2 або В) і інгібітори ацетил-СоА-карбоксилази (ACCase) (група 1 або А). Вважається, що ризик розвитку резистентних бур'янів нижче при використанні гербіцидів, що належать до таких груп, як інгібітори PS II (група 5 або C1), інгібітори збирання мікротрубочок (група 3 або K1) і інгібітори синтезу ліпідів (група або N). Вважається, що ризик розвитку резистентних бур'янів ще більш низький при використанні гербіцидів, що належать до таких груп, як синтетичні ауксини (група 4 1 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 або О), гліцини (група 9 або G) і інгібітори глутамінсинтетази (група 10 або Н) (Legere et al, 2006.). Отже потрібна розробка систем вирощування сільськогосподарських культур, в яких використовують культури, стійкі до гербіцидів з групи низького ризику, і такі, що супроводжують обробки гербіцидами таких культур для того, щоб мінімізувати популяції резистентних до гербіцидів бур'янів. Дикамба є одним представником класу гербіцидів, які зазвичай називаються "ауксинподібними" гербіцидами або "синтетичними ауксинами". Дикамба використовували як досходовий гербіцид (наприклад, за 14-30 днів до посадки) для дводольних рослин і як досходовий і/або післясходовий гербіцид для кукурудзи, сорго, хлібних злаків, пасовищних, сінокісних, лугових культур, цукрової тростини, спаржі, дернових і трав'яних культур, щоб ефективно контролювати однолітні і багаторічні широколисті бур'яни і деякі злакоподібні бур'яни (Crop Protection Chemicals Reference, 1995). На жаль дикамба може пошкоджувати багато комерційних культур, включаючи боби, сою, бавовну, горох, картоплю, соняшник, томати, тютюн і плодові дерева, декоративні рослини і дерева, і інші широколисті рослини, при контакті з таким гербіцидом. Особливо чутливі до дикамба соя і бавовна. Таким чином, застосовувати дикамба, як правило, необхідно за декілька тижнів до висіву чутливих культур, щоб гарантувати, що середовище для вирощування культур в достатній мірі очищене від залишкового дикамба до появи сходів культур. Нещодавно були виділені послідовності Pseudomonas maltophilia, що кодують мультикомпонентну деметилазу дикамба, що включає монооксигеназу (DMO), (заявки на патент США No: 20030115626, 20030135879, патент США 7022896), яка залучена до перетворення гербіцидної форми гербіциду дикамба (3,6-дихлор-o-анісова кислота; препарат, який TM продається, наприклад, під торговою маркою Banvel ) в немаєоксичну 3,6-дихлорсаліцилову кислоту (Wang et al., 1997). Автори повідомляли про трансформацію послідовностей в рослини тютюну і Arabidopsis. Трансформовану рослинну тканину піддавали селекції на канаміцині і регенерували в рослину. Однак стійкість до гербіциду в незрілих тканинах або паростках, або в інших рослинах не була показана і не передбачалася. Застосування досходового гербіциду також не описані. У патенті США 6376754 описані рослини, такі як рослини сої, що мають стійкість щонайменше до двох гербіцидів. До таких гербіцидів належать гліфосат, глюфосинат і сульфонілсечовина (тобто інгібітор ацетолактатсинтази (ALS)). У патенті США 6586367 описані способи боротьби з бур'янами і рослини, стійкі до гліфосату або глюфосинату, які можна обробляти гліфосатом або глюфосинатом і додатково певною кількістю гербіциду або гербіцидів, вибраних з групи, що складається з атразину, дикамба і інших вибраних гербіцидів. Однак рослини і системи вирощування сільськогосподарських культур, що мають генетичну ознаку, яка надає толерантність до дикамба, не були описані. У WO2005/107437 описане об'єднання гена толерантності до першого гербіциду, тобто гена толерантності до 2,4-D, з геном толерантності до другого гербіциду, тобто геном толерантності до гліфосату або геном толерантності до другого гербіциду. Не описане об'єднання гена толерантності до гліфосату з геном толерантності до 2,4-D. Крім того, не розкриті системи вирощування сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом для боротьби з бур'янами, резистентними до гербіцидів бур'янами, злісними бур'янами, резистентними до гербіцидів самосівними рослинами і для мінімізації можливої появи резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому. Також не розкриті способи мінімізації розвитку резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому внаслідок сівозміни стійких до гербіцидів культур і застосування відповідного їм гербіциду(ів). В одному аспекті винахід стосується системи обробки сільськогосподарських культур для контролювання росту бур'янів в середовищі вирощування культури, що включає: a) висів в середовищі вирощування культури насіння сільськогосподарської культури, яке проростає і розвивається в культурну рослину, що має стійкість до ауксин-подібного гербіциду; і b) здійснення щонайменше першої гербіцидної обробки середовища вирощування культури для контролювання росту бур'янів, де гербіцидна обробка вибрана з групи, що складається з першої, другої, третьої, четвертої і п'ятої обробок, вказаних в таблиці 3, і де для обробки використовують кількість гербіциду, ефективну для контролювання росту бур'янів, яка суттєво не пошкоджує насіння культурної рослини або культурну рослину. У конкретних варіантах здійснення спосіб може включати проведення щонайменше двох, щонайменше трьох, щонайменше чотирьох і/або кожну з вказаних гербіцидних обробок. В одному варіанті здійснення рослина, що використовується в системі згідно з винаходом містить трансген, що надає стійкість до гербіциду гліфосату або 2,4-D. Прикладом трансгену, що надає стійкість до гербіциду гліфосату є трансген, що кодує білок, вибраний з групи, що 2 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 складається з резистентного до гліфосату 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (EPSPS), гліфосатоксидоредуктази (GOX), гліфосат-N-ацетилтрансферази (GAT) і гліфосатдекарбоксилази. У системі культурна рослина може мати стійкість до ауксин-подібного гербіциду і містити трансген, що кодує DMO і/або AAD-1. У деяких варіантах здійснення білок GAT являє собою GAT4601 (SEQ ID NO: 2) і може кодуватися трансгеном, що містить послідовність нуклеїнової кислоти SEQ ID NO: 1. У конкретному варіанті здійснення експресію білка GAT здійснюють завдяки використанню промотору SCP1. У конкретних варіантах здійснення систему згідно з винаходом визначають як систему, що включає стадію проведення третьої гербіцидної обробки на пізній післясходовій стадії з використанням гербіцидно-ефективної кількості гербіциду, вибраного з групи, що складається з ауксин-подібного гербіциду, грамініциду, вибіркового післясходового гербіциду і їх комбінації. У наступному варіанті здійснення система згідно з винаходом включає стадію проведення четвертої гербіцидної обробки на передзбиральній стадії з використанням гербіцидноефективної кількості гербіциду, вибраного з групи, що складається з гліфосату, ауксинподібного гербіциду, вибіркового післясходового гербіциду, параквату і їх комбінації. У ще одному варіанті здійснення система включає стадію збору насіння від культурної рослини після четвертої обробки. Система також може включати стадію проведення п'ятої гербіцидної обробки на післязбиральній стадії з використанням гербіцидно-ефективної кількості гербіциду, вибраного з групи, що складається з гліфосату, ауксин-подібного гербіциду, параквату, вибіркового досходового післядіючого гербіциду і їх комбінації. Ауксин-подібний гербіцид може бути вибраний з групи, що складається з дикамба, 2,4-D і їх комбінації. В одному варіанті здійснення культурна рослина є дводольною рослиною, приклади якої включають бавовну і сою. Система, зокрема, може включати внесення кількості гербіциду, вказаної в таблиці 4 і/або 5 для відповідного гербіциду(ів). Система також додатково може включати стадію проведення третьої гербіцидної обробки на пізній післясходовій стадії з використанням гербіцидно-ефективної кількості гербіциду, вибраного з групи, що складається з гліфосату, ауксин-подібного гербіциду, грамініциду, вибіркового післясходового гербіциду і їх комбінації. Система додатково може включати стадію проведення четвертої гербіцидної обробки на післязбиральній стадії з використанням гербіцидно-ефективної кількості гербіциду, вибраного з групи, що складається з гліфосату, ауксин-подібного гербіциду, вибіркового післясходового гербіциду, параквату і їх комбінації. Система згідно з винаходом також може містити стадію збору насіння від культурної рослини після четвертої обробки. В одному варіанті здійснення згідно з винаходом гербіцид вибраний з групи, що складається з дикамба, 2,4-D і їх комбінації. У системі обробки сільськогосподарських культур згідно з винаходом обробка гербіцидом може контролювати ріст резистентного до гербіциду бур'яну, вибраного з групи, що складається з: Alopecurus myosuroides, Avena fatua, Avena sterilis, Avena sterilis ludoviciana, Brachiaria plantaginea, Bromus diandrus, Bromus rigidus, Cynosurus echinatus, Digitaria dliaris, Digitaria ischaemum, Digitaria sanguinalis, Echinochloa colona, Echinochloa crusgalli, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Eleusine indica, Eriochloa punctata, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Leptochloa chinensis, Lolium multiflorum, Lolium perenne, Lolium persicum, Lolium rigidum, Phalaris minor, Phalaris paradoxa, Rottboellia exalta, Setaria faberi, Setaria viridis, Setaria viridis var. robusta-alba schreiber, Setaria viridis var. robustapurpurea, Snowdenia polystachea, Sorghum halepense, Sorghum Sudanese, Alisma plantagoaquatica, Amaranthus blitoides, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amaranthus palmeri, Amaranthus powellii, Amaranthus quitensis, Amaranthus retroflexus, Amaranthus rudis, Amaranthus tuberculatus, Ambrosia artemisiifolia, Ambrosia trifida, Ammania auriculata, Ammania coccinea, Anthemis cotula, Apera spica-venti, Bacopa rotundifolia, Bidens pilosa, Bidens subalternans, Brassica tournefortii, Bromus tectorum, Camelina microcarpa, Chenopodium album, Chrysanthemum coronarium, Conyza bonariensis, Conyza canadensis, Cuscuta campestris, Cyperus difformis, Damasonium minus, Descurainia sophia, Diplotaxis tenuifolia, Echium plantagineum, Elatine triandra var. pedicellata, Euphorbia heterophylla, Fallopia convolvulus, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Helianthus annuus, Iva xanthifolia, Ixophorus unisetus, Kochia scoparia, Lactuca serriola, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Limnophila sessiliflora, Lindernia dubia, Lindernia dubia var. major, Lindernia micrantha, Lindernia procumbens, Mesembryanthemum crystallinum, Monochoria korsakowii, Monochoria vaginalis, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Parthenium hysterophorus, Pentzia suffruticosa, Phalaris minor, Raphanus raphanistrum, Raphanus sativus, Rapistrum rugosum, Rotala indica var. uliginosa, Sagittaria guyanensis, Sagittaria montevidensis, Sagittaria pygmaea, Salsola iberica, Scirpus juncoides var. ohwianus, Scirpus mucronatus, Setaria lutescens, Sida spinosa, Sinapis arvensis, Sisymbrium orientale, Sisymbrium thellungii, Solanum ptycanthum, Sonchus asper, Sonchus oleraceus, Sorghum bicolor, Stellaria 3 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 media, Thlaspi arvense, Xanthium strumarium, Arctotheca calendula, Conyza sumatrensis, Crassocephalum crepidiodes, Cuphea carthagenenis, Epilobium adenocaulon, Erigeron philadelphicus, Landoltia punctata, Lepidium virginicum, Monochoria korsakowii, Poa annua, Solanum americanum, Solanum nigrum, Vulpia bromoides, Youngia japonica, Hydrilla verticillata, Plantago lanceolata, Carduus nutans, Carduus pycnocephalus, Centaurea solstitialis, Cirsium arvense, Commelina diffusa, Convolvulus arvensis, Daucus carota, Digitaria ischaemum, Echinochloa cruspavonis, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Limnophila erecta, Matricaria perforate, Papaver rhoeas, Ranunculus acris, Solivasessilis, Sphenoclea zeylanica, Stellaria media, Nassella trichotoma, Stipa neesiana, Agrostis stolonifera, Polygonum aviculare, Alopecurus japonicus, Beckmannia syzigachne, Bromus tectorum, Chloris inflate, Echinochloa erecta, Portulaca oleracea і Senecio vulgaris. Система обробки сільськогосподарських культур додатково може включати стадію ідентифікації злісного бур'яну в області вирощування культури і проведення гербіцидної обробки, ефективній для боротьби зі злісним бур'яном, де злісний бур'ян вибраний з групи, що складається з Abutilon theophrasti, Amaranthus sp., Amaranthus palmeri, Ambrosia artimisiifolia, Ambrosia trifida, Chenopodium album, Convolvulus arvensis, Conyza canadensis, Commelina sp., Commelina benghalensis, Ipomoea sp., Kochia sp., Polygonum convolvulus, Lolium rigidum, Sida spinosa і Solanum ptycanthum. В одному варіанті здійснення насіння культурної рослини являє собою насіння сої або бавовнику. В іншому аспекті винахід стосується системи обробки сільськогосподарських культур, як описано в даному описі, яка додатково включає: a) ідентифікацію в області вирощування культури резистентного до гербіциду бур'яну, стійкого щонайменше до першої гербіцидної обробки; і b) внесення кількості ауксин-подібного гербіциду і/або гліфосату, ефективної для боротьби з резистентним до гербіциду бур'яном. У наступному аспекті винахід стосується системи обробки сільськогосподарських культур для мінімізації розвитку резистентного до гербіциду бур'яну в середовищі вирощування культури, що включає: a) висів на полі культурної рослини, що має стійкість до гліфосату і ауксин-подібних гербіцидів; b) проведення щонайменше першої гербіцидної обробки з використанням гліфосату і/або ауксин-подібного гербіциду в середовищі вирощування культури для боротьби з бур'янами; d) ідентифікацію місцеположення на полі, що заросло бур'янами, резистентними до гліфосату або ауксин-подібного гербіциду; і е) внесення кількості гліфосату і/або ауксин-подібного гербіциду, ефективної для боротьби з бур'янами, резистентними до гліфосату або ауксин-подібного гербіциду. Рослина може містити трансген, що надає стійкість до гербіциду гліфосату. Трансген, що надає стійкість до гербіциду гліфосату, може кодувати білок, вибраний з групи, що складається з стійкої до гліфосату 5-енолпірувілшикімат-3фосфатсинтази (EPSPS), гліфосатоксидоредуктази (GOX), гліфосат-N-ацетилтрансферази (GAT) і гліфосатдекарбоксилази. Культурна рослина може містити трансген, що кодує DMO. У конкретному варіанті здійснення білок GAT являє собою GAT4601 (SEQ ID NO: 2) або кодується трансгеном, що містить послідовність SEQ ID NO: 1. У наступному аспекті винахід стосується способу мінімізації розвитку резистентного до гербіциду бур'яну, що включає: чергування першої системи обробки сільськогосподарських культур в перший вегетаційний період з другою системою обробки сільськогосподарських культур в подальший період вегетації, де перша і друга системи обробки сільськогосподарських культур включають систему обробки сільськогосподарських культур за пунктом формули винаходу 1. В даному способі культурна рослина в першій системі обробки сільськогосподарських культур може мати стійкість щонайменше до одного іншого гербіциду в порівнянні з культурною рослиною у другій системі обробки сільськогосподарських культур. В одному варіанті здійснення культурна рослина в першій системі обробки сільськогосподарських культур і культурна рослина у другій системі обробки сільськогосподарських культур мають стійкість до гербіцидів, які вказані в таблиці 7. В іншому варіанті здійснення культурні рослини в першій і у другій системах обробки сільськогосподарських культур стійкі щонайменше до одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з гліфосату, глюфосинату, дикамба, 2,4-D і їх комбінації. У конкретних варіантах здійснення культурна рослина вибрана з групи, що складається з кукурудзи, бавовни і сої. Культурна рослина в першій системі обробки сільськогосподарських культур і культурна рослина у другій системі обробки сільськогосподарських культур можуть належати до одного і того ж виду або до різних видів. Далі наведений докладний опис винаходу, наведений для того, щоб допомогти фахівцям в даній галузі при практичному здійсненні даного винаходу. Фахівці в даній галузі можуть здійснити модифікації і зміну описаних варіантів здійснення, не відходячи від суті і не виходячи за обсяг даного винаходу. 4 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В одному аспекті винахід стосується способу вирощування культурних рослин, який включає застосування одного або декількох гербіцидів для контролювання росту одного або декількох видів бур'янів. Винахід стосується більш довершених варіантів боротьби з бур'янами, що включають зменшення і/або запобігання стійкості бур'янів до гербіцидів (таблиця 1). В одному варіанті здійснення ефективну кількість у випадку першої гербіцидної обробки (наприклад для боротьби з бур'янами) вносять в середовище вирощування культури перед висівом або при висіві або перед проростанням культури, або комбінуючи внесення на вказаних стадіях. Приклади гербіцидів, класифікованих за способами дії, наведені в таблиці 2. Один або декілька гербіцидів для першої обробки другої культури можуть бути вибрані залежно від стійкості, яку має культура, і залежно від присутності конкретного виду бур'яну на полі, з гербіцидів, що належать до груп, затверджених Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA). У деяких варіантах здійснення один або декілька гербіцидів для першої обробки культури вибрані з наступних гербіцидів: a) інгібіторів синтезу EPSP (група 9), включаючи гліфосат. Приклади норм внесення гліфосатних гербіцидів, їх торгові найменування і постачальники вказані в таблиці 4 для сої і в таблиці 5 для бавовнику; b) інгібіторів глутамінсинтетази (GS) (група 10), включаючи глюфосинат. Для сої норма TM внесення глюфосинату (Liberty , Bayer CropScience) може становити 28-34 унції/акр (1,96-2,38 кг/га) або не більше 0,809 фунтів активного інгредієнта/акр (0,9 кг активного інгредієнта/га) за сезон. Для бавовни норма внесення глюфосинату (Liberty, Bayer CropScience) становить, наприклад, 28-34 унції/акр (1,96-2,38 кг/га); c) синтетичних ауксинів або ауксин-подібних гербіцидів (група 4), включаючи дикамба і 2,4D. Норми внесення таких гербіцидів, їх торгові найменування і постачальники вказані в таблиці 4 для сої і в таблиці 5 для бавовнику. Вибіркові досходові післядіючі гербіциди можуть бути вибрані з: d) ацетанілідів (AA; група 15), що представляють собою сімейство вибіркових гербіцидів, які, як передбачається в даний час, контролюють ріст бур'янів внаслідок інгібування синтезу жирних кислот з дуже довгими ланцюгами. Приклади вибіркових AA для сої і бавовнику, норми їх внесення, торгові найменування і постачальники вказані в таблицях 4 і 5, відповідно. Також можна використовувати препарати, що містять ацетохлор (наприклад, Harness®, Monsanto; Surpass®, Surpass® EC, Dow); e) інгібіторів ацетолактатсинтази (ALS; група 2), що представляють собою сімейство вибіркових гербіцидів, які контролюють ріст бур'янів внаслідок інгібування синтезу амінокислот з розгалуженими ланцюгами. Приклади ALS для сої і бавовнику, норми внесення, торгові найменування і постачальники вказані в таблицях 4 і 5, відповідно; f) динітроанілінів (DiNA; група 3), що представляють собою сімейство вибіркових гербіцидів, які контролюють ріст бур'янів за допомогою зв'язування з тубуліном, призводячи, тим самим, до втрати мікротрубочок в клітині. Приклади вибіркових гербіцидів DiNA для сої і бавовнику, норми внесення, торгові найменування і постачальники вказані в таблиці 4 і 5, відповідно; g) інгібіторів протопорфіриногеноксидази (PPG-оксидаза; група 14) (PPO), що представляють собою сімейство вибіркових гербіцидів, які контролюють ріст бур'янів за допомогою інгібування PPG-оксидази в хлоропластах і мітохондріях, блокуючи, тим самим, синтез хлорофілу і гема і призводячи до надмірного утворення протопорфірину IX, що генерує синглетний кисень, зрештою, призводячи до руйнування клітинних мембран. Приклади гербіцидів PPO для сої і бавовнику показані в таблиці 4 і 5, відповідно, включаючи норми внесення, торгові найменування і постачальників. Необмежувальні приклади гербіцидів, які можна застосовувати в комбінації з дикамба на бавовнику, включають: гліфосат, пендиметалін (наприклад PROWL, PENDIMAX), діурон, 2,4-D, карфентразонетил, флуометурон, MSMA (мононатрієва сіль метанарсонової кислоти і солі), прометрин, піритіобак-натрій, метолахлор, ацетохлор, трифлоксисульфурон, фомесафен, флуміоксазин і сетоксидим (наприклад POAST). Гербіциди можуть бути застосовані відносно культурних рослин до сходів або після сходів ("понад") залежно від ситуації. Відповідно, переважні досходові гербіциди, які можна застосовувати в комбінації з дикамба на DMOбавовнику (тобто бавовнику, що містить трансген монооксигенази дикамба, що визначає стійкість до дикамба) можуть включати гліфосат, пендиметалін, діурон, карфентразонетил, флуметурон, прометрин, флуміоксазин і фомесафен, нарівні з іншими гербіцидами. Переважні післясходові гербіциди для застосування в комбінації з дикамба на DMO-бавовнику можуть включати гліфосат, трифлоксисульфурон, метолахлор, ацетохлор, фомесафен, піритіобакнатрій і сетоксидим, нарівні з іншими гербіцидами. 5 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Необмежувальні приклади гербіцидів для застосування з дикамба на кукурудзі, показані в таблиці 6. Необмежувальні приклади гербіцидів, які можуть бути використані в комбінації з дикамба на сої, включають: гліфосат, 2,4-D, хлоримуронетил, клетодим, флуазифоп-П-бутил, флуміоксазин (наприклад VALOR), фомесафен (наприклад FLEXSTAR, REFLEX), імазетапір (наприклад LIGHTNING), метрибузин (наприклад SENCOR) і пендиметалін. Можуть бути використані заздалегідь приготовані суміші і суміші, приготовані безпосередньо перед застосуванням, з дикамба, а також можна вносити дикамба і інший активний інгредієнт по окремості. Необмежувальні приклади преміксних гербіцидів включають комбінації дикамба і атразину (наприклад, MARKSMAN), дикамба і дифлуфензопіру (наприклад, DISTINCT) і дикамба і примісульфурону (наприклад, NORTHSTAR). У деяких варіантах здійснення один або декілька гербіцидів для першої обробки культури можуть бути вибрані щонайменше з одного гербіциду з групи низького ризику, такого як інгібітори синтезу EPSP, інгібітори GS і ауксин-подібні гербіциди. У конкретних варіантах здійснення гербіцид може являти собою гліфосат, глюфосинат, дикамба або 2,4-D залежно від стійкості, яку має культурна рослина, і присутність видів бур'янів в культурі. Крім того, можна використовувати досходовий гербіцид і паракват. У випадку використання більше одного гербіциду гербіциди можна вносити послідовно або у вигляді суміші. Після того, як насіння культурної рослини проросло, може бути проведена друга обробка гербіцидно-ефективною кількістю, що вноситься в середовище вирощування культури на ранній післясходовій стадії. Один або декілька гербіцидів для другої гербіцидної обробки можуть бути вибрані з гербіцидів, що належать до груп, затверджених Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA) (наприклад, див. таблицю 2), залежно від типу стійкості, яку виявляє культура, і типу бур'яну, присутнього в культурі. Переважно один або декілька гербіцидів для другої обробки культури можуть бути вибрані щонайменше з одного гербіциду з групи низького ризику, такого як інгібітори синтезу EPSP, інгібітори GS і ауксинподібні гербіциди, і грамініциду або вибіркового для культури післясходового гербіциду. Приклади таких гербіцидів, норми внесення, торгові найменування і постачальники вказані в таблиці 4 для соїі в таблиці 5 для бавовнику. У деяких варіантах здійснення один або декілька гербіцидів для другої гербіцидної обробки можуть бути вибрані з гліфосату, глюфосинату, дикамба і 2,4-D, і грамініциду або вибіркових відносно культури післясходових гербіцидів. У конкретних варіантах здійснення один або декілька гербіцидів можуть бути вибрані з гліфосату, глюфосинату, дикамба або 2,4-D, залежно від стійкості, яку має культурна рослина, і присутність видів бур'янів в культурі. У випадку використання більше одного гербіциду гербіциди можна вносити послідовно або у вигляді суміші. Після другої гербіцидної обробки може іти третя гербіцидна обробка з використанням гербіцидно-ефективної кількості на пізній післясходовій стадії. Третя обробка схожа з другою обробкою. Після третьої обробки може бути проведена четверта обробка гербіцидно-ефективною кількістю на передзбиральній стадії. Один або декілька гербіцидів для четвертої гербіцидної обробки можуть бути вибрані з гербіцидів, що належать до груп, затверджених Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA), які перераховані вище, залежно від типу стійкості, яку має культурна рослина, і типу видів бур'янів, присутніх в культурі. У деяких варіантах здійснення один або декілька гербіцидів для четвертої обробки можуть бути вибрані щонайменше з одного гербіциду з групи низького ризику, такого як інгібітори синтезу EPSP, інгібітори GS, ауксин-подібні гербіциди і вибірковий відносно культури післясходовий гербіцид. Приклади таких гербіцидів, норми внесення, торгові найменування і постачальники вказані в таблиці 4 для сої і в таблиці 5 для бавовнику. У конкретних варіантах здійснення один або декілька гербіцидів вибрані з гліфосату, глюфосинату, дикамба або 2,4-D, залежно від стійкості, яку має культурна рослина, і видів бур'янів, присутніх в культурі. Після четвертої обробки може бути проведена п'ята обробка гербіцидно-ефективною кількістю на післязбиральній стадії. Вказану обробку можна провести осінню або весною, провести після періоду парування або провести між висівами культур у випадку вирощування двох культур. Один або декілька гербіцидів для п'ятої обробки можуть бути вибрані з гербіцидів, що належать до груп, затверджених Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA), які перераховані вище, залежно від стійкості, яку має культурна рослина, і видів бур'янів, присутніх в культурі. У деяких варіантах здійснення один або декілька гербіцидів для п'ятої обробки вибрані щонайменше з одного гербіциду з групи низького ризику, такого як інгібітори синтезу EPSP, інгібітори GS, ауксин-подібні гербіциди, або паракват або вибірковий відносно культури досходовий гербіцид. Приклади таких гербіцидів, норми внесення, торгові 6 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 найменування і постачальники вказані в таблиці 4 для сої і в таблиці 5 для бавовнику. У конкретних варіантах здійснення один або декілька гербіцидів вибрані з гліфосату, глюфосинату, дикамба або 2,4-D, залежно від стійкості, яку має культурна рослина, і присутність видів бур'янів в культурі. Грамініцид зазвичай не використовують для кукурудзи, якщо кукурудза не має стійкість до нього, наприклад гербіциди "fop", що використовуються для контролювання росту злакових трав. Така стійкість може бути забезпечена геном, що кодує AAD-1. Необмежувальні приклади гербіцидів fop включають флуазифоп-п-бутил, що продається під торговою назвою FUSILADE (Syngenta), наприклад, FUSILADE 2000, FUSILADE DX, FUSILADE FIVE, FUSILADE SUPER, FUSION, HORIZON, ORNAMEC, PP005, TORNADO і FUSIFLEX. У деяких варіантах здійснення даного винаходу з вказаних з першою по п'ятою обробок вибирають комбінацію двох обробок. Наприклад, застосовують тільки першу і другу обробки, або першу і третю обробки, або другу і третю обробки, або п'яту і другу або третю обробки для боротьби з бур'янами. В одному варіанті здійснення даного винаходу одну або декілька обробок гербіцидами одного або декількох різних способів дії застосовують для культури, стійкої до одного або декількох гербіцидів, для боротьби з бур'янами. В іншому варіанті здійснення системи обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом не проводять ні першу, ні п'яту обробку. Замість цього їх замінюють механічними способами, такими як орання. Орання здійснюють способами, добре відомими в даній галузі. Переважно орання проводять осінню або весною. У ще одному варіанті здійснення системи обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом можна поєднувати першу і п'яту гербіцидні обробки і орання, для досягнення кращих результатів в боротьбі з бур'янами. У ще одному варіанті здійснення на практиці для боротьби з резистентними до гербіцидів бур'янами в середовищі вирощування культури застосовують систему обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом, що включає стадію ідентифікації резистентного до гербіцидів бур'яну. У конкретних варіантах здійснення бур'ян вибраний з групи, що складається з: Alopecurus myosuroides, Avena fatua, Avena sterilis, Avena sterilis ludoviciana, Brachiaria plantaginea, Bromus diandrus, Bromus rigidus, Cynosurus echinatus, Digitaria ciliaris, Digitaria ischaemum, Digitaria sanguinalis, Echinochloa colona, Echinochloa crus-galli, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Eleusine indica, Eriochloa punctata, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Leptochloa chinensis, Lolium multiflorum, Lolium perenne, Loliumpersicum, Lolium rigidum, Phalaris minor, Phalaris paradoxa, Rottboellia exalta, Setaria faberi, Setaria viridis, Setaria viridis var. robusta-alba Schreiber, Setaria viridis var. robustapurpurea, Snowdenia polystachea, Sorghum halepense, Sorghum Sudanese, Alisma plantagoaquatica, Amaranthus blitoides, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amaranthus palmeri, Amaranthus powellii, Amaranthus quitensis, Amaranthus retroflexus, Amaranthus rudis, Amaranthus tuberculatus, Ambrosia artemisiifolia, Ambrosia trifida, Ammania auriculata, Ammania coccinea, Anthemis cotula, Apera spica-venti, Bacopa rotundifolia, Bidens pilosa, Bidens subalternans, Brassica tournefortii, Bromus tectorum, Camelina microcarpa, Chenopodium album, Chrysanthemum coronarium, Conyza bonariensis, Conyza canadensis, Cuscuta campestris, Cyperus difformis, Damasonium minus, Descurainia sophia, Diplotaxis tenuifolia, Echium plantagineum, Elatine triandra var. pedicellata, Euphorbia heterophylla, Fallopia convolvulus, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Helianthus annuus, Iva xanthifolia, Ixophorus unisetus, Kochia scoparia, Lactuca serriola, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Limnophila sessiliflora, Lindernia dubia, Lindernia dubia var. major, Lindernia micrantha, Lindernia procumbens, Mesembryanthemum crystallinum, Monochoria korsakowii, Monochoria vaginalis, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Parthenium hysterophorus, Pentzia suffruticosa, Phalaris minor, Raphanus raphanistrum, Raphanus sativus, Rapistrum rugosum, Rotala indica var. uliginosa, Sagittaria guyanensis, Sagittaria montevidensis, Sagittaria pygmaea, Salsola iberica, Scirpus juncoides var. ohwianus, Scirpus mucronatus, Setaria lutescens, Sida spinosa, Sinapis arvensis, Sisymbrium orientale, Sisymbrium thellungii, Solanum ptycanthum, Sonchus asper, Sonchus oleraceus, Sorghum bicolor, Stellaria media, Thlaspi arvense, Xanthium strumarium, Arctotheca calendula, Conyza sumatrensis, Crassocephalum crepidiodes, Cuphea carthagenenis, Epilobium adenocaulon, Erigeron philadelphicus, Landoltia punctata, Lepidium virginicum, Monochoria korsakowii, Poa annua, Solanum americanum, Solanum nigrum, Vulpia bromoides, Youngia japonica, Hydrilla verticillata, Plantago lanceolata, Carduus nutans, Carduus pycnocephalus, Centaurea solstitialis, Cirsium arvense, Commelina diffusa, Convolvulus arvensis, Daucus carota, Digitaria ischaemum, Echinochloa cruspavonis, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Limnophila erecta, Matricaria perforate, Papaver rhoeas, Ranunculus acris, Soliva sessilis, Sphenoclea zeylanica, Stellaria media, 7 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Nassella trichotoma, Stipa neesiana, Agrostis stolonifera, Polygonum aviculare, Alopecurus japonicus, Beckmannia syzigachne, Bromus tectorum, Chloris inflate, Echinochloa erecta, Portulaca oleracea і Senecio vulgaris. В іншому варіанті здійснення на практиці для боротьби з резистентною до гербіцидів самосівною рослиною застосовують систему обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом, що додатково включає стадію ідентифікації резистентної до гербіциду самосівної рослини, яка резистентна до гліфосату або ауксин-подібного гербіциду. Резистентна до гербіциду самосівна рослина може стосується одного або декількох з наступних видів рослин: кукурудза, рис, бавовник, сорго, пшениця, ячмінь, газонна трава, овес, люцерна, цукровий буряк, картопля, боби, горох, просо, льон, арахіс, рапс і соя. У ще одному варіанті здійснення систему обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом застосовують на практиці для боротьби зі злісними бур'янами в середовищі вирощування культури. Такий варіант здійснення може додатково включати стадію ідентифікації злісного бур'яну, включаючи нарівні з іншими видами наступні види: Abutilon theophrasti, Amaranthus sp., Amaranthus palmeri, Ambrosia artimisiifolia, Ambrosia trifida, Chenopodium album, Convolvulus arvensis, Conyza canadensis, Commelina sp., Commelina benghalensis, Ipomoea sp., Kochia sp., Polygonum convolvulus, Lolium rigidum, Sida spinosa і Solanum ptycanthum, і застосування гербіцидно ефективної кількості гербіциду, який є активним проти злісного бур'яну, де культурна рослина є стійкою до гербіциду, який активний проти злісного бур'яну. В іншому варіанті здійснення систему обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом застосовують на практиці для мінімізації розвитку резистентних до гербіцидів бур'янів в середовищі вирощування культури. В одному варіанті здійснення система може включати точкове внесення гербіциду, до якого чутливий резистентний до гербіциду бур'ян. Спосіб може бути модифікований для того, щоб відібрати популяцію щонайменше одного бур'яну, резистентного до першого гербіциду, шляхом застосування першого гербіциду протягом декількох вегетаційних періодів і потім застосування другого гербіциду, для знищення бур'янів, резистентних до першого гербіциду, в подальший вегетаційний період. У ще одному варіанті здійснення згідно з даним винаходом спосіб мінімізації розвитку резистентного до гербіциду бур'яну здійснюють завдяки чергуванню першої системи обробки сільськогосподарських культур, що включає культуру, стійку до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, і супутні гербіцидні обробки, з другою системою обробки сільськогосподарських культур, що включає культуру, стійку до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, і супутні гербіцидні обробки. Наприклад, якщо культура в першій системі обробки сільськогосподарських культур стійка до гліфосату, то культура у другій системі обробки сільськогосподарських культур може бути стійка до ауксин-подібного гербіциду, такого як дикамба, або стійка до гліфосату і ауксин-подібного гербіциду. У варіанті здійснення даного способу першу культуру сою, стійку до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, чергують з другою культурою, стійкою до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, вибраної з групи, що складається з кукурудзи, рису, бавовнику, сорго, пшениці, ячменю, вівса, люцерни, цукрового буряка, картоплі, бобів, гороху, проса, рапсу і льону. В одному варіанті здійснення спосіб включає чергування сої, що має стійкість до одного або декількох гербіцидів, з кукурудзою, що має стійкість до одного або декількох гербіцидів. В іншому варіанті здійснення даного способу першу культуру бавовник, стійкий до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, чергують з другою культурою, стійкою до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, вибраної з групи, що складається з кукурудзи, арахісу, сої, хлібного злаку і сорго. У ще одному варіанті здійснення спосіб включає чергування системи культивування, що містить бавовник, що має толерантність до одного або декількох гербіцидів з групи низького ризику, з системою культивування, що містить бавовник, що має стійкість до одного або декількох гербіцидів. Наприклад, якщо перша культура бавовнику стійка до гліфосату, то культура у другій системі обробки сільськогосподарських культур може бути стійка до ауксин-подібного гербіциду або стійка до гліфосату і ауксинподібного гербіциду. В останньому випадку чергування гербіцидів можна здійснювати на практиці таким чином, щоб підтримувати контролювання бур'янів, і так, щоб резистентний до гліфосату бур'ян не квітнув в "мертвий" сезон, тобто без гліфосату при чергуванні, і, тим самим, посилюючи проблему. Використання двох гербіцидів одночасно може бути переважним, оскільки два гербіциди можуть працювати в один час, не заважаючи один одному або не антагонізуючи один одного. В одному варіанті здійснення культура в системі обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом може бути стійкою щонайменше до одного гербіциду з групи низького ризику, що стосується груп за способами дії 4, 9, або 15 згідно WSSA. В іншому варіанті 8 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 здійснення культура стійка до інгібітору синтезу EPSP, інгібітору GS і/або ауксин-подібного гербіциду. У ще одному варіанті здійснення культура стійка до гліфосату, глюфосинату, дикамба, 2,4-D або їх комбінації. В одному варіанті здійснення в системах обробки сільськогосподарських культур, описаних в даному описі, використовують трансгенні культури, що мають один або декілька трансгенних ознак, що забезпечують стійкість до одного або декількох гербіцидів з різним способом дії, таким як гліфосат, глюфосинат, дикамба або 2,4-D, для боротьби з бур'янами, включаючи резистентні до гербіцидів бур'яни, злісні бур'яни, резистентні до гербіцидів самосівні рослини. Такі системи також можуть мінімізувати потенційний розвиток резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому. Крім того, системи обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом в одному варіанті здійснення дають можливість використовувати трансгенні культури, стійкі до одного або декількох гербіцидів, які вважаються гербіцидами групи низького ризику, додатково мінімізуючи, таким чином, можливість розвитку бур'янів, резистентних до таких гербіцидів. У конкретних варіантах здійснення в системах обробки сільськогосподарських культур використовують трансгенні рослини, що мають стійкість до дикамба, гліфосату і/або глюфосинату. Досходові застосування ауксин-подібних гербіцидів, таких як дикамба, раніше вимагали внесення гербіцидів задовго до висіву і проростання рослин, чутливих до ауксин-подібних гербіцидів, щоб забезпечити можливість розпаду гербіциду в навколишньому середовищі і уникнути істотного пошкодження або загибелі культури. Більшість культурних рослин, і особливо дводольні рослини, такі як соя і бавовник, надто чутливі до дикамба. Таким чином, необхідно суворо слідувати рекомендаціям виробників відносно відстрочок робіт після внесення. Застосування культурних рослин, що мають стійкість до одного або декількох ауксинподібних гербіцидів, таких як 2,4-D або споріднені сполуки і дикамба, дає можливість вносити такі гербіциди під час або в найближчий до висіву час. Було виявлено, наприклад, що рослини сої, трансформовані полінуклеотидними конструкціями, що кодують монооксигеназу дикамба (DMO), стійкі до раннього досходового внесення дикамба, де міра пошкодження складає менше 10 % навіть при 9-кратній в порівнянні з вказаною на етикетці дозою внесення (5040 г/га, 4,5 фунти/акр). Було виявлено, що навіть при використанні 18-кратної дози внесення 10080 г/га (9 фунтів/акр) пошкодження трансгенних стійких до дикамба рослин складало менше 20 % (заявка на патент США з реєстраційним номером 60/811276, включена в даний опис за допомогою посилання). Приблизно при 2-кратній дозі внесення 1122 г/га, спостерігали пошкодження, що складає менше 2 %. Таким чином, було показано, що можна використовувати поліпшене контролювання росту бур'янів, пов'язане з досходовими і післясходовими внесеннями гербіцидів, без будь-якого істотного зниження продуктивності внаслідок пошкодження, викликаного гербіцидами. Тому, наприклад, внесення дикамба до появи сходів сої згідно з винаходом можна комбінувати з внесеннями одного або декількох гербіцидів після сходів стійких до дикамба рослин, при цьому зберігаючи врожайність і одержуючи поліпшене контролювання бур'янів. Наприклад, одна така схема внесення гербіцидів включає внесення дикамба на пізній досходовій стадії рослин сої в комбінації з післясходовим внесенням дикамба на стадії розвитку V2. У деяких варіантах здійснення післясходове внесення можна здійснювати в будь-якій часовій точці від сходів до збору урожаю. Конкретний варіант включає післясходове внесення на будь-якій V-стадії аж до змикання листового покривала сої, наприклад, на стадіях V1, V2, V3, V4, V5, V6 і/або більш пізніх стадіях. В одному аспекті винахід стосується способу контролювання росту бур'янів на полі, що включає: a) внесення гербіцидно-ефективної кількості ауксин-подібного гербіциду в середовище вирощування культури; і висів трансгенного насіння культурної рослини, що експресує нуклеїнову кислоту, яка кодує монооксигеназу дикамба, в грунт в середовищі вирощування культури, де насіння проростає протягом 30 днів або менше після внесення гербіциду. У деяких варіантах здійснення насіння проростає протягом чотирьох тижнів, трьох тижнів, двох тижнів або менше ніж протягом одного тижня після обробки середовища вирощування ауксинподібним гербіцидом. Середовищем росту, що обробляється, може бути поле, на якому висівають культурну рослину. На полі може бути зроблений висів популяції насіння рослини, стійкої до ауксин-подібного гербіциду. Обробку середовища можна здійснювати відомими в даній галузі способами, використовуючи, наприклад, комерційно доступні препарати ауксинподібних гербіцидів, таких як дикамба. Середовище являє собою площу, на якій необхідний контроль над бур'янами і на якій може бути зроблений висів насіння рослини, стійкої до ауксинподібного гербіциду. Бур'ян може бути підданий безпосередньому контакту з гербіцидом в середовищі, і грунт в середовищі може бути підданий контакту з гербіцидом, що запобігає або знижує ріст бур'янів в грунті. Стадія обробки середовища гербіцидом може бути здійснена до, 9 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 після або одночасно зі стадією засівання грунту трансгенним насінням. Трансгенне насіння може бути посіяне в грунт в середовищі, наприклад, в межах 30 днів до або після обробки, включаючи приблизно від трьох тижнів, двох тижнів, одного тижня до 0 тижнів до або після обробки, включаючи приблизно 1, 2, 3, 4, 5 або 6 днів до або після обробки, включаючи висів одночасно з обробкою. Наприклад, в даному способі насіння проростає протягом приблизно від 30 до 0 днів після обробки середовища, включаючи приблизно від 21, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2, 1 дні до 0 днів після обробки середовища. Спосіб додатково може включати проведення однієї або декількох додаткових обробок ауксин-подібним гербіцидом після того, як насіння проросте і/або рослина росте. У способі згідно з винаходом ауксин-подібний гербіцид може бути вибраний з групи, що складається із сполуки феноксикарбонової кислоти, сполуки бензойної кислоти, сполуки піридинкарбонової кислоти, сполуки хінолінкарбонової кислоти і сполуки беназолінетилу. Приклади сполуки феноксикарбонової кислоти включають 2,4-дихлорфеноксіоцтову кислоту (2,4-D), 4-(2,4-дихлорфенокси)масляну кислоту (2,4-DB) і (4-хлор-2-метилфенокси)оцтову кислоту (MCPA). У деяких варіантах здійснення гербіцидно-ефективна кількість, що використовується 2,4-D, 2,4-DB і/або MCPA складає приблизно від 2 г/га (грам/гектар) до приблизно 5000 г/га, включаючи приблизно від 50 г/га до приблизно 2500 г/га, приблизно від 60 г/га до приблизно 2000 г/га, приблизно від 100 г/га до приблизно 2000 г/га, приблизно від 75 г/га до приблизно 1000 г/га, приблизно від 100 г/га до приблизно 500 г/га і приблизно від 100 г/га до приблизно 280 г/га. У деяких варіантах здійснення як гербіцид використовують дикамба. У деяких варіантах здійснення гербіцидно-ефективна кількість дикамба, що використовується, може складати приблизно від 2,5 г/га до приблизно 10080 г/га, включаючи приблизно від 2,5 г/га до приблизно 5040 г/га, приблизно від 5 г/га до приблизно 2020 г/га, приблизно від 10 г/га до приблизно 820 г/га і приблизно від 50 г/га до приблизно 1000 г/га, приблизно від 100 г/га до приблизно 800 г/га і приблизно від 250 г/га до приблизно 800 г/га. Згідно з винаходом пропонуються способи і композиції для боротьби з бур'янами, що включають застосування рослин, що мають стійкість до гліфосату і ауксин-подібних гербіцидів, таких як дикамба. Комбінація дикамба і гліфосату дає можливість застосовувати зменшені кількості гербіцидів, для досягнення такого ж рівня контролю стійких до гліфосату бур'янів. Таке поєднання забезпечує значний прогрес в контролюванні стійкості до гербіцидів в галузі комерційного виробництва. В одному варіанті здійснення використовують суміш гліфосату і дикамба, приготовану безпосередньо перед застосуванням, до появи сходів і/або після сходів рослин. Крім того, гліфосат і дикамба можна вносити роздільно. Щоб досягнути такого ж рівня контролювання росту бур'янів з використанням меншої кількості гербіциду в порівнянні з окремим застосуванням кожного або обох гербіцидів, гліфосат і дикамба переважно вносять з інтервалом, достатнім, щоб обидва гербіциди залишалися активними і здатними контролювати ріст бур'янів. Отже, передбачається комбіноване використання менших кількостей гербіцидів, щоб досягнути такої ж міри контролювання росту бур'янів, як і у випадку застосування тільки одного з гербіцидів. Наприклад, винахід стосується способів боротьби з бур'янами, що включають внесення на поле, засіяне трансгенними рослинами, що мають стійкість до дикамба і гліфосату, гербіцидної композиції, що містить менше 1-кратної норми гліфосату і/або дикамба в порівнянні зі стандартною нормою, що вказується виробником. Приклади відповідних норм внесення гліфосату і дикамба становлять приблизно 0,5-0,95 кожного гербіциду, зокрема, включаючи приблизно 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,85, 0,9 і 0,95 будь-якого з гербіцидів і всі їх комбінації, що одержуються, а також більш високі норми, такі як 0,97 і 0,99. Альтернативно, в тому випадку, коли важче контролювати бур'яни або коли потрібна більш висока міра контролювання бур'янів, можуть бути використані 1 і більш високі норми внесення в зв'язку з тим, як було виявлено, що навіть високі норми внесення дикамба суттєво не ушкоджують рослини. Однократні норми внесення вказані виробником комерційно доступного гербіцидного препарату і відомі фахівцям TM в даній галузі. Наприклад, на етикетці до Fallow Master , суміші гліфосату і дикамба, що має співвідношення гліфосат:дикамба приблизно 2:1, рекомендовані норми внесення приблизно від 451 г/га (311 г в кислотному еквіваленті/га гліфосату:140 г в кислотному еквіваленті/га дикамба) до 621 г в кислотному еквіваленті/га (428 г в кислотному еквіваленті/га гліфосату:193 г в кислотному еквіваленті/га дикамба) залежно від виду бур'яну і висоти бур'яну. Комбінування гліфосату і дикамба дає можливість використовувати менше гербіциду для досягнення такого ж рівня контролювання росту бур'янів, як показано нижче. Тому спектр бур'янів, які можна контролювати при будь-якій заданій нормі внесення гербіциду, може бути збільшений у випадку комбінації гербіцидів. 10 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Трансгенні рослини, що мають стійкість до гербіцидів, можуть бути одержані, як описано в даній галузі. Стійкість до дикамба може додавати, наприклад, ген монооксигенази дикамба (DMO) з Pseudomonas maltophilia (наприклад, заявка на патент США No: 20030135879). Приклади послідовностей, які можуть бути використані в зв'язку з цим, також описані в заявці на патент США 60/811276, включеній в даний опис за допомогою посилання у всій своїй повноті. Також відома додаткова активність, що розкладає ауксин-подібні гербіциди, включаючи активність дегалогенази (Wang, 1996). Немодифіковані і модифіковані білкові молекули і відповідні ним молекули нуклеїнових кислот, що надають стійкість до одного або декількох з вказаних гербіцидів, добре відомі в даній галузі. Приклади таких молекул наведені нижче і включені в даний опис за допомогою посилання: a) послідовності, що кодують стійкість до гліфосату, включають 5-енолпірувілшикімат-3фосфатсинтази (EPSPS; патент США 5627061, патент США RE39247, патент США 6040497, патент США 5094945, WO 04074443 і WO 04009761), гліфосатоксидоредуктазу (GOX; патент США 5463175), гліфосатдекарбоксилазу (WO 05003362 і заявка на патент США 20040177399) і гліфосат-N-ацетилтрансферазу (GAT; наприклад публікації патентів США 20030083480 і 20070079393), що надають стійкість до гліфосату; b) монооксигеназа дикамба (DMO, що кодується ddmC), що надає стійкість до ауксинподібних гербіцидів, таких як дикамба (заявки на патент США 20030115626, 20030135879; Wang et al., 1996; Herman et al., 2005); c) фосфінотрицинацетилтрансфераза (bar), що надає стійкість до фосфінотрицину або глюфосинату (U.S. 5646024, U.S. 5561236, EP 275957, U.S. 5276268, U.S. 5637489, U.S. 5273894); d) дегалогеназа 2,2-дихлорпропіонової кислоти, що надає стійкість до 2,2-дихлорпропіонової кислоти (далапон) (WO9927116); e) синтаза ацетогідроксикислоти або синтаза ацетолактату, що надає стійкість до інгібіторів ацетолактатсинтази, таких як сульфонілсечовина, імідазолінон, триазолопіримідин, піримідилоксибензоати і фталід (U.S. 6225105, U.S. 5767366, U.S. 4761373, U.S. 5633437, U.S. 6613963, U.S. 5013659, U.S. 5141870, U.S. 5378824, U.S. 5605011); f) галоарилнітрилаза (Bxn) для надання стійкості до бромоксинілу (WO8704181A1, U.S. 4810648, WO8900193A); g) модифікована ацетил-кофермент А-карбоксилаза для надання стійкості до циклогександіону (сетоксидиму) і арилоксифеноксипропіонату (галоксифопу) (U.S. 6414222); h) дигідроптероатсинтаза (sulI) для надання стійкості до сульфонамідних гербіцидів (U.S. 5597717, U.S. 5633444, U.S. 5719046); i) поліпептид фотосистеми II з молекулярною масою 32 кД (psbA) для надання стійкості до триазинових гербіцидів (Hirschberg et al, 1983); j) антранілатсинтаза для надання стійкості до 5-метилтриптофану (U.S. 4581847); k) синтаза дигідродипіколінової кислоти (dapA) для надання стійкості до аміноетилцистеїну (WO8911789); l) фітоендесатураза (crtI) для надання стійкості до піридазинонових гербіцидів, таких як норфлуразон (JP06343473); m) гідроксифенілпіруватдіоксигеназа для надання стійкості до циклопропілізоксазолових гербіцидів, таких як ізоксафлутол (WO 9638567, U.S. 6268549); n) модифікована протопорфіриногеноксидаза I (protox) для надання стійкості до інгібіторів протопорфіриногеноксидази (U.S. 5939602); і o) арилоксіалканоатдіоксигеназа (AAD-1, AAD-12) для надання стійкості до гербіциду, що містить залишок арилоксіалканоату (WO05107437, WO07053482). Приклади таких гербіцидів включають феноксіауксини (такі як 2,4-D і дихлорпроп), піридилоксіауксини (такі як флуроксипір і триклопір), арилоксифеноксипропіонати (AOPP), інгібітори ацетил-кофермент А-карбоксилази (АСС-ази) (такі як галоксифоп, хізалофоп і диклофоп) і 5-заміщені феноксіацетатние інгібітори протопорфіриногеноксидази IX (такі як пірафлуфен і флуміклорак). Варіанти DMO, що мають здатністьруйнувати ауксин-подібні гербіциди, а також гліфосат, або інші гени стійкості до гербіцидів легко можуть бути одержані і проаналізовані відносно активності згідно зі стандартними способами. Такі послідовності також можуть бути ідентифіковані способами, відомими до даної галузі, такими як гібридизація нуклеїнових кислот, наприклад, з відповідних організмів, включаючи бактерії, які руйнують ауксин-подібні гербіциди, такі як дикамба або інші гербіциди (патент США 5445962; Cork and Krueger, 1991; Cork and Khalil, 1995). Варіанти також можуть бути синтезовані хімічно, наприклад, з використанням відомих полінуклеотидних послідовностей DMO згідно з методиками, добре відомими в даній 11 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 галузі. Наприклад, послідовності ДНК можуть бути синтезовані способами хімії фосфоамідитів в автоматизованому синтезаторі ДНК. Хімічний синтез бажаний тому, що можна використовувати колоди, яким віддається перевага хазяїна, в якому послідовність ДНК буде експресуватися, щоб оптимізувати експресію. У поліпептидній послідовності білка, наприклад в послідовностях DMO, що пропонуються в даному винаході, можуть бути здійснені модифікації і зміна при збереженні ферментативної активності. Далі наведене обговорення зміни амінокислот в білці, з метою створення еквівалентного або навіть поліпшеного модифікованого поліпептиду і відповідних кодуючих послідовностей. Наприклад, відомо, що деякі амінокислоти можуть замінювати інші амінокислоти в структурі білка без помітної втрати здатності до зв'язування при взаємодії з такими структурами, як ділянки зв'язування в молекулах субстратів. Оскільки здатність до взаємодії і природа білка визначають функціональну біологічну активність даного білка, то можуть бути здійснені деякі заміни послідовності амінокислот в послідовності білка, і зазвичай, у відповідній кодуючій послідовності ДНК, і проте одержати білок з подібними властивостями. Таким чином, передбачається, що можуть бути здійснені різні зміни в пептидних послідовностях DMO, описаних в даному описі, або в інших поліпептидах, що забезпечують стійкість до гербіцидів, і у відповідних кодуючих послідовностях ДНК, без істотної втрати їх біологічної користі або активності. При здійсненні таких змін можна враховувати гідропатичний індекс амінокислот. Значення гідропатичного індексу амінокислот в забезпеченні біологічної функції білка, заснованої на взаємодії, загалом, відоме в даній галузі (Kyte et al., 1982). Відомо, що відносний гідропатичний характер амінокислоти вносить внесок у вторинну структуру одержаного внаслідок білка, яка в свою чергу визначає взаємодію білка з іншою молекулою, наприклад, ферментами, субстратами, рецепторами, ДНК, антибіотиками, антигенами і подібним. У даній галузі відомо, що амінокислоти можна замінити іншими амінокислотами, які мають схожий гідропатичний індекс або оцінку, і при цьому все ще одержати білок зі схожою біологічною активністю, тобто одержати все ще біологічно функціонально еквівалентний білок. При здійсненні таких змін переважна заміна амінокислот, гідропатичні індекси яких знаходяться в межах ±2, особливо переважно в межах ±1 і ще більш переважно в межах ±0,5. Також в даній галузі відомо, що заміна схожих амінокислот може бути ефективно здійснена на основі гідрофільністі. У патенті США 4554101 вказано, що найбільша локальна середня гідрофільність білка, яка зумовлена гідрофільністю сусідніх амінокислот даного білка, корелює з біологічною властивістю білка. Зрозуміло, що амінокислота може бути замінена іншою амінокислотою, що має схоже значення гідрофільністі, і ще одержати біологічно еквівалентний білок. При таких змінах переважна заміна амінокислот, значення гідрофільністі яких знаходяться в межах ±2, особливо переважно в межах ±1 і ще більш переважно в межах ±0,5. Приклади замін, при яких враховують такі і різні вказані вище характеристики, добре відомі фахівцям в даній галузі і включають: аргінін і лізин; глутамат і аспартат; серин і треонін; глутамін і аспарагін; і валін, лейцин і ізолейцин. Ген, що надає стійкість до гербіциду, зазвичай може бути зв'язаний з промотором рослин, керівником експресією гена в кількості, достатній для надання стійкості до гербіцидів. Промотори, придатні для такого і інших застосувань, добре відомі в даній галузі. Прикладами публікацій, що описують такі промотори, є патент США 6437217 (промотор RS81 кукурудзи), патент США 5641876 (промотор актина рису), патент США 6426446 (промотор кукурудзи RS324), патент США 6429362 (промотор PR-1 кукурудзи), патент США 6232526 (промотор A3 кукурудзи), патент США 6177611 (конститутивні промотори кукурудзи), патенти США 5322938, 5352605, 5359142 і 5530196 (промотор 35S), патент США 6433252 (промотор олеозину L3 кукурудзи), патент США 6429357 (промотор актину 2 рису, а також інтрон актину 2 рису), патент США 5837848 (специфічний для кореня промотор), патент США 6294714 (промотори, що високо індукуються), патент США 6140078 (промотори, що індукуються сіллю), патент США 6252138 (патогенами, що індукуються промотори), патент США 6175060 (промотори, що індукуються недостатністю фосфору), патент США 6388170 (двонаправлені промотори), патент США 6635806 (промотор гамма-коіксину) і заявка на патент США з реєстраційним номером 09/757089 (промотор альдолази хлоропластів кукурудзи). Додатковими промоторами, які можуть знайти застосування, є промотор нопалінсинтази (NOS) (Ebert et al., 1987), промотор октопінсинтази (OCS) (який несе індукуючі пухлини плазміди Agrobacterium tumefaciens), промотори колімовірусів, такі як промотор 19S вірусу мозаїки цвітної капусти (CaMV) (Lawton et al., 1987), промотор 35S CaMV (Odell et al, 1985), промотор 35S вірусу мозаїки ранника (Walker et al, 1987), промотор сахарозосинтази (Yang et al., 1990), промотор генного комплексу R (Chandler et al., 1989), промотор гена білка, зв'язуючого хлорофіл а/b, CaMV35S (патенти США No. 5322938, 12 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5352605, 5359142 і 5530196), FMV35S (патенти США 6051753, 5378619), промотор PClSV промотор (наприклад патент США 5850019, і промотор з послідовністю SEQ ID NO: 15), промотор SCP1 (патент США No. 6677503) і промотори AGRtu.nos (номер доступу в GenBank V00087; Depicker et al., 1982; Bevan et al., 1983) і подібні. Для експресії генів стійкості до гербіцидів може бути корисне використання послідовності, що кодує транзитну пептид. Наприклад, показано, що введення відповідного транзитного пептиду хлоропластів, такого як CTP EPSPS Arabidopsis thaliana (Klee et al., 1987) і CTP EPSPS Petunia hybrida (della-Cioppa et al., 1986), направляє гетерологічні послідовності білків EPSPS в хлоропласти в трансгенних рослинах. DMO також може бути направлений в хлоропласти. Транзитні пептиди хлоропластів (CTP) конструюють у вигляді злиття з N-кінцем білка, щоб направити білок в хлоропласти рослин. Такі послідовності можуть бути застосовні, зокрема, відносно нуклеїнової кислоти, що надає стійкість до дикамба. Багато локалізованих в хлоропластах білків експресуються з ядерних генів у вигляді попередників і прямують в хлоропласт транзитним пептидом хлоропластів, який віддаляється в ході процесу імпорту. Приклади хлоропластних білків включають малу субодиницю (RbcS2) рибулозо-1,5біфосфаткарбоксилази, наприклад, з гороху (Pisum sativum), фередоксин, фередоксиноксидоредуктазу, світлоутворювальний комплекс білків I і білків II і тіоредоксин F. Інші приклади направляючих в хлоропласти послідовностей включають сигнальну послідовність cab-m7 кукурудзи (Becker et al., 1992; PCT WO 97/41228), сигнальну послідовність глутатіонредуктази гороху (Creissen et al., 1995; PCT WO 97/41228) і CTP транзитного пептиду малої субодиниці (SSU-CTP) рибулозо-1,5-біфосфаткарбоксилази хлоропластів Nicotiana tobaccum (Mazur, et al., 1985). Застосування AtRbcS4 (CTP1; патент США 5728925), AtShkG (CTP2; Klee et al., 1987), AtShkGZm (синтетичний CTP2; див. послідовність SEQ ID NO: 14 в WO 04009761), PsRbcS (Coruzzi et al., 1984) і послідовностей, описаних в попередній заявці на патент США з реєстраційним номером 60/891675, для даного винаходу особливо може бути корисним, наприклад, відносно експресії поліпептиду DMO (наприклад, див. SEQ ID NO: 3-14 відносно пептидних послідовностей CTP і послідовностей нуклеїнових кислот, які їх кодують). 5'-UTR, яка функціонує як лідерна послідовність трансляції, являє собою генетичний ДНКелемент, розташований між промоторною послідовністю гена і кодуючою послідовністю. Лідерна послідовність трансляції присутня в повністю процесованій мРНК вище стартової послідовності трансляції. Лідерна послідовність трансляції може впливати на процесинг первинного транскрипта в мРНК, на стабільність або ефективність трансляції мРНК. Прикладами лідерних послідовностей трансляції, нарівні з іншими послідовностями, є лідери білків теплового шоку кукурудзи і петунії (патент США No. 5362865), лідери білків оболонки вірусів рослин, лідери рослинного білка rubisco (Turner and Foster, 1995). Необмежувальними прикладами 5'-UTR, які, зокрема, можуть бути корисними для застосування, є GmHsp (патент США 5659122), PhDnaK (патент США 5362865), AtAntl, TEV (Carrington and Freed, 1990) і AGRtunos (номер доступу в GenBank V00087; Bevan et al., 1983). 3'-послідовність, що не трансюється, 3'-область термінації транскрипції або область поліаденілування означає молекулу ДНК, зв'язану і локалізовану нижче структурної полінуклеотидної молекули, і включає полінуклеотиди, які забезпечують сигнал поліаденілування і інші регуляторні сигнали, здатний впливати на транскрипцію, процесинг мРНК або експресію гена. Сигнал поліаденілування функціонує в рослинах, спричиняючи додавання поліаденілатних нуклеотидів до 3'-кінця попередника мРНК. Послідовність поліаденілування може бути одержана з природного гена, з різних рослинних генів або з генів ТДНК. Прикладом 3'-області термінації транскрипції є 3'-область нопалінсинтази (nos 3'; Fraley et al., 1983). Приклади застосування різних 3'-немаєрансльованих областей наведені в публікації Ingelbrecht et al., 1989. Молекули поліаденілування з гена RbcS2 Pisum sativum (Ps.RbcS2-E9; Coruzzi et al., 1984) і AGRtu.nos (Genbank, номер доступу E01312), зокрема, можуть бути корисні для застосування у винаході. Можна використовувати будь-який зі способів, відомих в даній галузі, для введення трансгенів в рослини, щоб одержати стійку до гербіцидів рослину згідно з винаходом (див., наприклад, Miki et al., 1993). Вважають, що відповідні способи трансформації рослин включають фактично будь-який спосіб, за допомогою якого ДНК може бути введена в клітину, такий як електропорація, як проілюстровано в патенті США No. 5384253; бомбардування мікрочастинками, як проілюстровано в патентах США No. 5015580, 5550318, 5538880, 6160208, 6399861 і 6403865; опосередкована Agrobacterium трансформація, як проілюстровано в патентах США No. 5635055, 5824877, 5591616, 5981840 і 6384301; і трансформація протопластів, як проілюстровано в патенті США No. 5508184, і т.д. Завдяки застосуванню способів, таких як наведені вище способи, клітини фактично любого виду рослини можуть бути 13 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 стабільно трансформовані, і такі клітини розвиваються в трансгенні рослини. Методики, які можуть бути особливо застосовні в контексті трансформації бавовнику, розкриті в патентах США No. 5846797, 5159135, 5004863 і 6624344; і способи трансформації рослин Brassica, зокрема, розкриті, наприклад, в патенті США 5750871; і способи трансформації сої розкриті, наприклад, в Zhang et al., 1999 і патенті США 6384301. Методики трансформації кукурудзи розкриті, наприклад, в патенті США 7060876, патенті США 5591616 і в WO 9506722. Після здійснення доставки екзогенної ДНК в клітини реципієнта наступні стадії зазвичай стосуються ідентифікації трансформованих клітин для подальшого культивування і регенерації рослин. Щоб підвищити можливість ідентифікації трансформантів може вимагатися використання селектованого гена або маркерного, що виявляється при скринінгу разом з векторами для трансформації, одержаними згідно з винаходом. У такому випадку потім зазвичай може бути проведений аналіз популяції потенційно трансформованих клітин за допомогою впливу на клітини селективного агента або агентів, або може бути проведений скринінг клітин відносно ознаки, що визначається необхідним маркерним геном. Клітини, які виживають при впливі селективного агента, або клітини, які були оцінені позитивно в скринінговому аналізі, можуть бути культивовані в середовищі, яке підтримує регенерацію рослин. У конкретному варіанті здійснення будь-яке придатне середовище для культивування рослинної тканини, наприклад, середовище MS і N6, може бути модифіковане введенням додаткових речовин, таких як регулятори росту. Тканину можна підтримувати в основному середовищі з регулювальниками росту доти, поки не стане доступною достатня кількість тканини, щоб почати спроби регенерації рослин, або після багаторазових раундів селекції вручну доти, поки морфологія тканини не буде придатною для регенерації, зазвичай щонайменше 2 тижні, потім тканину переносять в середовище, сприятливе для формування пагонів. Культури періодично пересаджують поки не станемаєься достатнє утворення пагонів. Після утворення пагонів їх переносять в середовище, сприятливе для утворення коріння. Після достатнього утворення коріння рослини можуть бути перенесені в грунт для подальшого росту і дозрівання. Щоб підтвердити присутність екзогенної ДНК або "трансгену(ів)» в регенеруючих рослинах, можна провести декілька аналізів. Такі аналізи включають, наприклад, "молекулярно-біологічні" аналізи, такі як Саузерн- і Нозерн-блоттинг і ПЛР; "біохімічні" аналізи, такі як виявлення присутності білкового продукту, наприклад, імунологічний способами (ELISA і Вестерн-блоти) або на основі ферментативної функції; аналізи частин рослини, наприклад аналізи листя або коріння; а також внаслідок аналізу фенотипу цілої регенерованої рослини. Після введення трансгену в рослину такий ген може бути введений статевим шляхом в будь-яку рослину, сумісну з першою рослиною, при схрещуванні без необхідності в прямій трансформації другої рослини. Отже, термін "потомство" в значенні, що використовується в даному описі, означає нащадків будь-якого покоління вихідної рослини, одержаної згідно з даним винаходом, де потомство містить вибрану конструкцію ДНК, одержану згідно з винаходом. Таким чином, "трансгенна рослина" може бути рослиною будь-якого покоління. "Схрещування" рослини, для одержання лінії рослин, що мають один або декілька доданих трансгенів або алелів в порівнянні з вихідною лінією рослин, як описано в даному описі, визначають як спосіб, який призводить до введення конкретної послідовності в лінію рослин за допомогою схрещування вихідної лінії з донорною лінією рослин, яка містить трансген або алель згідно з винаходом. Для досягнення вказаної мети можуть бути здійснені, наприклад, наступні стадії: (a) висів насіння першої (вихідна лінія) і другої (донорна лінія рослин, яка містить необхідний трансген або алель) батьківських рослин; (b) ріст з насіння першої і другої батьківських рослин нових рослин, що дає квітки; (с) запилення квітки першої батьківської рослини пилком другої батьківської рослини; і (d) збір насіння, одержаного на батьківській рослині, що несе запилену квітку. Культурна рослина може являти собою дводольну культурну рослину, вибрану з групи, що складається з люцерни, бобів, броколі, капусти, моркви, цвітної капусти, селери, китайської капусти, бавовнику, огірка, баклажана, латуку, дині, гороху, перця, арахісу, картоплі, гарбуза, редьки, рапсу, шпинату, сої, гарбуза великоплідного, цукрового буряка, соняшника, томата і кавуна. Переважно, культурною рослиною є культура сої або бавовники. Культурна рослина може являти собою однодольну рослину, вибрану з групи, що складається з кукурудзи, лука, рису, сорго, пшениці, ржи, проса, цукрової тростини, вівса, тритикале, проса прутьевидного і газонної трави. Переважно, культурною рослиною є кукурудза. 14 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Молекули нуклеїнових кислот, що забезпечують стійкість до гліфосату, глюфосинату, дикамба і 2,4-D, описані вище. Такі молекули нуклеїнових кислот вводять в сою або бавовник способами трансформації, як описано вище. Використовують обладнання і способи, відоме в даній галузі, для проведення різних гербіцидних обробок, які розкриті в даному описі. Норми внесення гербіцидів можуть варіювати, наприклад, як описано вище, залежно від структури грунту, pH, вмісту органічних речовин, систем обробки грунту і розміру бур'яну, і можуть бути визначені з урахуванням інструкції на етикетці до гербіциду для правильного визначення норми гербіциду. Одержання гербіцидних композицій для застосування в даному винаході буде зрозуміле фахівцям в даній галузі в світлі даного опису. Такі композиції, які є комерційно доступними, як правило, будуть містити в доповнення до активного інгредієнта такі компоненти, як поверхневоактивні речовини, тверді або рідкі носії, розчинники і зв'язуючі агенти. Приклади поверхневоактивних речовин, які можуть бути використані для застосування на рослинах, включають солі лужних металів, лужноземельних металів або амонію і ароматичних сульфонових кислот, наприклад, лігно-, фенол-, нафталін- і дибутилнафталінсульфонової кислоти, і жирних кислот, арилсульфонатів, алкілових ефіру, лаурилових ефіру, сульфатів жирних спиртів і сульфатів гліколевих ефірів жирних спиртів, конденсати сульфонованого нафталіну і його похідних з формальдегідом, конденсати нафталіну або нафталінсульфонових кислот з фенолом і формальдегідом, конденсати фенолу або фенолсульфонової кислоти з формальдегідом, конденсати фенолу з формальдегідом і сульфітом натрію, поліоксіетиленоктилфеніловий ефір, етоксильований ізооктил-, октил- або нонілфенол, трибутилфенілполігліколевий ефір, алкіларилполіефірні спирти, ізотридециловий спирт, етоксильована рицинова олія, етоксильовані триарилфеноли, солі фосфатованих триарилфенолетоксилатів, ацетат полігліколевого ефіру лаурилового спирту, сорбітолові складні ефіри, відпрацьований лігнінсульфітний луг або метилцелюлозу, або їх суміші. Встановлена практика відносно поверхневоактивних речовин заснована на використанні приблизно від 0,25 % до 1,0 % мас. і зазвичай приблизно від 0,25 % до 0,5 % мас. Композиції для застосування на рослинах можуть бути твердими або рідкими. У випадку використання твердих композицій може вимагатися включення одного або декількох носіїв в композицію з активною сполукою. Приклади носіїв включають мінеральні землі, такі як кремнезем, силікагелі, силікати, тальк, каолін, атапульгітова глина, вапняк, крейда, лес, глина, доломіт, діатомова земля, сульфат кальцію, сульфат магнію, оксид магнію, подрібнені синтетичні матеріали, добрива, такі як сульфат амонію, фосфат амонію, нітрат амонію, тіосечовина і сечовина, продукти рослинного походження, такі як борошно злакових культур, борошно хінного дерева, деревне борошно і борошно з шкаралупи горіхів, целюлозні порошки, атапульгіти, монтморилоніти, слюда, вермікуліти, синтетичний діоксид кремнію і синтетичні силікати кальцію або їх суміші. Тверді препарати можуть бути приготовані у вигляді пилоподібних препаратів, дисперсних порошків, гранул, мікрокапсул і подібного. Рідкі препарати можуть являти собою водні і неводні розчини, емульсії і тому подібне. У випадку рідких розчинів можуть бути включені водорозчинні сполуки або солі, такі як сульфат натрію, сульфат калію, хлорид натрію, хлорид калію, ацетат натрію, гідросульфат амонію, хлорид амонію, ацетат амонію, форміат амонію, оксалат амонію, карбонат амонію, гідрокарбонат амонію, тіосульфат амонію, гідродифосфат амонію, дигідромонофосфат амонію, гідрофосфат натрію-амонію, тіоціанат амонію, сульфамат амонію або карбамат амонію. Інші приклади сполук в гербіцидних композиціях включають зв'язуючі агенти, такі як полівінілпіролідон, полівініловий спирт, частково гідролізований полівінілацетат, карбоксиметилцелюлоза, крохмаль, співполімери вінілпіролідон/вінілацетату і полівінілацетат або їх суміші; лубриканти, такі як стеарат магнію, стеарат натрію, тальк або поліетиленгліколь або їх суміші; антиспінювачі, такі як силіконові емульсії, спирти з довгими ланцюгами, складні ефіри фосфорної кислоти, ацетилендіоли, жирні кислоти або фторорганічні сполуки, і комплексоутворювальні агенти, такі як солі етилендіамінтетраоцтової кислоти (EDTA), солі тринітрилотриоцтової кислоти або солі поліфосфорних кислот, або їх суміші. Також розкриті способи мінімізації розвитку резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому за допомогою чергування першої системи обробки сільськогосподарських культур в перший рік, що включає культуру, стійку до одного або декількох гербіцидів, і супроводжуючі гербіцидні обробки, з другою системою обробки сільськогосподарських культур у другий рік, що включає культуру, стійку до одного або декількох гербіцидів, і супроводжуючі гербіцидні обробки, де друга культура має стійкість до іншого гербіциду або комбінації гербіцидів. Системи обробки сільськогосподарських культур, розкриті в даному описі, включають не тільки застосування культур, які стійкі до одного або декількох гербіцидів, і застосування 15 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 хімічних способів боротьби з бур'янами, наприклад, різних типів, норм і часу внесення гербіцидів, але також застосування способів культивування, таких як сівозміна культури з іншими трансгенними культурами, що мають стійкість до одного або декількох гербіцидів, і механічних способів боротьби з бур'янами, таких як орання, одержуючи в результаті новий інтегрований спосіб боротьби з бур'янами. У системі обробки сільськогосподарських культур згідно з даним винаходом одержують і використовують культуру, стійку до одного або декількох гербіцидів, що належать до різних груп за способом дії. Такі гербіциди, схвалені Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA), і необмежувальні приклади показані в таблиці 2 (Mallory-Smith and Retzinger Jr., 2003; Herbicide Handbook, 2002,; Schmidt, 1997). При прочитанні опису винаходу потрібно мати на увазі наступні визначення: "Ауксин-подібні" гербіциди належать до гербіцидів чотирьох хімічних сімейств: феноксисполук, карбонової кислоти (або пірідин), бензойної кислоти і хіналінкарбонової кислоти. Такі типи гербіцидів імітують або діють подібно природним регуляторам росту рослин, що називаються ауксинами. Дія ауксинових гербіцидів, ймовірно, впливає на еластичність клітинної стінки і метаболізм нуклеїнових кислот, які можуть призводити до неконтрольованого поділу і росту клітин. Фенокси-гербіциди є найбільш поширеними і використовуються як гербіциди з 1940-х років, коли була відкрита (2,4-дихлорфенокси)оцтова кислота (2,4-D). Інші приклади включають 4-(2,4дихлорфенокси)масляну кислоту (2,4-DB), 2-(2,4-дихлорфенокси)пропіонову кислоту (2,4-DP), (2,4,5-трихлорфеноксі)оцтову кислоту (2,4,5-T), 2-(2,4,5-трихлорфенокси)пропіонову кислоту (2,4,5-TP), 2-(2,4-дихлор-3-метилфенокси)-N-фенілпропанамід (кломепроп), (4-хлор-2метилфеноксі)оцтову кислоту (MCPA), 4-(4-хлор-о-толилокси)масляну кислоту (MCPB) і 2-(4хлор-2-метилфенокси)пропіонову кислоту (MCPP). Наступним найбільш великим хімічним сімейством є гербіциди типу карбонових кислот, також звані піридиновими гербіцидами. Приклади включають 3,6-дихлор-2-піридинкарбонову кислоту (клопіралід), 4-аміно-3,5,6-трихлор-2-піридинкарбонову кислоту (піклорам), (2,4,5трихлорфеноксі)оцтову кислоту (триклопір) і 4-аміно-3,5-дихлор-6-фтор-2-піридилоксіоцтову кислоту (флуроксипір). Приклади бензойних кислот включають 3,6-дихлор-о-анісову кислоту (дикамба), 3,5,6трихлор-о-анісову кислоту (трикамба) і 3-аміно-2,5-дихлорбензойну кислоту (хлорамбен). Дикамба є особливо застосовним гербіцидом для використання в даному винаході. Четвертим хімічним сімейством ауксинових гербіцидів є сімейство хіналінкарбонових кислот, прикладом яких є 3,7-дихлор-8-хінолінкарбонова кислота (хінклорак). Вказаний гербіцид є унікальним в тому, що він також буде контролювати деякі трав'янисті злакові бур'яни, на відміну від інших ауксин-подібних гербіцидів, які по суті контролюють тільки широколисті або дводольні рослини. Іншим гербіцидом в такій категорії є 7-хлор-3-метил-8-хінолінкарбонова кислота (хінмерак). "Дикамба" стосується 3,6-дихлор-о-анісової кислоти або 3,6-дихлор-2-метоксибензойної кислоті і їх солей. Такі солі включають солі ізопропіламіну, диглікоаміну, диметиламіну, калію і TM натрію. Приклади комерційних препаратів дикамба включають, але без обмеження, Banvel (у TM TM TM вигляді DMA-солі), Clarity (у вигляді DGA-солі), VEL-58-CS-11 і Vanquish (у вигляді DGAсолі, BASF). Повний список бур'янів, які можна контролювати з використанням дикамба, можна знайти на сайті www.greenbook.net/docs/Label/L2281.pdf. Гербіцид особливо застосовний для боротьби з більш високими бур'янами і з бур'янами, які важко контролювати, такими як портулак, гусимець канадський, березка і горець березковий. Дикамба можна використовувати для боротьби з TM бур'янами, не чутливими до інших гербіцидів. Після внесення Clarity , препарату дикамба, рекомендоване мінімальне накопичення 2,5 см дощових осадів або вологи при зрошуванні, з подальшим 14-денним періодом очікування у випадку норм внесення від 4 до 8 унцій/акр (280,2560,4 г/га) або 28-денним періодом очікування у випадку норми внесення 16 унцій/акр (1120,8 г/га) для боротьби з бур'янами на соєвому полі (див. таблицю 22 в VanGessel and Majek, 2005). В інструкції до Clarity® рекомендується його внесення щонайменше за 15 днів до висіву сорго. Подібним чином, у випадку бавовнику рекомендований період очікування 21 день після внесення Clarity® або Banvel® на полі перед висівом насіння бавовнику (Craig et al., 2005, TM www.ipmcenters.org/cropprofiles/docs/tncotton.h l) і в прикладеній інструкції не рекомендовано досходове і післясходове внесення. Для післясходової боротьби з бур'янами у випадку кукурудзи дикамба займає 5 місце серед гербіцидів, що найбільш широко застосовуються для широколистих бур'янів. Однак незважаючи на те, що оптимальна норма для боротьби з широколистими бур'янами складає від 280 до 560 г/га (грам/гектар), середня доза внесення на кукурудзу становить 168 г/га, оскільки при більш високих дозах застосування і в деяких умовах 16 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 середовища дикамба може пошкоджувати кукурудзу. У системі обробки сільськогосподарських культур, що містить культурні рослини, що виявляють стійкість до дикамба, для виробників продукції можлива велика гнучкість у виборі часу і дози внесення дикамба. "Гліфосат" стосується N-фосфонометилгліцину і їх солей. Гліфосат є комерційно доступним у вигляді різних препаратів. Приклади таких препаратів гліфосату включають, але без обмеження, препарати, що продаються компанією Монсанто, такі як гербіциди ROUNDUP®, ROUNDUP® ULTRA, ROUNDUP® ULTRAMAX, ROUNDUP® CT, ROUNDUP® EXTRA, ROUNDUP® BIACTIVE, ROUNDUP® BIOFORCE, RODEO®, POLARIS®, SPARK® і ACCORD®, які всі містять гліфосат у вигляді його ізопропіламонійної солі, ROUNDUP® WEATHERMAX, що містить гліфосат у вигляді його калієвої солі; гербіциди ROUNDUP® DRY і RIVAL®, які містять гліфосат у вигляді його амонійної солі; ROUNDUP® GEOFORCE, який містить гліфосат у вигляді його натрієвої солі; і гербіцид TOUCHDOWN®, який містить гліфосат у вигляді солі триметилсульфонію. "Перша обробка" стосується внесення одного або декількох гербіцидів послідовно або у вигляді суміші, приготованої безпосередньо перед застосуванням, до висіву, під час висіву, до появи сходів або з використанням комбінації вказаних стадій. "Друга обробка" стосується внесення одного або декількох гербіцидів послідовно або у вигляді суміші, приготованої безпосередньо перед застосуванням, в резервуарі на ранній післясходовій стадії. "Третя обробка" стосується внесення одного або декількох гербіцидів послідовно або у вигляді суміші, приготованої безпосередньо перед застосуванням, на пізній післясходовій стадії. Вказані стадії для різних культур різні. Загалом, стадія стосується розвитку покрову культури, який впливає як на затемнення росту бур'яну, так і на можливість проходження обладнання для внесення через ряди культури. "Четверта обробка" стосується внесення одного або декількох гербіцидів послідовно або у вигляді суміші, приготованої безпосередньо перед застосуванням, на передзбиральній стадії. Передзбиральну стадію зазвичай визначають як стадію, коли культура і бур'яни ще зелені і ще ростуть до тієї точки, коли післясходові гербіциди всі ще можуть бути ефективними. "П'ята обробка" стосується внесення одного або декількох гербіцидів послідовно або у вигляді суміші, приготованої безпосередньо перед застосуванням, на післязбиральній стадії, коли культура видалена з поля. Така обробка може бути проведена осінню або весною, може являти собою обробку між періодами парування або обробку між висівами культур у випадку висівів двох культур. "Стійкий до гербіцидів бур'ян" визначають як біотип бур'яну, який більше не можна контролювати при використанні дози гербіциду, яку застосовували раніше для боротьби з таким бур'яном, і ознака передається потомству (успадковується). Необмежувальні приклади таких бур'янів наведені в таблиці 1. "Злісний бур'ян" стосується бур'янів, які важко контролювати. "Самосівна рослина" означає стійку до гербіциду культурну рослину, яка росте з насіння, що залишається після збору урожаю в грунті або на грунті з попереднього вегетаційного періоду. "Система обробки сільськогосподарських культур" стосується взаємодіючого поєднання культури, будь-якою стійкістю до гербіциду, культурою, що виявляється, і супроводжуючих варіантів гербіцидної обробки, застосовних на різних стадіях розвитку культури, збору урожаю культури. "Трансгенні" клітини і організми включають клітини і організми, які нормально не руйнують гербіцид, такий як дикамба, але які були трансформовані таким чином, що вони стають здатними руйнувати такий гербіцид і виявляють агрономічно корисні рівні стійкості до внесення гербіциду. 17 UA 101470 C2 Таблиця 1 Стійкі до гербіцидів бур'яни. Класифікація згідно з WSSA або HRAC Бур'яни, резистентні до інгібіторів АСС-ази (група 1 або А) Alopecurus myosuroides, Avenafatua, Avena sterilis, Avena sterilis ludoviciana, Brachiaria plantaginea, Bromus diandrus, Bromus rigidus, Cynosurus echinatus, Digitaria ciliaris, Digitaria ischaemum, Digitaria sanguinalis, Echinochloa colona, Echinochloa crus-galli, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Eleusine indica, Eriochloa punctata, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Leptochloa chinensis, Lolium multiflorum, Lolium perenne, Lolium persicum, Lolium rigidum, Phalaris minor, Phalaris paradoxa, Rottboellia exalta, Setaria faberi, Setaria viridis, Setaria viridis var. robusta-alba Schreiber, Setaria viridis var. robusta-purpurea, Snowdenia polystachea, Sorghum halepense, Sorghum Sudanese Бур'яни, резистентні до інгібіторів ALS (група 2 або В) Alisma plantago-aquatica, Alopecurus myosuroides, Amaranthus blitoides, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amaranthus palmeri, Amaranthus powellii, Amaranthus quitensis, Amaranthus retroflexus, Amaranthus rudis, Amaranthus tuberculatus, Ambrosia artemisiifolia, Ambrosia trifida, Ammania auriculata, Ammania coccinea, Anthemis cotula, Apera spica-venti, Avenafatua, Avena sterilis ludoviciana, Bacopa rotundifolia, Bidens pilosa, Bidens subalternans, Brassica tournefortii, Bromus tectorum, Camelina microcarpa, Chenopodium album, Chrysanthemum coronarium, Conyza bonariensis, Conyza Canadensis, Cuscuta campestris, Cyperus difformis, Damasonium minus, Descurainia Sophia, Digitaria sanguinalis, Diplotaxis tenuifolia, Echinochloa colona, Echinochloa crus-galli, Echium plantagineum, Elatine triandra var. pedicellata, Eleusine indica, Euphorbia heterophylla, Fallopia convolvulus, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Helianthus annuus, Hordeum glaucum, Iva xanthifolia, Ixophorus unisetus, Kochia scoparia, Lactuca serriola, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Limnophila sessiliflora, Lindernia dubia, Lindernia dubia var. major, Lindernia micrantha, Lindernia procumbens, Lolium multiflorum, Lolium perenne, Lolium rigidum, Mesembryanthemum crystallinum, Monochoria korsakowii, Monochoria vaginalis, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Parthenium hysterophorus, Pentzia suffruticosa, Phalaris minor, Raphanus raphanistrum, Raphanus sativus, Rapistrum rugosum, Rotala indica var. uliginosa, Sagittaria guyanensis, Sagittaria montevidensis, Sagittaria pygmaea, Salsola iberica, Scirpus juncoides var. ohwianus, Scirpus mucronatus, Setaria faberi, Setaria lutescens, Setaria viridis, Setaria viridis var. robusta-alba Schreiber, Sida spinosa, Sinapis arvensis, Sisymbrium orientale, Sisymbrium thellungii, Solanum ptycanthum, Sonchus asper, Sonchus oleraceus, Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Stellaria media, Thlaspi arvense, Xanthium strumarium Бур'яни, резистентні до ариламінопропіонових кислот (група 25 або Z (некласифіковані)) Avenafatua, Avena sterilis ludoviciana Бур'яни, резистентні до біпіридилію (група 22 або D) Amaranthus lividus, Arctotheca calendula, Bidens pilosa, Conyza bonariensis, Conyza Canadensis, Conyza sumatrensis, Crassocephalum crepidiodes, Cuphea carthagenenis, Eleusine indica, Epilobium adenocaulon, Erigeron philadelphicus, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Landoltia punctata, Lepidium virginicum, Lolium rigidum, Monochoria korsakowii, Poa annua, Solanum americanum, Solanum nigrum, Vulpia bromoides, Youngia japonica Бур'яни, резистентні до інгібіторів біосинтезу каротиноїдів (група 12 або F1) Hydrilla verticillata, Raphanus raphanistrum Бур'яни, резистентні до інгібіторів целюлози (група 20 і 21 або L) Echinochloa erecta Бур'яни, резистентні до хлорацетамідів і інших гербіцидів (група 15 або K3) Echinochloa crus-galli, Lolium rigidum Бур'яни, резистентні до динітроанілінів і інших гербіцидів (група 3 або K1) Alopecurus myosuroides, Amaranthus palmeri, Avenafatua, Echinochloa crus-galli, Eleusine indica, Fumaria densiflora, Lolium rigidum, Poa annua, Setaria viridis, Sorghum halepense Бур'яни, резистентні до гліцинів (група 9 або G) Amaranthus palmeri, Ambrosia artemisiifolia, Conyza bonariensis, Conyza Canadensis, Eleusine indica, Lolium multiflorum, Lolium rigidum, Plantago lanceolata Бур'яни, резистентні до інгібіторів мітозу (група 23 або K2) Lolium rigidum 18 UA 101470 C2 Бур'яни, резистентні до нітрилів і інших гербіцидів (група 6 або C3) Senecio vulgaris Бур'яни, резистентні до миш'якорганічних сполук (група 17 або Z (некласифіковані)) Xanthium strumarium Бур'яни, резистентні до інгібіторів фотосистеми II (група 5 або C1 (тип атразину)) Abutilon theophrasti, Alopecurus myosuroides, Amaranthus albus, Amaranthus blitoides, Amaranthus cruentus, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amaranthus palmeri, Amaranthus powellii, Amaranthus retroflexus, Amaranthus rudis, Ambrosia artemisiifolia, Arenaria serpyllifolia, Atriplex patula, Bidens tripartite, Brachypodium distachyon, Brassica campestris, Bromus tectorum, Capsella bursa-pastoris, Chamomilla suaveolens, Chenopodium album, Chenopodium ficifolium, Chenopodium hybridum, Chenopodium polyspermum, Chenopodium strictum var. Glaucophyllum, Chloris inflate, Conyza bonariensis, Conyza Canadensis, Crypsis schoenoides, Datura stramonium, Digitaria sanguinalis, Echinochloa crus-galli, Epilobium adenocaulon, Epilobium tetragonum, Fallopia convolvulus, Galinsoga ciliate, Kochia scoparia, Lolium rigidum, Lophochloa smyrnacea, Matricaria matricarioides, Panicum capillare, Panicum dichotomiflorum, Phalaris paradoxa, Plantago lagopus, Poa annua, Polygonum aviculare, Polygonum hydropiper, Polygonum lapathifolium, Polygonum pensylvanicum, Polygonum persicaria, Polypogon monspeliensis, Portulaca oleracea, Raphanus raphanistrum, Senecio vulgaris, Setaria faberi, Setaria glauca, Setaria verticillata, Setaria viridis, Setaria viridis var. Major, Sinapis arvensis, Solanum nigrum, Sonchus asper, Stellaria media, Urochloa panicoides, Urtica urens Бур'яни, резистентні до інгібіторів PPO (група 14 або Е) Amaranthus rudis, Ambrosia artemisiifolia, Euphorbia heterophylla Бур'яни, резистентні до піразолію (група Z (некласифіковані)) Avenafatua Бур'яни, резистентні до синтетичних ауксинів/ауксин-подібних гербіцидів (група 4 або О) Carduus nutans, Carduus pycnocephalus, Centaurea solstitialis, Cirsium arvense, Commelina diffusa, Convolvulus arvensis, Daucus carota, Digitaria ischaemum, Echinochloa colona, Echinochloa crus-galli, Echinochloa crus-pavonis, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Kochia scoparia, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Matricaria perforate, Papaver rhoeas, Ranunculus acris, Sinapis arvensis, Soliva sessilis, Sphenoclea zeylanica, Stellaria media Бур'яни, резистентні до тіокарбаматів і інших гербіцидів (група 8 або N) Avenafatua, Echinochloa crus-galli, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Lolium rigidum, Nassella trichotoma, Poa annua, Stipa neesiana Бур'яни, резистентні до триазолів, сечовин, ізоксазолідіонів (група 11 або F3) Agrostis stolonifera, Lolium rigidum, Poa annua, Polygonum aviculare Бур'яни, резистентні до сечовин і амідів (група 7 або C2) Alopecurus japonicus, Alopecurus myosuroides, Amaranthus powellii, Amaranthus retroflexus, Ambrosia artemisiifolia, Apera spica-venti, Beckmannia syzigachne, Bromus tectorum, Chenopodium album, Chloris inflate, Conyza canadensis, Echinochloa colona, Echinochloa crus-galli, Echinochloa erecta, Euphorbia heterophylla, Lolium multiflorum, Lolium rigidum, Phalaris minor, Poa annua, Portulaca oleracea, Senecio vulgaris Таблиця 2 Гербіциди, класифіковані за первинним місцем дії Група HRAC А Спосіб дії Інгібування ацетил-СоАкарбоксилази (АСС-ази) Хімічне сімейство Активний інгредієнт клодинафоппропаргіл цигалофопбутил диклофопметил Арилоксифеноксипропіонати феноксапроп-Р-етил "FOP" флузифоп-Р-бутил галоксифоп-R-метил пропахізафоп хізалофоп-Р-етил алоксидим Циклогександіони "DIM" бутроксидим (запропонований 19 Група WSSA 1 UA 101470 C2 Група HRAC В Спосіб дії Інгібування ацетолактатсинтази ALS (синтази ацетогідроксикислоти AHAS) Хімічне сімейство Сульфонілсечовини Імідазолінони Триазолопіримідини Піримідиніл(тіо)бензоати Сульфоніламінокарбонілтриазолінони C1 Інгібування фотосинтезу в фотосистемі II Триазини 20 Активний інгредієнт клефоксидим) клетодим циклоксидим сетоксидим тепралоксидин тралоксидим амідосульфурон азимсульфурон бенсульфурон-метил хлоримурон-етил хлорсульфурон циносульфурон циклосульфамурон етаметсульфурон-метил етоксисульфурон флазасульфурон флупірсульфурон-метилNa форамсульфурон галосульфурон-метил імазосульфурон йодсульфурон метсульфурон-метил нікосульфурон оксасульфурон примісульфурон-метил просульфурон піразосульфурон-етил римсульфурон сульфометурон-метил сульфосульфурон тіфенсульфурон-метил триасульфурон трибенурон-метил трифлоксисульфурон трифлусульфурон-метил тритосульфурон імазапік імазаметабунзметил імазамокс імазапір імазахін імазетапір клорансулам-метил диклосулам флорасулам флуметсулам метосулам біспірибак-Na пірибензоксим пірифталід піритіобак-Na піримінобак-метил флукарбазон-Na прокарбазон-Na аметрин атразин ціаназин Група WSSA 2 5 UA 101470 C2 Група HRAC Спосіб дії Хімічне сімейство Триазинони Триазолінон Урацили Піридазинони Фенілкарбамати C2 Інгібування фотосинтезу в фотосистемі II Сечовини Аміди C3 Інгібування фотосинтезу в фотосистемі II Нітрили Бензотіадіазинон Фенілпіридазини D Шунтування електронів фотосистеми I Е інгібування фотопорфіриногеноксидази Дифеніловий ефір (PPO) Біпіридилій 21 Активний інгредієнт десметрин диметаметрин прометон прометрин пропазин симазин симетрин тербуметон тербутилазин тербутрин триетазин гексазинон метамітрон метрибузин амікарбазон бромацил ленацил тербацил піразон=хлоридазон десмедифам фенмедифам хлорбромурон хлортолурон хлороксурон димефурон діурон етидимурон фенурон флуометурон (див. F3) ізопротурон ізоурон лінурон метабензтіазурон метобромурон метоксурон монолінурон небурон сидурон тебутиурон пропаніл пентанохлор бромфеноксим (також M) бромоксиніл (також група M) іоксиніл (також група M) бентазон піридат піридафол дикват паракват ацифлуорфен-Na біфенокс хлометоксифен флуороглікофен-етил фомесафен галосафен лактофен оксифлуорфен Група WSSA 7 6 22 14 UA 101470 C2 Група HRAC Спосіб дії Хімічне сімейство Фенілпіразоли N-фенілфталіміди Тіадіазоли Оксадіазоли Триазолінони Оксазолідиндіони Піримідиндіони Інші F1 Знебарвлення: Інгібування біосинтезу каротиноїдів на Піридазинони фітоендесатуразній стадії (PDS) Піридинкарбоксаміди Інші F2 Знебарвлення: Інгібування 4-гідроксифенілТрікетони піруватдіоксигенази (4HPPD) Піразоли G Н I K1 Інші Знебарвлення: Інгібування біосинтезу каротиноїдів Тріазоли (невідома мішень) Ізоксазолідинон Сечовини Дифеніловий ефір Інгібування синтази EPSP Інгібування глутамінсинтетази інгібування DHP (дигідроптероат)синтази Інгібування збирання мікротрубочок Гліцини Фосфінові кислоти Карбамати норфлуразон Фосфороамідати 22 12 дифлуфенікан пікоолінафен бефлубутамід флуридон флурохлоридон флуртамон ізоксахлортол ізоксафлутол бензофенап піразолинат піразоксифен бензобициклон амітрол (інгібування in vivo лікопенциклази) кломазон флуметурон (див. C2) аклоніфен гліфосат сульфосат флуфосинат-амоній біалафос=біланафос асулам Дінітроаніліни Група WSSA флуазолат пірафлуфен-етил цинідон-етил флуміоксазин флуміклорак-пентил флутіацет-метил тидіамін оксадіазон оксадіаргіл азафенідин карфентразон-етил сульфентразон пентоксазон бензфендізон бутафенацил піразогіл профлуазол мезотрион сулькотрион Ізоксазоли F3 Активний інгредієнт бенефін=бенфлуралін бутралін динітрамін еталфлуралін оризалін пендиметалін трифлуралін амипрофос-метил 28 11 13 9 10 18 3 UA 101470 C2 Група HRAC Спосіб дії Хімічне сімейство Піридини Бензаміди K2 K3 Бензолдикарбонові кислоти Інгібування мітозу/організація Карбамати мікротрубочок інгібування клітинного поділу (інгібування VLCFA; Хлорацетаміди див. примітки) Ацетаміди Оксіацетаміди Тетразоліноні Інші L Інгібування синтезу Нітрили клітинної стінки (целюлоза) Бензаміди Тріазолокарбоксаміди M Роз'єднання (руйнування мембран) N Інгібування синтезу ліпідів відсутність інгібування Тіокарбамати АСС-ази Дінітрофеноли Фосфородитіоати Бензофурани Хлоркарбонові кислоти 23 Активний інгредієнт бутамифос дитіопір тіазопір пропізаміл=пронамід тебутам DCPA=хлорталдиметил хлорпрофам профам карбетамід ацетохлор алахлор бутахлор диметахлор диметанамід метазахлор метолахлор петоксамід претилахлор пропахлор пропізохлор тенілхлор дифенамід напропамід напроанілід флуфенацет мефенацет фентразамід анілофос кафенстрол інданофан піперофос дихлобеніл хлортіамід ізоксабен Флупоксам DNOC динісеб динотерб бутилат циклоат димепіперат EPTC еспрокарб молінат орбенкарб пебулат просульфокарб тіобенкарб=бентіокарб тіокарбазил триалат вернолат бенсулід бенфуресат етофумесат TCA далапон флупропанат Група WSSA 3 23 15 20 21 24 8 26 UA 101470 C2 Група HRAC ПРО Спосіб дії Синтетичні ауксини (ауксин-подібні) R S  Інгібування транспорту ауксину … … … Z невідомий Р 5 10 Хімічне сімейство Активний інгредієнт хломепроп 2,4-D 2,4-DB Феноксикарбонові кислоти дихлорпроп=2,4-DP MCPA MCPB мекопроп=MCPP=CMPP хлорамбен дикамба Бензойні кислоти трикамба 2,3,6-TBA клопіралід флуроксипір Піридинкарбонові кислоти піклорам триклопір хінклорак Хінолінкарбонові кислоти (також група L) хінмерак Інші беназолін-етил Фталамати нафталам Семікарбазони дифлуфензопір-Na … … … … … … флампроп-M-метилАриламінопропіонові кислоти ізопропіл Піразолій дифензокват DSMA Миш'якоорганічні сполуки MSMA бромбутид Інші (хлор)флуренол цинметилін кумілурон дазомет димрон=даімурон метил-димурон=метилдимрон етобензанід фосамін метам оксазикломефон олеїнова кислота пеларгонова кислота пірибутикарб Група WSSA 4 19 25 8 17 27 Приклади Наступні приклади включені для ілюстрації варіантів здійснення даного винаходу. Фахівцям в даній галузі буде зрозуміло, що методики, розкриті в прикладах, які представлені нижче, являють собою способи, які, як виявлено автором винаходу, добре працюють при практичному здійсненні винаходу. Однак в світлі даного опису фахівцям в даній галузі потрібно розуміти, що можуть бути здійснені багато змін в конкретних варіантах здійснення, які описані, і при цьому все ще одержати подібний або схожий результат, не відступаючи від принципу, суті і обсягу винаходу. Більш конкретно, буде зрозуміло, що агенти, описані в даному описі, можуть бути замінені деякими агентами, які є спорідненими як хімічно, так і фізіологічно, при цьому досягаючи такі ж або схожих результатів. Всі такі схожі заміни і модифікації, очевидні для фахівців в даній галузі, як вважають, відповідають суті, обсягу і принципу винаходу, які визначені в прикладеній формулі винаходу. 24 UA 101470 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 Приклад 1 Системи обробки сільськогосподарських культур для боротьби з бур'янами У таблицях 3-5 наведений приклад одного варіанту здійснення даного винаходу, в якому культури, стійкі до гліфосату, дикамба, глюфосинату, 2,4-D або їх комбінації (I-X), використовують при супутніх гербіцидних обробках (з першою по п'яту) на різних стадіях росту і розвитку рослин для боротьби з бур'янами. у випадку сої стадії росту рослин можуть бути визначені таким чином: появу сходів позначають як стадію росту "VE", тоді як ранні післясходові стадії сої часто позначають "VC»-«V3", і пізні післясходові стадії сої позначають "V4»-«R2" (наприклад, McWilliams et al, 1999). "Передзбиральна стадія" зазвичай наступає після того, як соя стає фізіологічно зрілою, але перед збором врожаю, тоді як "післязбиральна стадія" наступає після збору врожаю. Тому "досходове" внесення гербіциду стосується внесення до появи сходів культури і бур'янів, до або після висіву. Для бавовнику часовий розподіл стадій росту і пов'язаного з ними внесення гербіцидів можна визначити таким чином: Досходова стадія: в будь-який час до появи сходів культури з метою боротьби з озимими і яровими бур'янами. Рання післясходова стадія: внесення, яке здійснюють з моменту появи сходів культури протягом стадій вегетативного росту, тобто аж до стадії ділянок "шпилькової головки". Пізня післясходова стадія: внесення, які проводять під час репродуктивної стадії росту бавовнику, тобто від стадії появи ділянок "шпилькової головки" аж до ініціація розкриття коробочок. Передзбиральна стадія: внесення, здійснювані в період від ініціації розкриття коробочок аж до збору врожаю. У більшості інструкцій на етикетках до продукту є заборона на застосування в межах декількох днів до збору врожаю. Наприклад, Roundup не можна вносити в межах 7 днів перед збором врожаю. Для інших продуктів таке предзбиральне обмеження може складати від 40 до 70 днів. Післязбиральна стадія: внесення, здійснювані після прибирання з метою боротьби з пізніми бур'янами, які можуть бути присутніми під час прибирання або з'являтися до настання зими. Фахівцеві в даній галузі буде зрозуміло, що немає обмежень відносно того, наскільки близькі внесення можуть бути проведені відносно появи сходів культури або прибирання культури. Однак деякі продукти можуть мати обмеження, вказані на етикетці, засновані на можливості пошкодження культури (наприклад, не застосовувати в межах 21 днів перед висівом) або через рівні хімічних речовин, що залишаються в насінні (наприклад, не застосовувати протягом 40 днів перед збором урожаю). Різні варіанти гербіцидів для кожної обробки вказані буквами А, В, С і т.д… Застосування стійких до гербіцидів культур, що супроводжують обробки на різних стадіях росту в результаті призводять до регулювання бур'янів, наявних в даний час стійких до гербіцидів бур'янів, злісних бур'янів, самосівних рослин і до мінімізації розвитку резистентних до гербіцидів бур'янів в майбутньому. Норми внесення гербіцидів наведені в таблицях 4 і 5 для сої і бавовнику, відповідно. Приклади гербіцидів для застосування на кукурудзі показані в таблиці 6. Для здійснення гербіцидних обробок використовують обладнання і способи, відомі в даній галузі. Таблиця 3 Обробки та різні варіанти, що пропонуються для боротьби з бур'янами в типових системах обробки сільськогосподарських культур I-XII згідно з даним винаходом. G-гліфосат, Glглюфосинат, Pre-досходовий гербіцид, D-дикамба, Gr-грамініцид, Di-2,4-D, Post-післясходовий гербіцид, P-паракват. Грамініцид не використовують у випадку кукурудзи, якщо кукурудза не має стійкість до класу гербіцидів, що використовуються для боротьби зі злаковими травами, таким як fops-гербіцид Обробка і час обробки Варіанти Перша (1), передпосівна, при посіві, досходова або їх комбінація A B C D E Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до гліфосату і дикамба та гліфосату дикамба глюфосинату 2,4-D глюфосинату глюфосинату I II III IV V VI Немає Немає Немає Немає Немає Немає Орання Орання Орання Орання Орання Орання G G G G G G Gl D Gl Gl D Di Pre P Pre Pre P P 25 UA 101470 C2 Обробка і час обробки Варіанти F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z AA AB AC AD AE AF AG AH AI AJ AK AL AM AN AO AP AQ AR AS AT AU AV AW Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до гліфосату і дикамба та гліфосату дикамба глюфосинату глюфосинату глюфосинату I II III IV V P Gl P P Gl G, Gl Pre G, Gl G, Gl Pre G, Pre G, D G, Pre G, Pre G, D G, P G, P G, P G, P G, P G, Gl, Pre G, Gl G, Gl, Pre G, Gl, Pre G, Gl G, Gl, P G, Pre G, Gl, P G, Gl, P G, Pre G, Gl, Pre, G, D, P G, Gl, Pre, P G, Gl, Pre, P G, D, P P G, Pre, P G, D, Gl G, Pre, P G, Pre, P G, D, Gl Gl, Pre G, D, Pre Gl, P G, P, Gl Gl, Pre, P G, P, Pre G, Gl, Pre, P Pre G, D, P, Gl G, D, P, Pre G, D, Gl, Pre G, P, Gl, Pre G, D, P, Gl, Pre D, P D, Gl D, Pre P, G1 P, Pre Gl, Pre D, P, Gl D, P, Pre D, Gl, Pre D, P, Gl, Pre P, Gl, Pre Gl, Pre Gl, Pre G, D, Pre Gl, P Gl, Pre, P Gl, P Gl, Pre, P G, P, Gl G, P, Pre Pre, P Pre, P G, Gl, Pre G, D, P, Gl G, D, P, Pre G, D, Gl, Pre G, P, Gl, Pre G, D, P, Gl, Pre D, P D, Gl D, Pre P, Gl P, Pre Gl, Pre D, P, Gl D, P, Pre D, Gl, Pre D, P, Gl, Pre P, Gl, Pre 26 Стійкі до 2,4-D VI Gl Pre G, Di G, P G, Gl G, Pre G, Di, P G, Di, Gl G, Di, Pre G, P, Gl G, P, Pre G, Gl, Pre G, Di, P, Gl G, Di, P, Pre G, Di, Gl, Pre G, P, Gl, Pre G, Di, P, Gl, Pre Di, P Di, Gl Di, Pre P, G1 P, Pre Gl, Pre Di, P, Gl Di, P, Pre Di, Gl, Pre Di, P, Gl, Pre UA 101470 C2 Обробка і час обробки Варіанти Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до гліфосату і дикамба та гліфосату дикамба глюфосинату 2,4-D глюфосинату глюфосинату I II III IV V VI AX AY AZ BA BB BC BD BE BF BG BH BI BJ BK BL BM Друга (2) рання післясходова A B C D E F G G D Gr Gr Post Post G, Gr D, Gr G, Post D, Post Gr, Post Gr, Post G, Gr, D, Gr, Post Post Gl Gr Post Gl, Gr Gl, Post Gr, Post G Gl Gr Post G, Gl G, Gr D Gl Gr Post D, Gl D, Gr Gl, Gr, Post G, Post D, Post G, Gl, Gr G, Gl, Post G, Gr, Post G, Gr, Gl, Post Gl, Gr Gl, Post Gr, Post Gr, Gl, Post D, Gl, Gr D, Gl, Post D, Gr, Post D, Gr, Gl, Post Gl, Gr Gl, Post Gr, Post Gr, Gl, Post H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z AA AB AC AD AE AF AG AH AI 27 Di Gr Post Di, Gr Di, Post Gr, Post Di, Gr, Post UA 101470 C2 Обробка і час обробки Варіанти Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до Стійкі до гліфосату і дикамба та гліфосату дикамба глюфосинату 2,4-D глюфосинату глюфосинату I II III IV V VI AJ AK AL AM AN AO AP AQ AR AS AT AU AV AW AX AY AZ BA BB BC BD BE BF BG BH BI BJ BK Третя (3), пізня післясходова Четверта (4), передзбиральна A-BK A B C D E F G H I J K L M N O Такі ж Такі ж Такі ж Такі ж Такі ж Такі ж варіанти, варіанти, варіанти, варіанти, як варіанти, як варіанти, як як для як для як для для другої для другої для другої другої другої другої обробки обробки обробки обробки обробки обробки G D Di Gl Post G, D G, Di G, G1 G, Post G, D, Di G, D, Gl G G D D Di Di Gl Gl Post Post G, D G, D G, Di G, Di G, Gl G, G1 G, Post G, Post G, D, Di G, D, Di G, D, Gl G, D, Gl G, D, G, D, Post G, D, Post Post G, Di, Gl G, Di, Gl G, Di, Gl G, Di, G, Di, G, Di, Post Post Post G, G1, G, Gl, G, G1, Post Post Post 28 G D Di Gl Post G, D G, Di G, Gl G, Post G, D, Di G, D, Gl G, D, Post G, Di, Gl G, Di, Post G, Gl, Post G D Di Gl Post G, D G, Di G, G1 G, Post G, D, Di G, D, Gl G D Di Gl Post G, D G, Di G, Gl G, Post G, D, Di G, D, Gl G, D, G, D, Post Post G, Di, Gl G, Di, Gl G, Di, G, Di, Post Post G, Gl, G, G1, Post Post