Синергічна фунгіцидна комбінація

Реферат: Заявляються композиції та способи застосування комбінацій синергічно ефективних кількостей фолпету та епоксиконазолу. UA 111714 C2 (12) UA 111714 C2 UA 111714 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відомий рівень техніки Даний винахід стосується загалом синергічно ефективної комбінації, що містить, як активні компоненти, фолпет (І) та епоксиконазол (II), способу боротьби з фітопатогенними грибами з використанням комбінації фолпету (І) та епоксиконазолу (II), а також композицій, що містять цю комбінацію у вигляді суміші, та наборів, що включають цю комбінацію. Фталімідне похідне N-(трихлорметансульфеніл)фталімід, фолпет, є добре відомим захисним фунгіцидом для листя, розкритим у патентах США №№ 2553770; 2553771 та 2553776. Фолпет був уперше зареєстрований як пестицид у США в 1984 р. Він використовується, поміж іншим, для боротьби з несправжньою борошнистою росою винограду, кокомікозною плямистістю вишні, борошнистою росою рози, чорною плямистістю рози та паршою яблуні, і застосовується для обробки ягідних культур, квітів, декоративних рослин, фруктів та овочів, і для обробки насіння та грядок. Фолпет також використовується як фунгіцид у фарбах та пластиках, і для обробки внутрішніх та зовнішніх поверхонь елементів будівельних конструкцій. Триазольне похідне (2RS,3SR)-1-[3-(2-хлорфеніл)-2,3-епокси-2-(4-фторфеніл)пропіл]-1Н1,2,4-триазол, епоксиконазол, його синтез та його протигрибкові властивості були розкриті у патентах США №№ 4464381 та 4906652. Епоксиконазол є контактним та системним фунгіцидом широкого спектра дії, використовуваним для боротьби зі справжньою борошнистою росою, бурою та жовтою іржою злаків, Septoria tritici та Septoria nodorum озимої та ярової пшениці та тритикале; справжньою борошнистою росою, Rhyncosporium, сітчастою плямистістю і бурою та жовтою іржою озимого та ярового ячменю; справжньою борошнистою росою, Rhyncosporium, сітчастою плямистістю і бурою та жовтою іржою жита; та справжньою борошнистою росою вівса. Комбінації сільськогосподарських фунгіцидів типово використовуються для розширення спектра активності, мінімізації доз використовуваних хімікатів та зниження вартості обробки завдяки адитивному ефекту. Комбінації сільськогосподарських фунгіцидів можуть бути також використані для уникнення або зменшення ризику розвитку резистентності. У деяких випадках, резистентність можна подолати шляхом використання комбінації фунгіцидів. Патенти США №№ 4464381 та 4906652 додатково розкривають перелік фунгіцидів, з якими може бути скомбінований епоксиконазол, поміж інших, з фолпетом, але не містять припущень щодо будь-якого синергізму. Суть винаходу Даний винахід передбачає композиції та способи застосування комбінацій синергічно ефективних кількостей фолпету (І) та епоксиконазолу (II). У певних варіантах втілення передбачаються фунгіцидні комбінації, що містять фолпет (І) та епоксиконазол (II) у вигляді суміші в синергічно ефективних кількостях. В додаткових варіантах втілення передбачаються способи боротьби з фітопатогенними грибами, у яких фітопатогенні гриби, їх місцеперебування, рослини, грунт або насіння, що мають бути захищені від грибкового ураження, обробляють ефективною кількістю комбінації, наприклад, у вигляді суміші, як описано вище. У споріднених варіантах втілення передбачаються способи боротьби зі шкідливими фітопатогенними грибами, у яких один чи декілька шкідливих грибів, їх місцеперебування, рослини, грунт або насіння, що потребують захисту, обробляють одночасно або по черзі в будьякому порядку, першою кількістю фолпету та другою кількістю епоксиконазолу; причому перша та друга кількості є синергічно ефективними. Даний винахід також передбачає використання комбінації фолпету (І) та епоксиконазолу (II), як описано вище, для приготування композиції або набору, придатних для боротьби зі шкідливими грибами. Додаткові варіанти втілення даного винаходу передбачають фунгіцидну композицію або набор, що містять фунгіцидну комбінацію, як описано вище, та носій. Ще інші додаткові варіанти втілення передбачають насіння, оброблене фунгіцидною комбінацією, як описано вище. Детальний опис Заявник несподівано знайшов, що комбінована обробка з використанням фолпету та епоксиконазолу, які характеризуються різними механізмами дії, виявляє значний синергічний ефект, дозволяючи досягнути вищої фунгіцидної активності, ніж можна було б передбачити на основі активностей кожного з цих фунгіцидів. Додатковою перевагою такої комбінації є те, що вона демонструє більш широку область застосування та дозволяє зменшити дозування фолпету та епоксиконазолу, тим самим забезпечуючи ефективну боротьбу з численними хворобами, що можуть зашкодити рослинам (або фруктам чи їх насінню), і викликаючи великий економічний інтерес. 1 UA 111714 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Типові приклади рослин включають, наприклад, овочеві рослини, бобові рослини, зернові рослини, кормові рослини, трав'яні рослини, волокнисті рослини, олійні рослини, польові рослини, садові рослини, тепличні рослини та кімнатні рослини. Зернові рослини включають, наприклад, пшеницю (наприклад, тверду пшеницю або м'яку пшеницю), рис, кукурудзу, ячмінь, овес, тритикале та жито. Композиції, набори та способи, описані тут, відрізняються чудовою активністю проти широкого спектра фітопатогенних грибів, що належать до таких класів: Ascomycetes (наприклад, Venturia, Podosphaera, Erysiphe, Monilinia, Uncinula, Aureobasidium, Sclerophoma), Basidiomycetes (наприклад, Hemileia, Rhizoctonia, Puccinia, Coniophora, Serpula, Poria, Uromyces, Gloeophyllum, Lentinus, Coriolus, Irpex) та незавершені гриби (Fungi imperfecti) (наприклад, Botrytis, Helminthosporium, Rhynchosporium, Fusarium, Septoria, Cercospora, Alternaria, Pyricularia, Penocillium, Geotrichum). Такі композиції, набори та способи є особливо придатними для боротьби з фітопатогенними грибами зернових рослин та їх насіння, такими як асколокулярний аскоміцет (ascomycetous pseudothecial fungus) Mycosphaerella graminicola (anamorph Septoria tritici); у певних варіантах втілення така боротьба здійснюється шляхом використання низьких застосовуваних доз з нанесенням мінімальної загальної кількості активних сполук, при збереженні достатньої активності проти фітопатогенних грибів. Активні компоненти фолпет (І) та епоксиконазол (II) можуть бути нанесені у формі суміші, наприклад, у вигляді готової до застосування композиції, бакової суміші, або можуть бути нанесені роздільно, в будь-якому порядку. У певних варіантах втілення, сполуки І та II використовують у ваговому співвідношенні фолпету (І) до епоксиконазолу (II) в інтервалі значень від 1:1 до 20:1, і в додаткових варіантах втілення сполуки І та II використовують у ваговому співвідношенні фолпету (І) до епоксиконазолу (II) в інтервалі значень від 1:1 до 10:1. Норми застосування суміші можуть змінюватися в залежності від бажаного ефекту; зокрема, на посівних площах сільськогосподарських культур, такі норми можуть змінюватися, наприклад, від 25 до 2000 грам на гектар (г/га), від 50 до 1500 г/га, або від 100 до 1000 г/га. При роздільному нанесенні активних компонентів норми застосування для сполуки І типово змінюються в межах від 10 до 1500 г/га, від 50 до 1500 г/га, або від 100 до 1000 г/га; і норми застосування для сполуки II типово змінюються в межах від 10 до 500 г/га, від 10 до 300 г/га, або від 10 до 150 г/га. При обробці насіння, норми застосування суміші або окремих компонентів звичайно змінюються в межах від 1 до 1000 г/100 кг насіння, від 1 до 200 г/100 кг насіння, або від 5 до 100 г/100 кг насіння. Для боротьби зі шкідливими грибами, що є патогенними для рослин, зокрема зернових рослин, роздільне або спільне нанесення сполуки І та сполуки II або сумішей сполуки І та сполуки II здійснюють будь-яким придатним методом, відомим фахівцям, такими як обприскування або обпилення насіння, рослин або ґрунту перед чи після висівання рослин, або перед чи після сходження рослин. Винахід також передбачає фунгіцидні композиції, що містять як активні компоненти фолпет (І) та епоксиконазол (II) у вигляді суміші. Такі композиції можуть включати, на додаток до вищезгаданих активних компонентів, один чи декілька додаткових активних та/або неактивних інгредієнтів. Типові приклади активних інгредієнтів включають, наприклад, інші мікробіоциди, такі як фунгіциди, інсектициди, акарициди, нематоциди, гербіциди, регулятори росту рослин та/або добрива. Неактивні інгредієнти включають, наприклад, носії, поверхнево-активні речовини та інші допоміжні речовини, що сприяють нанесенню, які звичайно використовують у технології виготовлення композицій, а також компоненти, які сприяють зберіганню композицій. Придатні носії та ад'юванти можуть бути твердими або рідкими і включають речовини, звичайно застосовувані у технології виготовлення композицій, наприклад, природні або штучні мінеральні речовини, розчинники, диспергенти, змочувальні агенти, речовини для надання липкості, загусники, зв'язуючі або добрива. Композиції можуть бути складені у будь-якій звичайній формі, такій як розчини, емульсії, суспензії, дусти, порошки, пасти, гранули, або у формі будь-якої іншої технічно можливої композиції. Композиції готують відомими способами, наприклад, шляхом перемішування до гомогенного стану та/або помелу активних інгредієнтів з інертними наповнювачами, наприклад, рідкими та твердими носіями і, у певних випадках, поверхнево-активними сполуками. Загалом, передбачені тут композиції містять від 0,01 до 90 % мас. активного агента, від 0,01 до 30 % сільськогосподарсько прийнятної поверхнево-активної речовини та від 10 до 99,99 % твердих або рідких інгредієнтів та ад'ювантів, інертних по відношенню до композиції. Концентровані форми композицій звичайно містять від приблизно 2 до 80 % мас. (наприклад, 2 UA 111714 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 від приблизно 10 до 50 %) активного агента. Комерційні продукти будуть краще виготовлені у вигляді концентратів; кінцевий користувач буде звичайно застосовувати розведені композиції. В іншому варіанті втілення, винахід також передбачає набор, який включає фунгіцидні композиції, що містять як окремі активні компоненти фолпет (І) та епоксиконазол (II). Такі композиції можуть включати, на додаток до вищезгаданих активних компонентів, один чи декілька додаткових активних та/або неактивних інгредієнтів, як описано вище. Композиції для набору можуть бути складені у вигляді будь-якої звичайної форми, як описано вище, та виготовлені, як описано вище. Таким чином, набор може включати перший контейнер, що містить фолпет (І) та носій, і другий контейнер, що містить епоксиконазол (II) та носій. Загалом, кожна з композицій набору містить від 0,01 до 90 % мас. активного агента, від 0,01 до 30 % сільськогосподарсько прийнятної поверхнево-активної речовини та від 10 до 99,99 % твердих або рідких інгредієнтів та ад'ювантів, інертних по відношенню до композиції. Концентровані форми композицій звичайно містять від приблизно 2 до 80 % мас. (наприклад, від приблизно 10 до 50 %) активного агента. Комерційні продукти будуть краще виготовлені як концентрати; кінцевий користувач буде звичайно застосовувати розведені композиції. Набор може також включати інструкції щодо застосування. Як відзначено вище, композиції, набори та способи, описані тут, демонструють синергічний ефект. Синергічний ефект існує, якщо ефект дії комбінації активних компонентів перевищує суму ефектів дії кожного з компонентів поодинці. Отже, синергічно ефективна кількість (або ефективна кількість синергічної суміші чи комбінації) фунгіцидної суміші чи фунгіцидної комбінації є кількістю, яка виявляє більшу фунгіцидну активність, ніж сума фунгіцидних активностей індивідуальних компонентів. Метод Уодлі (Wadley) є добре відомим методом визначення існування синергії. Згідно з методом Уодлі, синергічну активність визначають з кривих залежності доза-відповідь. У цьому методі, ефективність активного інгредієнта ("а.і.") визначають шляхом порівняння ступеня грибкового ураження оброблених рослин з необробленими, аналогічно інокульованими та інкубованими контрольними рослинами. Випробування кожного а.і. звичайно проводять для множини (наприклад, 6) концентрацій і будують криві доза-відповідь. Криві доза-відповідь використовують для визначення значень ЕС50 (тобто, ефективної концентрації а.і., що забезпечує 50 % пригнічення хвороби) індивідуальних сполук, а також комбінацій (ЕС50спостережувана). Експериментально знайдені значення для суміші з даним ваговим співвідношенням порівнюють зі значеннями, які були б отримані при наявності лише комплементарного ефекту для компонентів (ЕС50 (А+В)очікувана). Величину ЕС50 (А+В)очікувана звичайно обчислюють відповідно до Уодлі (Levi et al., ЕРРО- Bulletin 16, 1986, 651-657) або (Wadley, F.Μ., U.S. Dep. Agric., Agric. Res. Adm., Bur. Entomol. and Plant Quar. ΈΤ-223, 1945, 8) у такий спосіб: ЕС50 (А+В)очікувана = (а+b) / [(а/ЕС50 (А)спостережувана) + b/EC50 (В)спостережувана)], де а та b є ваговими співвідношеннями сполук А та В у суміші, а індекси (А), (В) та (А+В) стосуються спостережуваних значень ЕС50 для сполук А, В або їх суміші А+В. Співвідношення ЕС50 (А+В)очікувана /ЕС50 (А+В)спостережувана виражає коефіцієнт рівня взаємодії (R). Характер взаємодії, що існує між використовуваними фунгіцидами, використовуваними у комбінації, визначений за формулою Уодлі, представлений нижче у Таблиці 1 (Ulrich Gisi, Phytopathology, 86, 1996, 1273-1279). У контексті даного опису винаходу, для визначення синергічного ефекту звичайно використовується біологічна відповідь. Таблиця 1 Рівень 50 взаємодії 1,0 1,5 (R) Математичне визначення Антагоністичний ефект Адитивний ефект Синергічний ефект Біологічна відповідь Антагоністичний ефект Адитивний ефект Синергічний ефект Далі будуть детально описані один чи декілька варіантів втілення даного винаходу з посиланнями на наступні приклади. Однак, ці приклади не повинні обмежувати мету та обсяг даного опису. Приклади 3 UA 111714 C2 5 10 15 20 25 30 35 Ефективність проти Mycosphaerella graminicola Штам, використаний у цих дослідженнях, є еталонним штамом Mg Ref1, сприйнятливим до дії фунгіцидів типу Qol (інгібітори зовнішнього хінон-зв'язуючого сайта) та DMI (інгібітор деметилювання). Цей штам був виділений з листя інфікованої пшениці у Великобританії. Приготування інокуляту Mycosphaerella graminicola Пікноспори цього штаму М. graminicola переносять стерильним шпателем на агарове середовище із дріжджовим екстрактом Maly ("MYE") та інкубують при 19 °C у темряві. Після 10 днів інкубації, пікноспори цього штаму М. graminicola зішкрібають стерильним скальпелем з поверхні середовища MYE та переносять у пробірку Еппендорфа на 1,5 мл, що містить 1 мл 2кратно концентрованого рідкого глюкозо-бактопептонного середовища Glucose-Bacto Peptone 4 (2GBP). Суспензію пікноспор цього штаму доводять до 2×10 спор/мл у 2GBP рідкому середовищі. In vitro оцінка рівня чутливості штамів М. graminicola до епоксиконазолу та фолпету при їх використанні поодинці або у вигляді суміші Рідке бактопептон-глюкозне середовище ("BPG") автоклавують протягом 30 хвилин при 120 °C, а потім залишають відстоюватися при кімнатній температурі. Додають до стерильної дистильованої води фолпет, епоксиконазол, або суміш епоксиконазолу та фолпету у кожному з таких вагових співвідношень (епоксиконазол до фолпету): 1:10, 1:7,5 та 1:1. Кількості кожного компонента наведені у таблиці нижче. Загальна кінцева концентрація активного інгредієнта (тобто сума концентрацій активних інгредієнтів) становила: 0, 0,00256, 0,0128, 0,064, 0,32, 1,6, 8,0 або 40 мкг а.і./мл. Після гомогенізації, 100 мкл кожного розчину додають в лунки 96-лункового мікротитрувального планшета, при використанні як контролю стерильної дистильованої води без фунгіциду. Потім, в 4 кожну лунку висівають 100 мкл суспензії пікноспор (2×10 пікноспор/мл), приготовленої в 2BPG рідкому середовищі. Для кожного досліджуваного співвідношення фунгіцидів та концентрації проводять випробування з 6 паралельними дослідами (6 рядків на штам). Мікротитрувальні планшети потім інкубують у темряві при 19 °C протягом 7 днів. Ступінь росту міцелію у рідкому середовищі оцінюють шляхом вимірювання оптичної густини лунок, що містять суспензії спор та зазначені концентрації фунгіциду. Виміри проводять у дні 0 та 7 за допомогою планшет-рідера Biotek на довжині хвилі 405 нм, і використовують прикладну програму XLStat-Dose (Addinsoft) для реєстрації та обробки даних. Потім визначають середнє, а також 95 %-ні довірчі інтервали нижчого та вищого значень ЕС50 для відповіді штаму Mg Ref 1 Μ. graminicola на кожен фунгіцид (використовувані поодинці або у суміші). Для визначення ЕС50 використовують криві доза-відповідь. Взаємодії фунгіцидів у суміші обчислюють відповідно до Уодлі (Wadley) (як описано вище). Результати наведені далі у Таблиці 2. Таблиця 2 Чутливість (ЕС50, мкг а.і./мл) штаму Mg Ref 1 Μ. graminicola до епоксиконазолу та фолпету, використовуваних поодинці та у суміші Епоксиконазол (мкг/мл) 0 50 25 12,5 50 25 12,5 50 25 40 Фолпет (мкг/мл) 0 500 250 125 375 188 94 50 25 Співвідношення ЕС50(ов) ЕС50(EХ) R (рівень взаємодії) 1:10 1:10 1:10 1:7,5 1:7,5 1:7,5 1:1 1:1 0,01 2,39 0,08 0,12 0,08 0,09 0,09 0,08 0,02 0,02 0,14 0,14 0,14 0,11 0,11 0,11 0,03 0,03 1,76 1,14 1,61 1,19 1,19 1,42 1,29 1,18 Ці результати демонструють, що епоксиконазол та фолпет, у різноманітних концентраціях та вагових співвідношеннях, вказаних вище, виявляють синергічний ефект проти М. graminicola. Цей письмовий опис використовує приклади для розкриття винаходу, включаючи кращий спосіб втілення, а також для надання змоги будь-якому кваліфікованому фахівцю реалізувати 4 UA 111714 C2 5 винахід включно з виготовленням та використанням будь-яких приладів або систем та здійсненням будь-яких передбачених способів. Патентований обсяг винаходу визначається формулою винаходу і може включати інші приклади, які може уявити собі кваліфікований фахівець. Передбачається, що такі інші приклади входять до обсягу формули винаходу, якщо вони мають структурні елементи, які не відрізняються від словесного викладу формули винаходу, або якщо вони включають еквівалентні структурні елементи з несуттєвими відмінностями від формули винаходу. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 10 15 20 25 30 35 40 1. Фунгіцидна комбінація, що містить фолпет (І) та епоксиконазол (II) у синергічно ефективній кількості. 2. Фунгіцидна комбінація за п. 1, у якій вагове співвідношення фолпету (І) до епоксиконазолу (II) складає від 1:1 до 10:1. 3. Спосіб боротьби з фітопатогенними грибами, у якому гриби, їх місцеперебування, рослини, ґрунт або насіння, що мають бути захищені від грибкового ураження, обробляють ефективною кількістю фунгіцидної комбінації за п. 1. 4. Спосіб за п. 3, у якому проводять боротьбу з фітопатогенними грибами Mycosphaerella graminicola. 5. Спосіб за п. 3, у якому фолпет (І) та епоксиконазол (II) фунгіцидної комбінації за п. 1 наносять у вигляді суміші або окремо. 6. Спосіб за п. 5, у якому фолпет (І) та епоксиконазол (II) фунгіцидної комбінації за п. 1 наносять у вигляді готової до застосування композиції суміші або у вигляді бакової суміші. 7. Спосіб за п. 3, у якому фунгіцидну комбінацію, що містить фолпет (І) та епоксиконазол (II) за п. 1, наносять у вигляді суміші в кількості від 25 до 2000 г/га. 8. Спосіб за п. 3, у якому фунгіцидну комбінацію, що містить фолпет (І) та епоксиконазол (II) за п. 1, наносять роздільно, в будь-якому порядку, у кількості від 10 до 1500 г/га фолпету (І) та від 10 до 500 г/га епоксиконазолу (II). 9. Спосіб за п. 3, у якому фунгіцидну комбінацію фолпету (І) та епоксиконазолу (II) за п. 1 наносять у кількості від 1 до 1000 г на 100 кг насіння, роздільно або у вигляді суміші. 10. Застосування комбінації фолпету (І) та епоксиконазолу (II) за п. 1 для приготування композиції, придатної для боротьби зі шкідливими грибами, у якому фолпет (І) та епоксиконазол (II) знаходяться у суміші. 11. Фунгіцидна композиція, що містить комбінацію фолпету (І) та епоксиконазолу (II) за п. 1 у вигляді суміші та носій. 12. Насіння, що містить комбінацію фолпету (І) та епоксиконазолу (II) за п. 1. 13. Насіння, що містить фунгіцидну композицію за п. 11. 14. Спосіб боротьби з фітопатогенними грибами, у якому один чи декілька шкідливих грибів, їх місцеперебування, рослини, ґрунт або насіння, що потребують захисту, обробляють одночасно або по черзі в будь-якому порядку, першою кількістю фолпету; і другою кількістю епоксиконазолу; де перша та друга кількості є синергічно ефективними. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5