Спосіб моделювання гранулематозного запалення у щурів

Реферат: Спосіб моделювання гранулематозного запалення у щурів включає одноразове введення у легені щурів суспензії часточок SiO(2) з розрахунку 10 мг на 100 г маси тіла в 0,3 мл фізіологічного розчину, крім того суспензія часточок SiO(2) вводиться трансторакально. UA 79409 U (12) UA 79409 U UA 79409 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до пульмонології, і може бути застосована для експериментального відтворення гранулематозного запалення (ГЗ) з метою перевірки гіпотез, ефективності лікарських засобів, визначення механізмів розвитку саркоїдозу та інших хвороб, в основі патогенезу яких лежить запалення з утворенням гранульом. Відомий спосіб моделювання гранулематозного запалення базується на використанні вакцини БЦЖ для ініціації утворення в легеневій тканині епітеліоїдно-клітинних гранульом [Makarova O.V. Imunomorfology of granuloma-tous inflammation with Th-1 and Th-2 types of an immune response / O.V. Makarova, L.P. Mikhailova // Arkh. Patol.-2008. - Vol. 70. - № 6. - P. 48-53.]. Недоліком цього способу є використання інфекційного збудника для моделювання гранулематозного запалення. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб моделювання гранулематозу у щурів шляхом внутрішньовенного введення SiO(2) [Makarova O.P. Lipid peroxidation in the liver and lungs in SiO(2)-induced granu-lomatosis / O.P. Makarova, M.A. Saperova, V.A. Skurupiy // Bull. Exp. Biol. Med.-2010. - Vol. 149. - № 6. - P. 702-705.]. Цей спосіб вибраний нами як прототип. Однак суттєвим недоліком цього способу є відсутність топічного введення препарату в легені піддослідних тварин. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб моделювання гранулематозного запалення у щурів шляхом трансторакального введення суспензії часточок SiO(2). Поставлена задача вирішується застосуванням у способі одноразового введення у легені щурів суспензії часточок SiO(2) з розрахунку 10 мг на 100 г маси тіла в 0,3 мл фізіологічного розчину, згідно з корисною моделлю, суспензія часточок SiO(2) вводиться трансторакально. Запропонований спосіб здійснюється наступним чином: загальна тривалість експерименту склала 8 тижнів. Щурам одноразово трансторакально вводилась суспензія часточок SiO(2) з розрахунку 10 мг на 100 г маси тіла в 0,3 мл фізіологічного розчину. Ефективність моделювання гранулематозного запалення у щурів була доведена у клінічному дослідженні. У дослідження включено 72 статевозрілих щури лінії Вістар масою 256,8 (228,2; 284,6) грамів та віком 7,2 (6,7; 7,5) місяці. З 48 щурів сформували чотири дослідницькі групи по 12 особин в кожній. Одна група щурів, у яких моделювали ГЗ, знаходилась без лікування. Інші дослідницькі групи тварин з експериментальною патологією розподілені з урахуванням отримуваного лікування - дексаметазон, глюкозаміну сульфат чи комбінація імунофану та гіалуронідази. Контрольну групу склали 24 щури, яких розділили на 4 групи. У частини щурів контрольної групи не застосовували ніяких лікарських засобів. Ряд тварин без експериментальної патології, в залежності від групи, отримували один із перелічених варіантів лікування: дексаметазон, глюкозаміну сульфат, комбінацію імунофану та гіалуронідази. Режим введення та додавання препаратів: дексаметазон (KRKA, Словенія) по 0,08 мг/кг, в/м, через 2 дні; глюкозаміну сульфат (Дона (Rottapharm Ltd." та "Sigmar S.r.l." для "Rottapharm S.r.l.", Ірландія/Італія)) по 5,33 мг/кг, в/м, через 2 дні; комбінація імунофану (Біонокс (Росія Москва)) по 0,67 мкг/кг, в/м та гіалуронідази (Лідаза-Біофарма, ЗАТ (Україна, Київ)) по 0,85 Од/кг в/м, через 2 дні. Всі вищевказані лікарські препарати на момент їх використанні у дослідженні мали державну реєстрацію та повний пакет дозвільних документів відповідно до чинного законодавства України. Тривалість лікування склала від 4 до 8 тижнів в окремих групах. Щурам проведено комплексне клініко-лабораторне, морфологічне, макроскопічне обстеження. Вилучені від експериментальних тварин тканини підлягали підготовці до світлової мікроскопії за загально прийнятою методикою [Морфологічні зміни серця старих щурів при тривалому введенні активаторів КАТФ-каналів (діазоксиду та його аналогів) К. В. Тарасова, В. Г. Шевчук, О. В. Григорук [та ін.] // Пробл. старения и долголетия. - 2011. - Т. 20. - № 4. - С. 381-392.]. Препарати фарбували за допомого гематоксиліну та еозину. Аналіз макро- та мікроскопічних змін легень щурів проводили на 4-му та 8-му тижнях. На основі результатів макро- та мікроскопічного дослідження було виокремлено ряд основних морфологічних змін у легенях щурів з експериментальним моделюванням гранулематозного запалення: гіперінфляція (підвищена повітряність легеневої тканини) (див. фіг. 2), емфізематозні були (див. фіг. 3), емфізема (див. фіг. 5),запальні зміни в інтерстиції легень (див. фіг. 6), запальні зміни у бронхах (див. фіг. 7) порівняно з макро- (див. фіг. 1) та мікроскопічними (див. фіг. 4) ознаками інтактних щурів контрольної групи. У щурів з експериментальною моделлю ГЗ превалювала гіперінфляція (підвищена повітряність легеневої тканини) та виявлена за допомогою світлової мікроскопії емфізема легень і запальні зміни в інтерстиції легень, а також осередки формування гранульом. 1 UA 79409 U 5 10 15 20 Серед щурів контрольної групи щурів проведено комплексну оцінку стану легеневої тканини (див. фіг. 8). У тварин контрольної групи значимого рівня аномальних макро- та мікроскопічних змін не спостерігалось (див. фіг. 8). Групи між собою статистичних відмінностей не мали. Отримані результати дають можливість говорити про відсутність пневмотоксичного ефекту у використаних лікарських препаратів та дозволяють використовувати ці дані як "еталон норми" при порівнянні з тваринами, у яких штучно викликали ГЗ. Досліджено динаміку морфологічних змін у легенях тварин з ГЗ порівняно з інтактними щурами (див. фіг. 9). У 83 % (10/12) щурів, яким штучно викликали гранулематозне запалення у легенях шляхом трансторакального введення суспензії часточок SiO(2) і не отримували лікування, були виявлені характерні морфологічні ознаки гранулематозного запалення. Сумарно, частота реєстрації патологічних змін у легенях експериментальних тварин значимо (довірчий інтервал 95 % для відношення шансів 22,00 (1,87; 594,34) та відносного ризику 4,00 (1,85; 8,65); точний критерій Фішера, р=0,0032) відрізнялась від інтактних щурів контрольної групи. Значимих відмінностей за морфологічних змін у легеневій тканині між групами щурів з моделлю ГЗ на 4-му та 8-му тижнях експерименту знайдено не було (р=0,82). Також варто відмітити, що у щурів з ініційованим ГЗ спостерігається прогредієнтний перебіг запалення в інтестиції легень, який асоціюється зі зростанням рівня гіперінфляції та емфіземи. Комплексна оцінка морфологічних змін легень щурів з експериментальним моделюванням ГЗ вказує на високий рівень відтворюваності запланованої патології серед тварин експериментальних груп. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє з високим ступенем вірогідності експериментально відтворити гранулематозне запалення у легенях щурів. 25 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Спосіб моделювання гранулематозного запалення у щурів, що включає одноразове введення у легені щурів суспензії часточок SiO(2) з розрахунку 10 мг на 100 г маси тіла в 0,3 мл фізіологічного розчину, який відрізняється тим, що суспензія часточок SiO(2) вводиться трансторакально. 2 UA 79409 U 3 UA 79409 U 4 UA 79409 U Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5